殘疾基因同源物2相互作用蛋白在皮膚基底細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義

袁紹萍 溫炬 李常興 田歆 秦思 張青華

1南方醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，廣州510630；2廣東省第二人民醫(yī)院皮膚科，廣州510317；3 南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院皮膚科，廣州523008；4 廣州市皮膚性病防治所，510095

皮膚基底細(xì)胞癌病程呈慢性進(jìn)行性發(fā)展，至今尚無特異的腫瘤標(biāo)志物用于診斷。殘疾基因同源物2（DAB2）相互作用蛋白（disabled homolog 2 interactive protein，DAB2IP）是最近發(fā)現(xiàn)的Ras-鳥苷三磷酸酶激活蛋白（Ras-GAP）家族新成員，具有調(diào)控細(xì)胞凋亡、抑制血管生成、抑制腫瘤生長、轉(zhuǎn)移和放療耐受等生物學(xué)功能［1］。我們檢測了DAB2IP 蛋白在皮膚基底細(xì)胞癌組織和良性皮贅組織中的表達(dá)，初步探討其在皮膚基底細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

一、材料與方法

1.臨床資料：采用回顧性分析方法，選擇2012年1月至2017年11月在廣東省第二人民醫(yī)院皮膚科及廣州市皮膚病防治所門診或住院接受皮膚腫物切除且資料完整的患者105例，其中除皮損外無其他明顯臨床癥狀，但是有皮贅，為明確皮贅性質(zhì)，患者要求手術(shù)切除并經(jīng)病理檢查證實(shí)為良性皮贅患者26 例作為對照組，男15 例，女11 例，年齡30 ～65歲。病理證實(shí)為皮膚基底細(xì)胞癌患者79例作為病例組，男36例，女43例，年齡30 ～91歲；皮損位于頭面部68例，軀干或四肢11 例，78 例為單發(fā)，1 例為多發(fā)（上唇和鼻部）；皮損最小0.2 cm×0.3 cm，最大6.0 cm×7.0 cm。79 例基底細(xì)胞癌患者中，淺表型7例（8.9%），結(jié)節(jié)潰瘍型52例（65.8%），色素型4例（5.1%），囊腫型3例（3.8%），硬斑病型或瘢痕型13例（16.5%）。所有患者均為初發(fā)，術(shù)前均未行基因治療、放化療及免疫治療等，均采用手術(shù)治療，并簽署了知情同意書。病例組均進(jìn)行了免疫組化P53、Bcl-2 及Ki-67 蛋白檢測。

2.免疫組化法檢測兩組手術(shù)切除組織中DAB2IP表達(dá)：所有標(biāo)本均經(jīng)4%甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片。用已知陽性切片作陽性對照，所有切片內(nèi)汗腺上皮為內(nèi)對照。采用1∶800 稀釋的DAB2IP 兔多克隆抗體（AB87811，英國Abcam 公司）在4 ℃孵化器中孵育18 ～24 h，繼而用二抗（RE7280-K 檢測試劑盒，德國Leica 公司）孵育后，DAB 顯色，蘇木素復(fù)染。分析DAB2IP表達(dá)與皮膚基底細(xì)胞癌組織臨床表型的相關(guān)性。

3.結(jié)果判定：兩位醫(yī)生獨(dú)立閱片，采用雙盲法進(jìn)行結(jié)果判定。高倍鏡下各選3 個視野觀察，根據(jù)每個視野中陽性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的百分比進(jìn)行積分：0 ～5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為3分，51%～75%為3分，＞75%為4 分；染色強(qiáng)度以多數(shù)陽性細(xì)胞呈現(xiàn)的顏色特征為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)分：無染色為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，褐黃色為3分。二項(xiàng)相加，0 ～1分為陰性（－），2 ～3分為弱陽性（+），4 ～5分為中等陽性（++），6 ～7分為強(qiáng)陽性（+++）。若有不同評判結(jié)果（有分歧的樣本為總樣本的1%），需重新進(jìn)行評估，直到得到兩位專家一致的意見。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：所有數(shù)據(jù)通過Epidata3.0 錄入，并用SPSS21.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。本研究資料均為計(jì)數(shù)資料，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比較。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 免疫組化檢測良性皮贅組織和基底細(xì)胞癌組織中殘疾基因同源物2相互作用蛋白（DAB2IP）的表達(dá) 1A：良性皮贅組織（×200），呈弱陽性或無表達(dá)；1B（×100）、1C（×200）：淺表性基底細(xì)胞癌組織，尚未突破基底膜的腫瘤細(xì)胞團(tuán)塊大部分被染成棕黃色至褐黃色，其間仍可見較多未染色的瘤細(xì)胞；1D（×100）、1E（×200）：浸潤性基底細(xì)胞癌組織，浸潤至真皮的腫瘤細(xì)胞絕大多數(shù)被染成棕黃色至褐黃色，其間可見少量的未染色瘤細(xì)胞，DAB2IP呈強(qiáng)陽性表達(dá)

二、結(jié)果

1.病例組和對照組DAB2IP 蛋白表達(dá)：DAB2IP 在對照組中呈弱陽性或無表達(dá)。病例組中，33 例DAB2IP 為強(qiáng)陽性表達(dá)（圖1）。DAB2IP蛋白在對照組和病例組中的陽性表達(dá)率分別為42.3%和93.7%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

2.DAB2IP 表達(dá)與基底細(xì)胞癌臨床表型及病理指標(biāo)的相關(guān)性分析：DAB2IP 蛋白陽性率在不同年齡、性別及腫瘤大小組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），但淺表性（原位癌）組明顯低于浸潤性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

3.P53、Bcl-2、Ki-67 與DAB2IP 在皮膚基底細(xì)胞癌中的表達(dá)情況：79例皮膚基底細(xì)胞癌中，Ki-67蛋白陽性（陽性細(xì)胞＞10%）31例（39.2%），P53蛋白陽性35例（44.3%），Bcl-2蛋白陽性42 例（53.2%）。其中Ki-67 蛋白陽性表現(xiàn)為瘤細(xì)胞團(tuán)部分著色，細(xì)胞核著色強(qiáng)陽性，且每個隨機(jī)視野下陽性細(xì)胞比例大于10%。此外，31例表達(dá)Ki-67蛋白的患者也均陽性表達(dá)了DAB2IP蛋白。

三、討論

DAB2IP是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種GTP酶激活蛋白，具有Ras-GAP同源結(jié)構(gòu)域，即酶的活性中心。其可抑制Ras的活性，介導(dǎo)多種腫瘤相關(guān)信號通路，如Ras-Raf-MAPK 通路、PI3K/AKT 通路、NF-κB 通路、EGFR 通路等，從而影響細(xì)胞的增殖、存活和凋亡［2］。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，DAB2IP 在肝癌［3］、結(jié)直腸癌［4］、膽囊癌［5］、前列腺癌［6］等實(shí)體腫瘤中的表達(dá)下降，從而猜測DAB2IP具有抑癌作用。

表1 殘疾基因同源物2相互作用蛋白（DAB2IP）在良性皮贅（對照組）和基底細(xì)胞（病例組）組織中的表達(dá)

表2 殘疾基因同源物2相互作用蛋白（DAB2IP）表達(dá)與基底細(xì)胞癌臨床表型及病理指標(biāo)相關(guān)性分析

本研究顯示，皮膚基底細(xì)胞癌組織中DAB2IP陽性表達(dá)率（93.67%）顯著高于良性皮贅組織（42.30%），提示DAB2IP可能參與皮膚基底細(xì)胞癌的發(fā)生。此外，淺表性基底細(xì)胞癌DAB2IP 陽性率低于浸潤性基底細(xì)胞癌，其DAB2IP 高表達(dá)可能提示腫瘤進(jìn)展。此結(jié)果與前列腺癌［6］、結(jié)直腸癌［4］、膽囊癌［5］等中DAB2IP的抑癌作用相反。我們推測，DAB2IP本身既可作為抑癌基因也可作為致癌基因，可能主要取決于載有此基因的組織細(xì)胞的種類或所處的不同階段。

本研究中，79 例皮膚基底細(xì)胞癌中有31 例Ki-67 蛋白陽性，且Ki-67陽性的癌細(xì)胞均表達(dá)DAB2IP蛋白。Ki-67抗原是一種存在于增殖細(xì)胞核基質(zhì)內(nèi)的核蛋白，主要表達(dá)于細(xì)胞生長周期G1、S、G2 和M 期，在G0 期時缺乏表達(dá)，是用來檢測細(xì)胞增殖的常用指標(biāo)。Ki-67和DAB2IP蛋白的同時表達(dá)可能提示，腫瘤細(xì)胞處于非靜止期和較高的增殖狀態(tài)。

目前，尚未有研究DAB2IP 在皮膚癌中作用的報(bào)道，本研究也未從細(xì)胞層面來證實(shí)DAB2IP 在皮膚基底細(xì)胞癌中的致癌作用，僅起到拋磚引玉的作用，以期對這一領(lǐng)域的研究提供線索。