ROCK 1蛋白在非小細胞肺癌組織中的表達特點及其臨床意義

余國輝 舒美玲

非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)是最為常見的肺癌類型，流行病學研究顯示NSCLC的發病率可達233-455/10萬人左右[1]，同時在長期吸煙或者特殊的工作生活環境中，NSCLC的發病率可進一步上升。在探討NSCLC的發病機制的過程中可以發現細胞生物學相關因子或者信號通路效應分子的改變，能夠影響癌細胞的增殖、加劇癌細胞的低分化風險，促進癌細胞的凋亡抑制等病理過程，導致惡性腫瘤的發生發展。Rho相關卷曲螺旋形成蛋白激酶1( Rho associated coiled coil forming protein kinase 1, ROCK1)是ROH/ROCK相關信號通路下游因子，其能夠增加肺泡上皮細胞對于肺間質成分的浸潤，促進癌細胞的侵襲及轉移風險的增加，為癌細胞的病理進展提供條件[2-3]。為了進一步揭示ROCK 1蛋白與肺癌的關系，本研究選取本院收集的術后NSCLC患者癌組織標本84例，探討了相關指標的異常表達，旨在揭示其與肺癌患者臨床病理特征的關系，報道如下。

資料與方法

一、一般資料

選取本院收集的術后NSCLC患者癌組織標本84例(癌組織)、40例癌旁組織標本，病例收集時間2016年2月至2017年2月。癌組織標本來源，男50例、女34例，年齡42～79歲，平均56.9±11.0歲，病理學類型：鱗癌54例、腺癌30例，組織學分化：高分化20例、中分化27例、低分化37例，淋巴結轉移55例，TNM分期：Ⅰ期21例、Ⅱ期39例、Ⅲ期24例，吸煙32例。癌旁組織來源，男24例、女16例，年齡42～76歲，平均55.2±10.3歲。兩組患者的年齡、性別比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

二、納入排除標準

1. 納入標準：①肺癌的診斷標準參考衛生部肺癌規范化診治指南(2011)版中的標準；②癌組織標本、癌旁組織(距離腫瘤病灶邊緣3～5 cm的正常組織)標本均來源于手術切除標本；③手術前患者無放化療史、免疫治療史；④患者的資料完整。

2. 排除標準：①發生遠處轉移的肺癌患者；②凝血功能疾病；③伴有其他部位惡性腫瘤。

三、免疫組化染色

病理標本采用石蠟切片，脫蠟至水，采用離子水進行反復洗滌，加入牛奶液體封閉抗體，封閉時間為5 min，加入ROCK1蛋白抗體(鼠來源，ABCUM公司)， 37 ℃ 孵育2 h，采用磷酸鹽緩沖液洗滌3次，滴加熒光染色標記的二抗抗體(購自abcum公司)，37 ℃ 孵育 30 min，加入磷酸鹽緩沖液進行洗滌，采用南京凱基生物制劑公司生產的顯色劑進行顯色，封片，顯微鏡下觀察。

四、結果判斷

免疫組化結果判定：ROCK1蛋白的陽性著色表達于細胞膜、細胞質，呈黃色、棕黃色、褐色表達，①根據著色強度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；②根據陽性細胞比例：陽性細胞數目所占比例≤10%為1分、陽性細胞所占比例11%～50%為2分、陽性細胞數51%～75%為3分、陽性細胞數所占比例>75%為4分，兩種積分相乘總分<3分為陰性、≧3分為陽性。總分<3分： “-”表達；為3～5分，“+”表達；為6～9分，“++”表達；>9分，“+++”表達。

五、統計學方法

結 果

一、兩類組織標本中的ROCK1蛋白陽性表達率比較

肺癌組織中的ROCK1蛋白陽性表達率為70.24%顯著的高于癌旁組織的5.95%，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1兩類組織標本中的ROCK1蛋白陽性表達率比較

圖1免疫組化檢測結果；注：A：癌旁組織，B：肺癌組織(×40)

二、肺癌組織標本中的ROCK1蛋白陽性表達率與患者臨床病理學特征的關系

肺癌組織中的ROCK1蛋白陽性表達率在不同年齡、性別、病理學類型、是否吸煙的患者間比較，差異均不具有統計學意義(P>0.05)；病灶直徑≥3 cm、TNM分期為Ⅲ期、發生淋巴結轉移、組織學低分化患者的ROCK1蛋白陽性表達率分別顯著的高于病灶直徑<3 cm、TNM分期為Ⅰ期+Ⅱ期、未發生淋巴結轉移、組織學高+中分化患者，差異均具有統計學意義(P<0.05)，見圖1、表2。

表2肺癌組織標本中的ROCK1蛋白陽性表達率與患者臨床病理學特征的關系

討 論

肺癌的發病機制較為復雜，但一般認為遺傳因素、腫瘤相關分子生物學蛋白的參與或者環境因素等是促進肺癌發生的重要因素[4-5]。現階段臨床上肺癌的早期診斷不僅缺乏有效而可靠的分子生物學標志物作為相關指標，不僅現階段臨床上肺癌的治療預后評估缺乏可靠的隨訪指標。本研究通過對于相關分子生物學指標的研究，具有下列幾個方面的現實意義：①能夠為臨床上肺癌的腫瘤靶向分子治療提供理論基礎；②能夠為肺癌的早期基礎人群的高危篩查提供依據。

ROCK 1蛋白是ROH/ROCK信號通路的下游信號分子，其結構上包含了多個重復羧基末端結構，能夠在結合糖蛋白配體的基礎上，促進癌細胞DNA轉錄調控的異常[6-7]。基礎方面的研究顯示，ROCK 1蛋白是誘導癌細胞分化誘導因子γ異常表達的主要因素，其對于癌細胞低分化有促進作用，可以降低癌細胞的分化成熟程度，提高癌細胞的侵襲或者轉移風險[8-9]。ROCK 1蛋白已經被證實能夠影響惡性腫瘤細胞對于淋巴結內皮細胞的粘附能力，增加癌細胞通過血管內皮進行轉移的風險。研究認為ROCK 1蛋白的高表達顯著參與了卵巢癌、甲狀腺癌或者乳腺癌等惡性腫瘤的發生過程，并認為高表達的ROCK 1蛋白是反映腫瘤患者遠期不良臨床預后的重要指標[10]。但在肺癌中的研究多數限于其流行病學研究，缺乏對于ROCK 1蛋白的表達與NSCLC的臨床病理特征的相關性研究。

本文通過免疫組化分析研究發現，ROCK1蛋白在肺癌患者組織中的陽性表達率明顯高于癌旁組織，差異具有統計學意義。ROCK1蛋白的高表達提示其可能參與了肺癌的發生發展過程中，異常表達的相關生物學因子可以通過下列幾個方面的途徑，促進肺癌的病理的進展：①ROCK1蛋白能夠增加下游信號通路效應分子如notch或者AKT信號蛋白的高表達，影響到腫瘤微環境的改變，促進腫瘤干細胞活性的維持；②ROCK1蛋白的高表達，能夠影響肺癌細胞DNA的增殖速度和癌細胞周期中G1/S期的比例。Ding 等[11-12]在探討了45例臨床預后較差的肺癌患者的過程中發現，臨床預后越差、病理進程越快，ROCK1蛋白的陽性表達率越高。在免疫組化染色檢測中可以發現，ROCK1蛋白主要定位于癌細胞胞質及細胞間質成分中。高表達的ROCK1蛋白能夠促進腫瘤相關信號通路的傳遞，其次也考慮可能與ROCK1蛋白的表達降低了細胞間質癌細胞間粘附能力有關，從而促進了肺癌的轉移風險。在探討相關臨床病理特征過程中，可以發現在不同的病理類型或者吸煙的人群中，ROCK1蛋白的表達并無統計學差異，提示ROCK1蛋白并不會影響到腺癌或者鱗癌等癌細胞的分化來源。但是在臨床分期較晚或者發生了淋巴結轉移的人群中，ROCK1蛋白的表達陽性率往往較高，考慮可能與下列幾個原因有關[13-14]：①ROCK1蛋白促進了癌細胞對于淋巴結內皮的粘附能力；②ROCK1蛋白能夠促進肺癌細胞對于肺支氣管段或者不同的肺葉組織浸潤，促進了臨床分期的進展。同時ROCK1蛋白與癌細胞分化程度或腫瘤直徑大小的關系，也提示ROCK1與肺癌病情的密切關系。

綜上所述，ROCK1蛋白在NSCLC組織中呈顯著的高表達，并且與腫瘤患者的細胞分化程度、臨床分期等病理特征密切相關。