IgA腎病患者間質病變與T淋巴細胞亞群表達的動態分析

顏兵雪，劉永梅

安徽醫科大學附屬巢湖醫院腎臟內科，安徽巢湖 238000

IgA腎病是全世界范圍內最常見的慢性腎小球腎炎。約占原發性腎小球腎炎的40%～50%[1]。診斷依賴于腎穿刺活檢，病理特征也呈現多種形式。以往IgA腎病的缺乏統一的分級，牛津分型[2]解決了病理指標可重復性的問題，包括：系膜增殖積分(M)、毛細血管內細胞增生性病變(E)、節段性腎小球硬化或球囊粘連(S)、間質纖維化或小管萎縮(T)，從2009年至今，有眾多研究表明新月體(C)是一種有效的預后因素，與腎功能衰竭的進展有關，因此可以納入新的牛津分類法[3]。

該研究2014年1月—2018年5月在該院確診的110例的IgA腎病患者伴有不同程度間質纖維化或小管萎縮，分析其外周血T淋巴細胞亞群的變化情況，以提高我們對疾病的診斷、治療及預后認識。

1 資料與方法

1.1 一般資料

入組病例來源于在該院接受腎活檢確診為IgA腎病的110例患者。均在B超引導下穿刺，要求穿出的腎組織＞10 mm。用于光鏡和免疫組化檢查的標本固定于4%的中性甲醛固定液中，供電鏡檢查的標本用3%的戊二醛溶液固定后置于4%的冰壺中保存，并盡快送檢，24 h內檢查為宜。需排除繼發性腎損害，如系統性紅斑狼瘡、過敏性紫癜、乙型肝炎、肝硬化、實體腫瘤性腎病、血液系統疾病等引起的繼發性腎損害。所有入組的病例排除急性感染且在3個月內未用過激素及免疫抑制劑。根據牛津分型間質纖維化或小管萎縮面積分為T0、T1、T2 3組，其中T0組56例，其中男性26例，女性30例，年齡在24～48歲，平均年齡在（29.4±5.3）歲，病程 2d～3.5 年，平均病程（1.4±0.5）年。T1組36例，其中男性16例，女性20例，年齡在27～75 歲，平均年齡在（42.9±7.3）歲，病程 0.5～4 年，平均病程（2.1±0.3）年。T2組18例，其中男性10例，女性 8 例，年齡在 27～67 歲，平均年齡（39.8±8.2）歲，病程 1.2～3.8 年，平均病程（2.7±0.5）年。3 組人員的性別、年齡、病程等差異無統計學意義（P＞0.05）。受試者均獲得知情同意，并經過倫理委員會批準。

1.2 觀察指標

統計該研究中患者的年齡、性別等一般資料。采用美國BD FACSCanto II流式細胞儀,該實驗均使用BD公司的配套試劑。抽取患者清晨靜脈全血2～3 mL,并用肝素抗凝，取病人全血 50 μL，加抗體 10 μL，混勻，避光 15 min，加入 1∶10稀釋的溶血劑 1 mL，混勻，避光 10 min，然后 5 min后1 500 r/min離心，棄去上清液，加入1 mL PBS后，1 500 r/min離心，棄去上清液，再加入300 μL 1%多聚甲醛固定，在24 h內上機，利用FACS MMCTISET軟件檢測并自動分析淋巴細胞亞群的百分比。對比觀察不同間質病變的IgA腎病患者的CD4+、CD8+T淋巴細胞百分比，以及CD4+/CD8+的變化情況。

1.3 統計方法

使用SPSS 16.0統計學軟件進行統計分析。計量資料用（±s）表示，兩組間比較采t檢驗。多組間的比較采用One-Way ANOVA方差分析，若差異有顯著性，兩組間再用SNK-q進行分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

根據牛津分型不同間質纖維化或小管萎縮面積分為 T0、T1、T2 組 (T0:0%～25%，T1:26%～50%，T2＞50%)。CD4+、CD8+以及 CD4+/CD8+的 Lewene檢驗均顯示 （P＞0.05）。 CD4+/CD8+在 T0、T1 組，T1、T2 組，T0、T2組之間均差異有統計學意義。并隨著間質病變的加重而動態變化。見表1。

表1 不同間質纖維化或小管萎縮(T)面積的T淋巴細胞亞群的比較（±s）

表1 不同間質纖維化或小管萎縮(T)面積的T淋巴細胞亞群的比較（±s）

組別 CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+T0（n=56）T1（n=36）T2（n=18）F值P值36.52±5.46 39.31±5.05 42.08±5.97 8.005 0.001 23.96±2.24 23.38±2.12 22.71±1.70 2.591 0.080 1.53±0.25 1.70±0.30 1.86±0.32 10.646 0.000

3 討論

研究證實IgA腎病是自身免疫性疾病，血清多聚IgAl(pIgAl)的增多及糖基化的結構缺陷是導致IgA腎病發生發展的重要因素[4]。輔助性T細胞主要表面標志是CD4，具有協助細胞免疫和體液免疫的功效，細胞毒性T細胞主要表面標志是CD8，可特異性殺傷靶細胞，機體免疫系統平衡的維持靠兩大細胞亞群相互作用，產生相對平衡的免疫應答[5]。T淋巴細胞亞群是臨床上最常用的反應免疫狀態的臨床指標，CD4+、CD8+，以及CD4+/CD8+的異常，提示免疫功能的異常。CD4+T細胞可調節抗體的產生，包括IgA，推測系統性歸巢CD4+T可能直接導致IgA腎病中pIgA的產生[6]。CD8+T細胞的細胞毒作用，再加上活化巨噬細胞的細胞毒反應，可能導致加速腎小球和間質的損傷。

研究表明淋巴細胞數量和類型影響IgA腎病的間質纖維化和小管萎縮的進展。國內葉寒青等人[7]研究82例IgA腎病有間質纖維化和小管萎縮改變者的CD4+/CD8+（1.84±0.82） 明顯高于 健 康對照組的（1.36±0.40）。該實驗的研究表明IgA腎病小管萎縮或間質纖維化越嚴重的患者CD4+/CD8+值越高，與其基本相符。楊森等[8]報道IgA腎病患者有較高的CD4+絕對值和較低或無明顯變化的CD8+絕對值。弓玉祥等人[9]研究腎間質中淋巴細胞的浸潤情況，結果表明在高倍鏡下T1、T2、T3組的CD4+細胞數分別為（10.28±8.01）%、（25.33±2.82）%、（38.01±8.65）%，CD8+細胞數分別為 （11.62±6.07）%、（25.78±7.82）%、（72.60±16.08）%，T1和 T2組的 CD4+、CD8+細胞數高于 T0組，T2組的CD4+、CD8+細胞數又高于T0組，該研究是外周血中的淋巴細胞表達情況，該研究3組之間CD4+%的均值不全相等，T1和T2組的CD4+高于T0組，但T1、T2組的CD4+差異無統計學意義。3組之間的CD8+無統計學意義。與二人研究結果有區別。眾多研究表明IgA腎病牛津分型中小管萎縮或間質纖維化對腎臟不良預后具有獨立的檢測價值[10]。IgA腎病患者T淋巴細胞計數在不同程度的間質纖維化或小管萎縮呈現動態變化，且這種變化跟疾病嚴重程度有關。隨著間質纖維化或小管萎縮面積的增大，發生終點事件的概率逐漸增高。國外已有研究證實IgA腎病的發病與主要組織相容性復合體有關(MHC),Kurtulus等[11]報道，CD4+細胞可能通過識別腎小管上皮細胞上的MHCⅡ類抗原釋放細胞因子IFN-γ、TNF-β、IL-3、TGF-β導致間質纖維化，從而影響IgA腎病的進展。Meng XM等[12]指出抑制TGF-β1/Smad信號通路，可以防止或減慢慢性腎臟病的纖維化。幾乎所有的免疫細胞類型：調節性T細胞、B淋巴細胞和Th細胞參與了這一過程，和受損的內源性腎細胞一起，釋放各種細胞因子，如TGF-β1，是導致腎纖維化的核心驅動力[13]。

未來若能找到調節和干預IgA抗體產生的方法，以及阻斷或延緩間質纖維化或小管萎縮的途徑，將降低IgA腎病患者或延緩終末期腎病發生的概率。