SAP 患者 PTX3、TFPI、mIR-21 的表達變化及與患者炎癥反應(yīng)的關(guān)系

張海波，王少芳，黃宏春，王秀敏

(1.安陽市人民醫(yī)院消化內(nèi)科；2.安陽市人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，河南 安陽 455000)

急性重癥胰腺炎（SAP）、輕癥胰腺炎（MAP）等均是臨床上較為常見的疾病，流行病學(xué)研究顯示，胰腺炎的發(fā)生率可達233～455/10萬人[1]，在合并有膽道系統(tǒng)疾病的人群中，胰腺炎發(fā)病率具有進一步上升的趨勢。在探討胰腺炎病情進展機制的過程中發(fā)現(xiàn)，生物學(xué)因子改變可以進一步加重病情，導(dǎo)致患者病死率顯著上升[2]。正五聚蛋白3（PTX3）是重要的炎癥蛋白，其表達水平改變能夠促進下游糖蛋白因子的激活，從而激活炎癥信號通路[3]。組織因子途徑抑制劑（TFPI）能夠通過促進自身免疫因子或者趨化因子的過度激活，增加自身免疫性損傷的發(fā)生[4]。miR－21作為重要的非編碼Rna因子，其濃度改變能夠增加患者自身組織器官的炎癥因子浸潤，促進自身消化酶的釋放[5]。本研究即選取我院消化內(nèi)科收治的118例急性胰腺炎患者，探討相關(guān)血清學(xué)指標(biāo)如 PTX3、TFPI、mIR－21的表達變化及其與患者的病情關(guān)系，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年3月至2017年5月我院消化內(nèi)科收治的118例急性胰腺炎患者作為研究對象，其中SAP患者43例（SAP組）、MAP患者75例（MAP組），再另選取同期健康對象60例作為對照組。SAP組，男28例，女15例；年齡22～63 歲，平均 41.6±14.1 歲；白細胞計數(shù)（18.3±3.4）×109/L；Ranson 評分 3.82±0.56 分。MAP 組， 男 38例，女 22 例；年齡 20～65 歲，平均 39.5±15.0 歲；白細胞計數(shù)（14.2±2.6）×109/L；Ranson 評分 2.51±0.64分。對照組，男35例，女25例；年齡24～60歲，平均 39.2±13.0歲。三組研究對象年齡、性別比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 急性胰腺炎患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《中國急性胰腺炎診治指南》、《重癥急性胰腺炎診治指南》中的標(biāo)準(zhǔn)；年齡19～65歲；獲得研究對象的知情同意。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 合并肝腎功能疾病；合并惡性腫瘤；合并凝血系統(tǒng)疾病；合并精神疾病、認知功能障礙；具有腦血管病史。

1.3 檢測方法 采集空腹靜脈血約5ml，自然凝固后3000r/min離心10min，取上清采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清PTX3、TFPI、IL－6、IL－8 及 TNF－α 水平，檢測試劑盒購自北京中杉金橋生物有限公司，具體檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書進行操作。miR－21檢測方法如下：采集患者的靜脈血5ml，加入 0.2ml氯仿，2～8℃冰凍離心機中離心(12000g/min，15min)，反復(fù)一次洗滌 RNA，棄上清，在管底部可見一乳白色小沉淀物，加入1ml 75%乙醇，0.1%DEPC水溶解。加入miR－21及GAPDH上下游引物、0.1%DEPC 使其終濃度均為 20pmol/ul，制備反應(yīng)體系，RT－PCR擴增的條件與參數(shù)：48℃，45min，94℃，2min；94℃ 30s，58℃ 60s，68℃ 2min 共40個循環(huán)；循環(huán)完畢后68℃延伸7min。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 計量資料采用（x±s）表示，三組之間計量資料比較采用單因素方差分析、組間兩兩比較采用LSD－t檢驗；相關(guān)性分析采用Pearosn線性相關(guān)分析法；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組研究對象血清 PTX3、TFPI、miR－21 水平比較 SAP組患者血清 PTX3、TFPI、miR－21水平均顯著高于 MAP 組、對照組（P＜0.05），MAP 組血清 PTX3、TFPI、miR－21 水平均顯著高于對照組（P＜0.05），見表 1。

表1 三組研究對象血清PTX3、TFPI、miR-21水平比較（x±s）

2.2 三組研究對象血清 IL－6、IL－8、TNF－α 水平比較 SAP 組患者血清 IL－6、IL－8、TNF－α 水平均顯著高于 MAP 組、對照組（P＜0.05），MAP 組血清 IL－6、IL－8、TNF－α 水平均顯著高于對照組 （P＜0.05），見表2。

表2 三組研究對象的血清IL-6、IL-8及TNF-α水平比較（x±s）

2.3 SAP 患者血清 PTX3、TFPI、miR－21 與炎癥指標(biāo)的相關(guān)性分析 SAP組患者血清 PTX3、TFPI、miR－21 與其血清 IL－6、IL－8、TNF－α 水平均顯著正相關(guān)（P＜0.05），見表 3。

表3 SAP患者血清PTX3、TFPI、miR-21與炎癥指標(biāo)的相關(guān)性分析

3 討論

胰腺炎特別是SAP的遠期生存指標(biāo)較差，五年生存率不足35%，病死率可達15%以上[6]。通過早期診斷、早期治療，可以提高SAP的病情緩解率，降低其病死率，從而改善遠期臨床預(yù)后。盡管如此，現(xiàn)階段臨床上缺乏可靠的實驗室指標(biāo)用于SAP診斷，本研究通過對血清學(xué)指標(biāo)的探討，希望可以為后續(xù)臨床上SAP診斷、病情評估提供依據(jù)。

PTX3可以通過誘導(dǎo)下游細胞炎癥因子如IL－6、IL－10等的表達，進而促進巨噬細胞、單核細胞對胰腺細胞膜的浸潤或者損傷[7]。PTX3在促進氧化應(yīng)激損傷或者加劇細胞膜不穩(wěn)定性等方面發(fā)揮了重要作用。基礎(chǔ)研究也顯示，PTX3可以通過影響細胞膜上鈣離子通道的開放，增加胰腺組織鈣負荷[8，9]。TFPI可以誘導(dǎo)CD4+T淋巴細胞發(fā)生免疫缺陷，導(dǎo)致胰腺組織局部免疫功能下降，從而加重炎癥反應(yīng)[10，11]。 mIR－21不僅在多種惡性腫瘤或者感染性疾病的發(fā)生過程中發(fā)揮了重要作用，同時近年來相關(guān)基礎(chǔ)方面的研究顯示，mIR－21還能夠調(diào)控局部胃腸激素，進而影響導(dǎo)管內(nèi)消化酶的分泌速度，增加導(dǎo)管張力[12]。

本研究發(fā)現(xiàn)，SAP組患者血清 PTX3、TFPI、miR－21水平均顯著高于MAP組、對照組 （P＜0.05），MAP 組血清 PTX3、TFPI、miR－21 水平均顯著高于對照組（P＜0.05），這提示 PTX3、TFPI、miR－21在急性胰腺炎發(fā)生、發(fā)展過程中均可能發(fā)揮了一定的作用。研究發(fā)現(xiàn)，血清PTX3高表達不僅可以改變患者體內(nèi)組織蛋白酶的活性，促進下游炎癥蛋白信號通路的激活，增加炎癥因子在腹膜或者胰腺間質(zhì)組織中的播散速度，而且還可以促進患者體內(nèi)的組織因子的表達，增加單核細胞、巨噬細胞對胰腺組織的浸潤，導(dǎo)致胰腺消化酶的過度釋放[13，14]。 Nieminen A 等[15]報道，胰腺炎患者血清TFPI水平上升幅度可達24%以上，并且患者腹腔內(nèi)感染越為嚴重，其波動幅度越高。血清miR－21高表達不僅能夠影響氧化應(yīng)激過程，同時還能夠影響到谷胱甘肽芳基轉(zhuǎn)移酶等的活性，導(dǎo)致氧化自由基對于胰腺組織的損傷[12]。

IL-6、IL-8及TNF-α等是評估患者體內(nèi)炎癥因子活性的重要指標(biāo)，這些細胞因子高表達可以增加患者感染性休克、多器官功能衰竭的發(fā)生風(fēng)險。本次研究中，SAP組患者血清 IL-6、IL-8、TNF-α 水平均顯著高于 MAP 組、對照組（P＜0.05），MAP組血清IL-6、IL-8、TNF-α水平均顯著高于對照組（P＜0.05），并且 SAP 組患者血清 PTX3、TFPI、miR-21與其血清 IL-6、IL-8、TNF-α水平均顯著正相關(guān)（P＜0.05），這一步提示了血清 PTX3、TFPI、miR-21等與胰腺炎患者病情的關(guān)系。綜上所述，SAP患者血清PTX3、TFPI、miR-21水平較MAP及健康人群升高更加顯著，并且與炎癥反應(yīng)程度加重有關(guān)。