Mer受體酪氨酸激酶蛋白在胃癌組織中的表達及意義

董娟娟,胡顯橋

(1.成都市龍泉驛區第一人民醫院 病理科，四川 成都 610100;2.成都市龍泉驛區第一人民醫院 普外科，四川 成都 610100)

全球范圍內胃癌位居惡性腫瘤的第4位，2013年我國胃癌死亡人數約為30.1萬，病死率為22.13/10萬[1-2]。目前，尋找癌癥標志物是基礎研究和臨床研究中廣泛關注的話題。Mer受體酪氨酸激酶(MerTK)是TAM(Tyro3/Axl/Mer)受體酪氨酸激酶家族成員之一，表達于巨噬細胞、神經細胞和NK細胞。與生長阻抑特異性蛋白6和蛋白S結合后，可識別凋亡細胞表面的磷脂酰絲氨酸。另外，MerTK可以通過自身磷酸化參與吞噬凋亡細胞的過程[3-4]。既往研究發現，MerTK在肺癌、結腸癌等癌組織中高表達[5]，但是關于胃癌的報道較少。體外研究發現，MerTK可以促進胃癌細胞株sgc-7901增殖、抑制凋亡的發生[6]。本文采用免疫組化法檢測胃癌組織中MerTK蛋白的表達，旨在評估MerTK在胃癌組織和正常胃黏膜組織中表達的差異，并分析MerTK激活與胃癌患者病理特征和預后的關系。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 收集2014年1月至2017年4月在我院診治的胃癌患者121例，所有腫瘤均經過病理組織活檢，術前均未接受任何形式的治療。術中共獲得121例胃癌組織標本和67例癌旁組織標本。癌旁組織標本定義為距癌癥病灶5 cm的組織[7]。所有標本均用10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，5 μm厚連續切片。121例患者中男性95例，女性26例；年齡35～80歲，平均(60.2±6.4)歲；腫瘤最大直徑0.5～13 cm，平均(4.7±1.0) cm；賁門癌35例，非賁門癌86例；TNM分期：T115例，T228例，T329例，T449例，N051例，N116例，N226例，N328例；胃癌分期：Ⅰ期30例，Ⅱ期33例，Ⅲ期58例。

1.2 試劑 兔抗人MerTK抗體購于上海生物工程有限公司(貨號AP7662a)；SP免疫組化檢測試劑盒購于上海麥約爾生物有限公司(目錄編號:YM-BM1948)。

1.3 方法 采用免疫組化SP法檢測胃癌組織和癌旁組織MerTK蛋白的表達[6]。顯微鏡下觀察，以細胞核和胞漿出現棕黃色顆粒為陽性。陽性細胞百分比評分：無陽性細胞記為0分，陽性細胞百分率≤50%記1分，51%～75%記2分，≥75%記3分；細胞核和胞漿染色評分：胞漿或胞核不著色0分、色淡1分、色適中2分、色深3分。每張切片的陽性細胞百分率得分和染色程度得分兩項相加作為最后得分。總分為0～1分記為陰性(-)，2～3分記為弱陽性(+)，4～5分記為陽性(++)，6分以上記為強陽性(+++)，以陰性至弱陽性為低表達，陽性至強陽性為高表達[8]。

2 結果

2.1 MerTK蛋白表達 121例胃癌組織中MerTK蛋白高表達49(40.5%)例，低表達72(59.5%)例，MerTK蛋白主要表達于細胞質。而在癌旁組織中，MerTK蛋白為低表達(100.0%，見表1，圖1)。

A:癌旁組織表達陰性；B：胃癌組織表達強陽性，SP法×100。圖1 MerTK蛋白的表達強度

表1 MerTK蛋白的表達強度[例(%)]

項目例數MerTK-++++++胃癌組織12112(9.9)60(49.6)39(32.2)10(8.3)癌旁組織6720(29.9)47(70.1)0(0) 0(0)

2.2 MerTK蛋白表達與胃癌患者病理指標的關系 MerTK蛋白表達與胃癌患者的年齡、腫瘤大小、腫瘤Lauren分型、遠處轉移和TNM分期有關(P<0.05，見表2)。多因素分析結果顯示，年齡(>60歲)、腫瘤Lauren分型(彌漫型)、遠處轉移和TNM分期(Ⅲ期)是MerTK蛋白高表達的獨立影響因素(P<0.05，見表3)。

表2 MerTK蛋白表達與胃癌患者病理指標的單因素分析[例(%)]

病理參數例數低表達(n=72)高表達(n=49)χ2 P 年齡(歲) ≤605139(54.2)12(24.5)10.5310.001 >607033(45.8)37(75.5)性別 男9555(76.4)40(81.6)0.4750.491 女2617(23.6)9(18.4)腫瘤部位 胃近端2011(15.3)9(18.4)0.8300.660 胃中端6638(52.8)28(57.1) 胃遠端3523(31.9)12(24.5)腫瘤直徑(cm) ≤55340(55.6)13(26.5)9.9790.002 >56832(44.4)36(73.5)腫瘤Lauren分型 腸型5040(55.6)10(20.4)14.885<0.001 彌漫型7132(44.4)39(79.6)組織類型 乳頭狀腺癌104(5.6)6(12.2)0.2450.970 管狀腺癌6045(62.5)15(30.6) 黏液腺癌219(12.5)12(24.5) 印戒細胞癌3014(19.4)16(32.7)分化程度 高1710(13.9)7(14.3) 中3521(29.2)14(28.6)1.3250.357 低6840(55.6)28(57.1) 其他11(1.4)0(0)浸潤深度 T1+T24325(34.7)18(36.7)1.8400.606 T3+T47847(65.3)31(63.3)淋巴結轉移 是6322(29.7)41(83.7) 否5850(70.3)8(16.3)遠處轉移23.963<0.001 是5340(55.6)13(26.5) 否6832(44.4)36(73.5)TNM分期9.9790.002 Ⅰ+Ⅱ6345(62.5)18(36.7) Ⅲ5827(37.5)31(63.3)

表3 MerTK蛋白表達與胃癌患者病理指標的多因素分析

參數BSEWaldP OR95%CI年齡(>60歲)5.2642.3542.0120.0372.1571.578～3.012Lauren分型(彌漫型)3.2482.0583.0110.0251.8941.987～2.341遠處轉移6.0143.1464.0210.0132.3481.024～4.357TNM分期(Ⅲ期)6.0842.7042.0080.0341.1691.444～3.647

B：截距；SE：標準誤；Wald：卡方值；OR：比值比；CI:可信區間。

2.3 隨訪情況 所有患者均隨訪至2018年4月，隨訪時間為9～39個月，中位隨訪時間為36.5個月。隨訪期間有11例胃癌患者死亡，均是由于腫瘤復發。

2.4 MerTK蛋白與生存預后的關系 以整組中位數作為中值進行分組， 胃癌患者的預后和MerTK蛋白表達強度及MerTK蛋白染色積分有關(P<0.05)。多因素分析發現，MerTK蛋白的表達強度是胃癌患者死亡的獨立危險因素(P<0.05，見表4)。

MerTK蛋白低表達患者的2年生存率為63.6%，明顯高于高表達患者，差異有統計學意義(χ2=8.574，P=0.003)。進一步Kaplan-Meier分析發現，MerTK蛋白低表達的Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期胃癌患者的生存率分別為86.5%、61.3%和40.1%，均高于高表達患者的55.4%、31.7%和9.0%，差異有統計學意義(χ2=32.547，P<0.001；χ2=20.647，P<0.001；χ2=29.147，P<0.001)。

表4 MerTK蛋白與生存預后的關系[n(%)]

項目例數2年生存期死亡(n=11)生存(n=110)χ2PMerTK蛋白表達強度 低表達722(18.2)70(63.6)8.5740.003 高表達499(81.8)40(36.4)MerTK蛋白染色陽性率 ≤中值603(27.3)57(51.8)2.410.121 >中值618(72.7)53(48.2)MerTK蛋白染色積分 ≤中值703(27.3)67(60.9)4.640.031 >中值518(72.7)43(39.1)

3 討論

Bang等[9]發現化療聯合赫賽汀治療HER2陽性的胃癌可延長患者的生存時間，這顯示了分子靶向治療的優勢。因此尋找胃癌的生物標志物和治療靶點已成為胃癌診治的熱點話題。MerTK是TAM受體酪氨酸激酶家族成員之一，參與了細胞凋亡等生理過程[10]。既往研究發現，MerTK在白血病、非小細胞肺癌、膠質母細胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、乳腺癌、結腸癌、胃癌、垂體腺瘤和橫紋肌肉瘤等癌組織中高表達[5,11-12]，但是關于胃癌的報道較少。本研究發現，胃癌組織中MerTK蛋白表達水平明顯升高，且MerTK蛋白的高表達與胃癌的不良預后有關。

本研究檢測了121例胃癌組織樣本，發現MerTK蛋白高表達占40.5%，這說明MerTK作為胃癌生物標志物的價值可能并不是很大。Yi等[6]回顧性分析了192例胃癌患者，其中有16例患者表現出MerTK蛋白強陽性表達。本研究發現，年齡(>60歲)、腫瘤Lauren分型(彌漫型)、遠處轉移和TNM分期是MerTK蛋白高表達的獨立影響因素。另外，MerTK高表達患者的死亡率較MerTK低表達患者高。這就提示高齡、彌漫型胃癌、有遠處轉移和TNM分期為Ⅲ期的患者預后較差，而MerTK蛋白可能為中介因素。既往研究發現，彌漫型胃癌、有遠處轉移、TNM分期為Ⅲ期是影響胃癌患者5年生存率的高危因素[13-15]，因此這類患者是臨床上重點關注的對象。

MerTK影響胃癌患者預后的機制目前尚未明了，Kim等[16]對10個胃癌細胞系進行研究，發現MerTK過表達可以激活下游ERK和AKT的磷酸化，RXDX-106作為MerTK抑制劑或可作為治療胃癌的新藥物。既往一項綜述表明，MerTK可通過激活MAPK、JAK/STAT、FAK/RhoA/MLC2等通路調控癌癥的表達和侵襲等[5]。

MerTK蛋白的表達與腫瘤放化療的療效有關，Xie等發現，MerTK表達水平的升高與埃羅替尼的抗藥性有關[17]。另外，還有學者發現，接受放療患者的癌組織中單核細胞MerTK蛋白表達量升高，MerTK可能是一個特異性放療靶點[18-19]。

本研究的局限性為：①本研究為回顧性研究，未來需要開展前瞻性研究，以明確MerTK在胃癌預后中的作用；②本研究隨訪時間相對較短，未來需要探討MerTK的表達對胃癌患者5年生存率的影響；③未對MerTK對胃癌影響的機制進行研究，這也是本研究以后研究的方向。

綜上，年齡(>60歲)、腫瘤Lauren分型(彌漫型)、遠處轉移和TNM分期(Ⅲ期)是MerTK蛋白高表達的獨立影響因素。胃癌組織MerTK蛋白的高表達與患者預后有關。