結直腸癌患者MMRP、BS69、Id-2水平表達及與病理特征的關系

肖艷景，白慧麗，趙紅梅，婁欣

(鄭州大學附屬鄭州中心醫院病理科，河南 鄭州 450003)

結直腸癌在相關高危人群中的發病率明顯的上升，流行病學研究證實，結直腸癌的發病率可超過252～363/10萬人左右[1]。臨床上結直腸癌的發生，可以導致患者生存質量的下降并增加患者的致殘率[2]。

腫瘤相關蛋白的表達能夠影響癌細胞的生物學特征，導致癌細胞的浸潤能力或者增殖特性的改變。 錯配修復（mismatch repair，MMR）蛋白的表達能夠提高癌細胞的核DNA的增殖速度，導致癌細胞的擴增速度的增快[3，4]；分化抑制因子ID－2能夠抑制癌細胞的分化成熟，導致癌細胞的分化成熟障礙，并能夠促進低分化或者中分化的形成，導致患者細胞病理學的改變[5]；轉錄抑制因子BS69的表達能夠穩定癌細胞的生物學特性，降低癌細胞的轉錄活性，降低癌細胞的持續性增殖的風險[6]。為了揭示 MMRP、BS69、Id－2 水平變化與結直腸癌患者病理特征的關系，從而為臨床上結直腸癌患者的病情評估或者遠期預后提供參考，本次研究收集了相關生物學指標，探討了MMRP、BS69、Id－2水平與結直腸癌的臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年3月至2017年10月我院收治的60例結直腸癌患者作為研究對象，其中男 26 例，女 34 例，平均年齡(47.16±5.29)歲，其中高分化11例，中分化35例，低分化14例；TNM分期I期11例，Ⅱ期13例，Ⅲ期24例，Ⅳ期12例。

1.2 納入排除標準

1.2.1 納入標準 ①術前未接受放、化療者；②術后病理證實為結直腸癌的患者；③患者、家屬知情同意。

1.2.2 排除標準 ①合并惡性腫瘤或嚴重血液系統疾病的患者；②妊娠期、哺乳期婦女；③精神病患者。

1.3 觀察指標及檢查方法 采用免疫組化法檢測MMRP、BS69、Id－2 蛋白在結直腸癌組織中的表達。將樣本連續切片后，進行免疫組化檢測。將切片脫蠟至水，10ml 3%過氧化氫封閉，8ml檸檬酸緩沖液進行抗原修復操作，反應5min，選用10%羊血清封閉10min，一抗，4℃溫箱過夜，取出后復溫30min，二抗，反應30min，磷酸鹽緩沖液洗滌，脫水封片，鏡檢。

1.4 統計學方法 選用SPSS 18.0分析處理數據，計量資料采用均數±標準差描述，計數資料采用卡方檢驗；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MMRP、BS69、Id－2 在不同結直腸組織中表達MMRP、Id－2在結直腸癌組織中的陽性表達率（88.33% 、61.67% ） 明 顯 高 于 癌 旁 正 常 組 織（61.67%、33.33%），BS69 在結直腸癌組織中的陽性表達率 （70.00%）明顯低于癌旁正常組織（93.33%），差異有統計學意義（P＜0.05）。 見表 1。

2.2 癌組織中MMRP的表達與臨床病理特征的相關性分析 癌組織中MMRP的表達與性別無相關性。MMRP在年齡≥59歲、直腸部位、TNMⅢ期和Ⅳ期、中、低分化結直腸癌患者中的表達高于59歲、左右結腸部位、TNM I期和Ⅱ期、高分化的結直腸癌患(P＜0.05)。 見表 2。

2.3 癌組織中BS69的表達與臨床病理特征的相關性分析 癌組織中BS69表達在年齡、腫瘤部位、性別等方面差異無統計學意義 （P＞0.05）；BS69 在組織學分級Ⅰ、Ⅱ級、無淋巴結轉移和Dukes分期A、B期患者中的表達高于組織學分級Ⅲ級、有淋巴結轉移和Dukes分期C、D期的患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。 見表 3。

2.4 癌組織中Id－2的表達與臨床病理特征的相關性分析 癌組織中Id－2陽性表達在性別、年齡、病理類型等方面差異均無統計學意義 （P＞0.05)，Id－2在TNMⅢ期和Ⅳ期、有淋巴結轉移、低分化結直腸癌患者中的表達高于TNM I期和Ⅱ期、無淋巴結轉移、高、中分化的結直腸癌患者(P＜0.05)。 見表 4。

2.5 三種蛋白在癌組織中表達的相關性 三者Spearman相關性分析顯示：MMRP與BS69和Id－2蛋白表達陽性率呈正相關關系 （r=0.429和 r=0.417，P＜0.05）。 見表 5。

表1 MMRP、BS69、Id-2在不同結直腸組織中表達

表2 癌組織中MMRP的表達與臨床病理特征的相關性分析

表3 癌組織中BS69的表達與臨床病理特征的相關性分析

表4 癌組織中Id-2的表達與臨床病理特征的相關性分析

表5 三種蛋白在癌組織中表達的相關性

3 討論

環境因素、遺傳因素等，均能夠影響結直腸癌的發生，促進結直腸癌臨床病理特征的進展[7]。作為消化系統常見的惡性腫瘤，結直腸癌的無瘤生存時間不足38個月，包括手術在內的相關綜合性治療措施治療后的3年內病死率仍然超過35%[8，9]。另外一方面，現階段臨床上缺乏對于結直腸癌早期診斷的有效生物學血清分子，而本次研究通過探討揭示了腫瘤相關蛋白表達問題的研究，可以為揭示結直腸癌的發生機制提供參考，并能夠為結直腸癌的免疫靶向治療提供基礎，為結直腸癌的早期高危人群的血清學篩查提供依據。

生物學因子的濃度波動，能夠在促進腫瘤細胞的早期核異型性的發生，或者中晚期臨床病理特征進展過程中發揮重要的作用。其能夠調控癌細胞的生物學特性，干預癌細胞的擴散和轉移等，進而影響患者的整體生存預后。MMRP是重要的信號通路激活因子，其對于HIPPO信號通路的激活作用，能夠提高結直腸癌上皮細胞核DNA的轉錄風險，導致啟動子和增強子的激活，增加癌細胞的調控異常風險。同時MMRP的表達能夠影響癌基因的錯配修復的能力，導致錯配修復能力的下降，增加了癌基因的突變風險[10]；BS69蛋白能夠與結直腸癌細胞膜內的轉錄基因的結合，促進其甲基化的修飾，抑制癌細胞的轉錄過程，降低癌相關蛋白的轉錄及翻譯的活性；Id-2能夠抑制癌細胞的分化成熟，降低癌細胞的分化成熟能力，導致癌細胞的低分化的形成[11]。部分研究探討了在結直腸癌患者病灶組織中MMRP的表達情況，認為MMRP的表達陽性率的上升是促進結直腸癌患者臨床預后惡化的重要風險因素[12]，但對于ID-2或者BS69的分析研究不足。

免疫組化分析研究發現，MMRP、BS69、Id-2的表達均具有明顯的差異，其中MMRP及Id-2的表達陽性率均明顯的上升，高于癌旁組織，而BS60的表達陽性率明顯低于癌旁組織，提示MMRP、BS69、Id-2均能夠影響到惡性腫瘤的發生過程。臨床病理特征的研究發現，MMRP在年齡≥59歲、直腸部位、TNMⅢ期和Ⅳ期、中、低分化結直腸癌患者中的表達陽性率明顯的上升，提示了MMRP蛋白對于患者腫瘤臨床分期或者癌細胞分化程度的影響，回顧國內外相關文獻，筆者認為這主要考慮與下列幾個方面的因素有關：⑴MMRP的上升能夠降低癌細胞基因錯配修復能力，導致癌基因突變后的切除修復或者重組修復能力的下降；⑵MMRP的表達上升還能夠影響癌細胞的增殖速度，導致癌細胞的浸潤能力的增加。馬賽等[13]研究者揭示了在結腸癌患者病灶組織中的MMRP蛋白的高表達現象，認為MMRP的表達陽性率可平均上升20%以上，特別是在腫瘤進展速度較快、臨床分期較晚的人群中，MMRP的表達陽性率可進一步的上升。BS69作為轉錄抑制因子，其表達濃度的改變能夠影響到癌細胞的轉錄活性，導致癌細胞的轉錄活性的下降和增殖速度的下調，本次研究中BS69在組織學分級Ⅰ、Ⅱ級、無淋巴結轉移和Dukes分期A、B期患者中的表達強度明顯的上升，提示了BS69與結直腸癌患者臨床病理特征的關系，這主要由于BS69能夠影響到癌細胞的轉錄因子的活化程度，影響到轉錄上游增強子的調控效果，降低轉錄或者翻譯的活性及速度。但陳爾飛等[14]研究者并不認為BS69與腫瘤患者的淋巴結轉移具有一定的關系，而本次研究的相關結論與陳爾飛等存在一定差異，考慮可能與BS69蛋白的檢測敏感性或者結直腸癌患者的淋巴結浸潤的檢出靈敏度的差異有關。最后，本次研究探討了ID-2的表達與結直腸癌患者的臨床病理特征的關系，發現Id-2在TNMⅢ期和Ⅳ期、有淋巴結轉移、低分化中的表達陽性率明顯的上升，這主要由于ID-2的表達能夠影響到癌細胞的誘導分化成熟能力有關。相關關系分析也可見，MMRP與BS69和Id-2蛋白的表達具有密切的關系，但具體的機制不清，后續臨床研究可以進一步探討MMRP的表達與BS69等的內在關系[15]。

綜上所述，結直腸癌患者中MMRP、ID-2及BS69的表達與結直腸癌患者的臨床病理特征有一定相關性，且三種蛋白表達呈正相關。