高效液相色譜分析法測(cè)定食品中5種防腐劑和甜味劑

蔡小欽 譚珊 李紅麗 吳曉琴

本次研究中對(duì)食品中5種添加劑采用液相色譜法檢測(cè)，重點(diǎn)分析色譜條件和其檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性，并構(gòu)建食品添加劑檢測(cè)方法。在本次研究中發(fā)現(xiàn)：液相色譜法的應(yīng)用，能夠同時(shí)實(shí)現(xiàn)食品中的山梨酸、苯甲酸、脫氫乙酸、糖精鈉、安賽蜜的同時(shí)檢測(cè)。測(cè)定條件：色譜柱ZORBAX SB- C18柱分離，甲醇∶0.02 mol/L乙酸銨溶液=5∶95為流動(dòng)相，流速1.0 mL/min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm。5種添加劑為400 μg/mL時(shí)相關(guān)性良好。最小檢出限介于0.196～1.452 mg/kg。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差<5%，回收率>90%，該方法檢測(cè)快捷高效，便于檢測(cè)人員對(duì)食品中5種添加劑含量情況作出快速判斷。

檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法

（1）實(shí)驗(yàn)材料：①實(shí)驗(yàn)原料為市售飲料、調(diào)味品等。②實(shí)驗(yàn)儀器包括安捷倫1260高效液相色譜儀，自動(dòng)進(jìn)樣器，PURELAB flex超純水機(jī)，高速冷凍離心機(jī)，超聲波清洗儀。③主要試劑包括甲醇、乙酸銨、乙酸鋅、亞鐵氰化鉀。標(biāo)本為苯甲酸、糖精鈉、山梨酸、脫氫乙酸（生產(chǎn)廠(chǎng)家德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GmbH，純度=99.9%），安賽蜜（生產(chǎn)廠(chǎng)家德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GmbH，純度=99%）。相關(guān)檢測(cè)中的5種添加劑檢出限分別為：山梨酸線(xiàn)性方程Y=105.276 6X+33.575 0，檢出限為0.42 mg/kg；脫氫乙酸線(xiàn)性方程Y=104.225X+58.798 8，檢出限為0.78 mg/ kg；糖精鈉線(xiàn)性方程Y=67.225X+29.665 6，檢出限為0.65 mg/kg；安賽蜜線(xiàn)性方程Y=38.554 7X+58.224 5，檢出限為0.67 mg/kg；苯甲酸線(xiàn)性方程Y=25.667 1X+103.225 0，檢出限為0.50 mg/kg。

（2）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：①脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。稱(chēng)取脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品0.101 0 g，以NaOH溶液（20 g/L）溶解，得到濃度為1.0 mg/mL的脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。②混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。將含苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉等添加劑的溶液稀釋配制成待用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。③亞鐵氰化鉀溶液。準(zhǔn)備樣品，選取106 g亞鐵氰化鉀，放置在1 000 mL容量瓶中。④乙酸鋅溶液。質(zhì)量為220g，再將其進(jìn)行稱(chēng)取之后放置在1 000 mL容量瓶中。⑤乙酸銨溶液。質(zhì)量為1.54 g，轉(zhuǎn)移至1 000 mL溶液瓶中，對(duì)其實(shí)施經(jīng)抽濾超聲波脫氣，以備使用。

（3）色譜條件：色譜柱選取的是ZORBAX SB- C18柱，柱溫設(shè)置為30 ℃，檢測(cè)選用230nm波長(zhǎng)，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中選取甲醇- 0.02 mol/L乙酸銨溶液為流動(dòng)相。檢測(cè)中的選取樣品10 μL為進(jìn)樣量。

（4）樣品前處理：檢測(cè)中的樣品質(zhì)量為5g，并將其放置在小燒杯中，并向容量為50mL瓶中進(jìn)行轉(zhuǎn)移。在對(duì)燒杯連續(xù)進(jìn)行3次清洗之后，放置到容量瓶中，檢測(cè)過(guò)程中將亞鐵氰化鉀和乙酸鋅一一加入，加入質(zhì)量為3mL，離心處理，吸取上清液濾膜后等待檢測(cè)。

（5）定性定量方法：稀釋配置配制完成的5種添加劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，結(jié)合設(shè)計(jì)需求稀釋到相應(yīng)的濃度。檢測(cè)中從出峰時(shí)間實(shí)現(xiàn)定性，在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作中，橫坐標(biāo)為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，縱坐標(biāo)為峰面積，目標(biāo)樣品物計(jì)算含量為5g。

實(shí)驗(yàn)方法

（1）色譜柱的選擇：本次研究重點(diǎn)分析ZORBA× SB- C18（5 μm，4.6 mm×150 mm）液相色譜柱，ZORBA× SB- C18（5μm，4.6 mm×150 mm）液相色譜柱的分析時(shí)間長(zhǎng)，以上色譜柱的長(zhǎng)度不足，檢測(cè)5種添加劑分離性不夠完善。最終在檢測(cè)中確定色譜柱長(zhǎng)ZORBA×SB- C18柱（5 μm，4.6 mm×150 mm），等待檢測(cè)。

（2）加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)精密度：檢測(cè)對(duì)象選取的市場(chǎng)上的糕點(diǎn)以及飲料，對(duì)其實(shí)施加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。液相色譜檢測(cè)中全部得到良好的回收率，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）值全部在7%以下。不但具有一定精密度，同時(shí)適用范圍也比較廣泛。

（3）基質(zhì)適用性分析：本次檢測(cè)中選用的是市售飲料等典型食品樣品，同時(shí)檢測(cè)以上樣品中的甜味劑以及防腐劑。

實(shí)驗(yàn)討論

首先確定分層提取中的目標(biāo)分析物分配系數(shù)，以能夠保障在液萃取中回收率良好。防腐劑和甜味劑標(biāo)準(zhǔn)品混合溶液需要在檢測(cè)過(guò)程中加入在互相不溶的溶劑中，對(duì)其防腐劑含量采用液相色譜法檢測(cè)，得到了溶液中的分析物濃度比，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)分析物中防腐劑及甜味劑的估算以及分配。對(duì)于食品基質(zhì)中的蛋白質(zhì)雜志采用亞鐵氰化鉀和乙酸鋅溶液進(jìn)行清除，對(duì)檢測(cè)結(jié)果沒(méi)有太大影響力。

在本次實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過(guò)程中，可以對(duì)食品中不同的甜味劑和防腐劑實(shí)現(xiàn)同時(shí)檢測(cè)。在檢測(cè)過(guò)程中對(duì)目標(biāo)物采用液相色譜法，在應(yīng)用中檢測(cè)食品具體較高應(yīng)用范圍，不但具有一定經(jīng)濟(jì)性，而且高效安全，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)食品中防腐劑和甜味劑的同時(shí)檢測(cè)。