T淋巴細(xì)胞亞群及血清CXCL10、CXCR3在干燥綜合征患者中的水平變化及臨床意義

趙嘉英，黃松濤，李青，嚴(yán)宏莉，陳利華，胡倩，陳飛

(廣安市人民醫(yī)院，四川廣安 638500)

干燥綜合征是臨床常見的一種自身免疫性疾病，女性為主要發(fā)病群體，并呈逐年增長趨勢，其以口干、眼干為主要臨床癥狀，還可累及肺、神經(jīng)系統(tǒng)等多種器官，導(dǎo)致患者生存質(zhì)量明顯下降[1]。但干燥綜合征初期癥狀輕微，無明顯特異性，診斷準(zhǔn)確率較低，易延誤最佳治療時機，因此早發(fā)現(xiàn)、早治療對緩解患者臨床癥狀，延緩病情進(jìn)展具有積極意義。近年來研究顯示，干燥綜合征患者T淋巴細(xì)胞亞群存在異常，可影響疾病進(jìn)展[2]。另有研究顯示，CXC趨化因子配體10(CXCL10)及趨化因子受體3(CXCR3)參與了狼瘡腎炎、特發(fā)性關(guān)節(jié)炎等多種自身免疫性疾病進(jìn)展[3,4]。因此，本研究觀察了干燥綜合征患者T淋巴細(xì)胞亞群及血清CXCL10、CXCR3水平變化情況，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年4月～2018年5月本院收治的75例干燥綜合征患者作為觀察組，其中男14例、女61例，年齡32～71(46.92±6.17)歲，病程1～5(2.37±0.45)年；BMI 18～29(22.05±3.71)kg/m2。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者經(jīng)診斷符合中華醫(yī)學(xué)會風(fēng)濕病學(xué)分會制定的有關(guān)干燥綜合征的診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]；均為首次確診；近3個月未服用激素或免疫制劑。排除標(biāo)準(zhǔn)：有腮腺、頜下腺急慢性炎癥或腫瘤病史者；有頭頸部放化療史者；有淋巴瘤史者；合并心肝腎等其他嚴(yán)重疾病者；妊娠期及哺乳期婦女；臨床資料不完整及不配合檢查者。同時，選取同期于本院進(jìn)行體檢的健康人員61例作為對照組，經(jīng)診斷無任何自身免疫性疾病，其中男12例、女49例，年齡35～68(45.37±6.84)歲，BMI 18～30(21.43±3.28)kg/m2。兩組性別、年齡、BMI等基本資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者及家屬簽訂知情同意書。

1.2 T淋巴細(xì)胞亞群檢測 采用美國貝克曼庫爾特有限公司流式細(xì)胞儀檢測所有受試者外周血T淋巴細(xì)胞亞群，應(yīng)用雙色流式細(xì)胞法檢測CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+CD8+、CD4+CD28+及CD8+CD28+T細(xì)胞。

1.3 血清CXCL10、CXCR3水平檢測 所有受試者于清晨空腹收集外周靜脈血4 mL，離心并分離血清，采用ELISA法檢測血清CXCL10、CXCR3水平。試劑盒由上海浩本生物科技有限公司提供，并嚴(yán)格按照說明書操作進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 兩組T淋巴細(xì)胞亞群比例比較 觀察組CD3+CD8+、CD4+CD8+、CD8+CD28+T細(xì)胞比例低于對照組(P均<0.05)，詳見表1。

表1 兩組T淋巴細(xì)胞亞群比例比較

2.2 兩組血清CXCL10、CXCR3水平比較 觀察組血清CXCL10、CXCR3水平高于對照組(P均<0.05)，詳見表2。

表2 兩組血清CXCL10、CXCR3水平比較

2.3 觀察組血清CXCL10與CXCR3相關(guān)性 觀察組血清CXCL10與CXCR3水平呈正相關(guān)(r=0.391，P<0.05)。

2.4 血清CXCL10與CXCR3診斷干燥綜合征的價值 ROC曲線結(jié)果顯示，CXCL10診斷干燥綜合征最佳界值為181.71 ng/L，此時靈敏度、特異度、約登指數(shù)分別為84.60%、91.80%、0.764；CXCR3診斷干燥綜合征最佳界值為440.25 ng/L，此時靈敏度、特異度、約登指數(shù)分別為73.10%、77.60%、0.507。CXCR3診斷干燥綜合征的ROC曲線下面積(AUC)為0.782(95%CI：0.694～0.901，P=0.001)，CXCL10診斷干燥綜合征的AUC為0.891(95%CI：0.764～0.984，P=0.000)，CXCL10診斷價值較CXCR3診斷價值高。

2.5 T淋巴細(xì)胞亞群及血清CXCL10、CXCR3水平與干燥綜合征發(fā)生的關(guān)系 年齡、CD4+CD8+T細(xì)胞、CD8+CD28+T細(xì)胞及血清CXCL10、CXCR3水平是影響干燥綜合征發(fā)生危險因素(P<0.05)，詳見表3。

3 討論

目前，干燥綜合征發(fā)病機制尚不清楚，多數(shù)研究者認(rèn)為干燥綜合征主要因機體免疫系統(tǒng)紊亂導(dǎo)致。T細(xì)胞淋巴亞群屬于機體免疫系統(tǒng)主要組成部分，可分泌多種細(xì)胞因子，影響機體免疫調(diào)節(jié)[5,6]。干燥綜合征患者唾液腺、淚腺功能明顯衰退，隨著病情進(jìn)展又可累及肺、腎、甲狀腺等多種系統(tǒng)，對患者生命健康造成嚴(yán)重威脅。目前雖可根據(jù)眼部、口腔及唾液腺功能檢查等方式診斷干燥綜合征，但發(fā)現(xiàn)時病情已較為嚴(yán)重，治療更為困難，因此早期診斷干燥綜合征成為當(dāng)前研究關(guān)注的重點[7,8]。近年研究發(fā)現(xiàn)，趨化因子不僅與腫瘤免疫、轉(zhuǎn)移存在密切聯(lián)系，并且在干燥綜合征中發(fā)揮重要作用，可能成為診斷與治療干燥綜合征有效生物標(biāo)志物[9,10]。趨化因子作為一種小分子量蛋白，屬于細(xì)胞因子類，具有廣泛生物學(xué)作用，依據(jù)受體差異性將其分為CC、CXC、CX3C、C類等4個亞族[11]。其中CXC趨化因子在急性炎癥反應(yīng)中扮演重要角色，并且各趨化因子受不同調(diào)控因素發(fā)揮不同作用。CXCL10作為CXC家族中一員，在大部分免疫反應(yīng)中占主導(dǎo)地位，其多分布于Th1炎癥組織中[12]。而CXCR3作為CXCL10受體，屬于一種G蛋白偶聯(lián)七亞單位穿膜受體，主要表達(dá)于自然殺傷細(xì)胞、CD4+Th1細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞及部分上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞，又可分為CXCR3-A、CXCR3-B、CXCR3-alt3變異體，其與CXCL10相結(jié)合，不僅促使細(xì)胞遷移，引起細(xì)胞骨架改變及細(xì)胞鈣離子內(nèi)流，還可使循環(huán)中活化免疫細(xì)胞向炎癥部位聚集[13,14]。Welcher等[15]在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的研究顯示，CXCL10主要受IFN-γ及Ⅰ型干擾素α/β較強刺激、TNF較弱刺激，通過激活獨特細(xì)胞及途徑達(dá)到有效調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移、生長及轉(zhuǎn)錄活性目的，參與疾病進(jìn)展。此外，CXCL10與CXCR3相結(jié)合在機體中發(fā)揮雙重作用，一方面可有效預(yù)防感染，發(fā)揮積極防御作用；另一方面可引發(fā)排斥反應(yīng)，致過敏性疾病、自身免疫紊亂，參與炎癥反應(yīng)等多種生理病理過程，影響疾病進(jìn)展情況[16]。

表3 影響干燥綜合征發(fā)生多因素Logistic回歸分析

本研究結(jié)果顯示，觀察組CD3+CD8+、CD4+CD8+、CD8+CD28+T細(xì)胞顯著低于對照組，表明患者T淋巴細(xì)胞亞群發(fā)生明顯異常，與張虹等[17]研究結(jié)果相似，可見T淋巴細(xì)胞亞群在干燥綜合征發(fā)病發(fā)揮重要作用。牛廣華等[18]表示，T淋巴細(xì)胞亞群異常表達(dá)可能與機體免疫調(diào)節(jié)機制紊亂密切聯(lián)系，又可使血清出現(xiàn)類風(fēng)濕因子、抗SSB抗體等多種自身抗體，影響疾病進(jìn)程。結(jié)果還顯示，觀察組血清CXCL10、CXCR3水平高于對照組，提示血清CXCL10、CXCR3在干燥綜合征發(fā)展過程中的過度表達(dá)可能與疾病發(fā)生發(fā)展有關(guān)，推測其可能是機體內(nèi)皮細(xì)胞、炎癥細(xì)胞等多種細(xì)胞釋放大量CXCL10、CXCR3，促使炎性反應(yīng)發(fā)生，影響疾病進(jìn)展，尤其是患者血清CXCL10水平越高，炎癥破壞性更高，易引發(fā)多種不良后果，威脅患者生命安全。

另對CXCL10與CXCR3間關(guān)系進(jìn)行分析，結(jié)果顯示兩者呈顯著正相關(guān)，表明CXCL10與CXCR3關(guān)系密切。這主要是由于CXCR3作為CXCL10受體，其水平變化受CXCL10調(diào)控影響，當(dāng)CXCL10水平升高時，CXCR3水平也相應(yīng)增高，反之，水平有所下降。CXCL10及其受體CXCR3兩者水平明顯上調(diào)與干燥綜合征發(fā)生發(fā)展有關(guān)，可能因兩者相結(jié)合促使免疫細(xì)胞聚集于發(fā)生炎癥部位，呈高水平表達(dá)，對其具體作用機制仍需進(jìn)一步研究。本研究ROC分析結(jié)果顯示，CXCL10與CXCR3診斷干燥綜合征均具有較高的靈敏度和特異度，并在干燥綜合征發(fā)病中具有重要作用，是該疾病早期診斷的有效指標(biāo)。檢測CXCL10、CXCR3便于早期臨床診斷，并且應(yīng)用ELISA法檢測操作方便、得出結(jié)果時間短，具有在臨床中廣泛應(yīng)用的優(yōu)勢。此外，該結(jié)果還顯示CXCL10診斷價值明顯高于CXCR3，其可作為首選診斷指標(biāo)，為臨床治療提供可靠信息。

本研究分析影響干燥綜合征發(fā)生相關(guān)因素，結(jié)果顯示年齡、CD4+CD8+T細(xì)胞、CD8+CD28+T細(xì)胞及血清CXCL10、CXCR3水平是影響干燥綜合征發(fā)生的危險因素。表明隨著年齡增長，干燥綜合征發(fā)生風(fēng)險性明顯增加，應(yīng)密切關(guān)注高齡人群，積極采取預(yù)防措施降低干燥綜合征發(fā)生風(fēng)險。同時，T淋巴細(xì)胞亞群異常變化對機體免疫狀態(tài)造成破壞，使患者分泌功能受嚴(yán)重?fù)p害，影響疾病發(fā)展。此外，T淋巴細(xì)胞亞群所分泌的CXCL10、CXCR3也是主要危險因素，其中CD4+T細(xì)胞浸潤也受CXCR3趨化作用引起，該結(jié)果為臨床治療干燥綜合征提供新思路，例如臨床可采用分析生物學(xué)技術(shù)阻斷CXCL10與CXCR3反應(yīng)軸，從而降低CXCL10與CXCR3的表達(dá)及活性，最終有效控制患者病情進(jìn)展，改善預(yù)后，提高治療效果。

綜上所述，干燥綜合征患者T淋巴細(xì)胞亞群發(fā)生異常，并且血清CXCL10及其受體CXCR3水平明顯上升，血清CXCL10、CXCR3水平具有較高靈敏度和特異度，可作為診斷干燥綜合征有效的生物標(biāo)志物，并為臨床有效治療干燥綜合征，改善臨床癥狀提供有效參考依據(jù)。由于本研究所納入的病例數(shù)偏少，未觀察在不同臨床病程下血清CXCL10、CXCR3水平變化情況，數(shù)據(jù)存在一定偏移，因此在后期研究中應(yīng)納入更多病例，重點動態(tài)觀察血清CXCL10、CXCR3水平變化情況，以期有效評估病情進(jìn)展情況。