侵襲性垂體瘤組織TNF-α與IL-12的表達及意義

劉思洋，吳建龍，喬建勇

（承德市中心醫院，河北承德 067000）

垂體瘤是常見的顱內腫瘤之一，約占顱內腫瘤的10%[1]，人群發病率約為1/10萬～7/10萬，在顱內腫瘤中僅次于腦膜瘤和腦膠質瘤。根據垂體瘤的生物學行為可以分為侵襲性垂體瘤（invasive pituitary adenomas，IPA）、非侵襲性垂體瘤和垂體癌。IPA介于垂體癌和非侵襲性垂體瘤之間，雖然在組織學上屬于良性腫瘤，但已經具有惡變傾向的生物學行為[2]。IPA的生長方式與惡性腫瘤相似，腺瘤呈結節樣生長，常侵犯鞍旁海綿竇、蝶竇、斜坡及下丘腦等其它部位，手術難以完全切除，術后復發率高[3]。1940年Jefferson[4]認為，IPA生長超出蝶鞍區域并能夠侵犯周圍組織，解釋了IPA不能完全切除且復發率高的原因。因此，研究IPA的發生機制及侵襲轉移的影響因子對IPA的診斷和治療具有重要意義。腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白細胞介素-12（interleukin，IL-12）是與炎癥、免疫應答密切相關的多功能細胞因子，被認為在腫瘤的生物學行為中發揮著重要作用。本研究探討了IPA組織中TNF-α和IL-12表達的變化，以期為IPA發生、發展的機制研究及治療提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 組織標本 選取承德市中心醫院、承德醫學院附屬醫院和中國人民解放軍第266醫院經手術切除和病理證實的IPA和非IPA組織標本，各40例。侵襲性垂體腺瘤診斷標準：依據Wilson-Hardy 3～4級分類、術前MRI檢查及術中觀察發現，腫瘤已侵襲鞍區周圍如海綿竇、鞍底周圍骨組織等，但只有鞍底硬膜浸潤不作為診斷標準。

1.2 免疫組化染色和結果判斷 IPA和非IPA組織經4%中性甲醛固定24h后，常規石蠟包埋、切片，切片厚度4 μ m。免疫組化染色：采用MaxVision二步法。石蠟切片置60℃烤箱2h，然后脫蠟、水化，加入內源性過氧化物酶阻斷劑阻斷內源性過氧化酶活性，滴加1：100鼠抗人多克隆一抗（美國Santa Cruz公司），4℃過夜，滴加抗鼠生物素標記的二抗（福州邁新生物技術公司），室溫孵育20min后滴加DAB顯色，蘇木素復染，常規脫水、封片。

免疫組化結果判斷：TNF-α及IL-12定位于細胞漿，二者陽性表達情況均采用陽性細胞百分比和染色強度進行綜合判斷。顯微鏡下觀察組織切片中腫瘤細胞密集區，在400倍鏡下隨機選取5個視野：①陽性細胞計數，陽性細胞數＜10%為0分、10%～25%為1分、26%～50%為2分、≥50%為3分；②陽性染色強度判斷標準：無色為0分、淡棕黃色為1分、棕黃色為2分、深棕黃色或棕褐色為3分。以①和②兩項之和判定最終結果：陰性（-）0分，低表達（+）1～2分，中度表達（++）3～4分，高表達（+++）5～6分。

1.3 統計分析 應用SPSS 21.0統計軟件進行數據統計學分析，組間比較采用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TNF-α在IPA組織及非IPA組織中的表達 40例IPA組織中TNF-α總陽性率為65.0%，非IPA組織中TNF-α總陽性率為25.0%，IPA組織中TNF-α陽性率明顯高于非IPA組織，組間比較差異具有統計學意義（P＜0.05）。見圖1，附表：

附表 IPA及非IPA組織中TNF-α、IL-12的表達情況（n=40）

圖1 IPA及非IPA組織中TNF-α的表達（×200，A.IPA,B.非IPA）

2.2 IL-12在IPA組織及非IPA組織中的表達 40例IPA組織中IL-12總陽性率為32.5%，非IPA組織中IL-12總陽性率為62.5%，IPA組織中IL-12陽性率明顯低于非IPA組織，組間比較差異具有統計學意義（P＜0.05）。見圖2，附表。

圖2 IPA及非IPA組織中IL-12的表達（×200，A.IPA,B.非IPA）

3 討論

TNF-α是由活化的單核巨噬細胞分泌的一種小分子蛋白，基因定位于人第6對染色體6P23～6Q12區，由4個外顯子和3個內含子組成，與組織兼容性復合體密切連鎖，在細胞免疫、炎癥反應、腫瘤免疫等多種生理與病理過程中發揮著關鍵作用[5]。TNF-α還可誘導多種腫瘤細胞雙調蛋白的分泌，雙調蛋白不但能誘導腫瘤細胞的增殖擴散，還能通過EGF受體相關通路刺激腫瘤細胞的無限增殖和惡變[6]；TNF-α能通過細胞內一系列信息傳遞激活P-選擇素，激活的P-選擇素一方面可以促使腫瘤細胞粘附于血管內皮，另一方面可與整合素共同介導血小板的激活，并使激活的血小板與腫瘤細胞相結合，使腫瘤細胞逃避免疫攻擊，從而促進腫瘤的侵襲性生長[7-8]。

IL-12又稱為自然殺傷細胞刺激因子，主要由巨噬細胞、樹突狀細胞、B淋巴細胞等抗原遞呈細胞分泌產生，是具有多種生物學效應的免疫細胞生長刺激因子，具有強大的抗腫瘤作用[9]。Jafarzadeh等[10]發現，減少IL-12的分泌可促進乳腺癌進展；IL-12可以誘導干擾素-γ（IFN-γ）的生成，上調干擾素誘導蛋白10(IP-10)、組織金屬蛋白酶抑制劑(TIMP)等血管生成抑制因子，下調基質金屬蛋白酶(MMP)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)、VEGF等血管生成誘導因子，協同抑制腫瘤血管生成及發揮抗腫瘤作用[11]；另外還有實驗顯示，人腫瘤異種移植物中的炎性細胞可以抑制腫瘤的生長，該作用是由IL-12所介導的[12]；IL-12還可上調鈣粘著素和細胞粘附分子的表達水平，防止腫瘤轉移[13]。

本研究采用免疫組化方法（Max Vision二步法）檢測了IPA組織和非IPA組織中TNF-α和IL-12的表達情況，結果發現IPA組織中TNF-α的陽性表達率明顯高于非IPA組織，IL-12的的陽性表達率明顯低于非IPA組織，提示TNF-α和IL-12均參與了IPA的發生發展過程，二者可能在垂體瘤的增殖及侵襲性過程中發揮重要作用。因此，檢測TNF-α和IL-12的表達情況可能為判斷IPA的生物學行為、預后及治療提供依據，但相關機制有待于進一步深入研究。