Mena蛋白在大腸癌及癌旁組織、息肉、淋巴結等中的表達及意義

孫 威 裴笑月 馬 帥 賈 翼 于 劍*

（1 大連大學附屬新華醫院普外科，遼寧 大連 116021；2 大連大學附屬新華醫院病理科，遼寧 大連 116021；3 大連大學附屬新華醫院腫瘤內科，遼寧 大連 116021）

腫瘤的發生發展涉及到一系列因子的變化，Mena蛋白調節腫瘤細胞，在腫瘤的復發和轉移方面起作用，對評估預后有意義，故有望成為腫瘤診斷和指導治療的新的腫瘤標志物。Mena蛋白在多種腫瘤中過表達，如乳腺癌、黑色素瘤等[1]，但與大腸癌的關系少見報道。本研究采用免疫組織化學方法檢測大腸癌及癌旁組織、息肉、正常淋巴結及轉移淋巴結中Mena 蛋白的表達水平，觀察不同大腸癌組織中Mena蛋白的表達，探討其表達變化與臨床的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料：收集大連大學附屬新華醫院病理科2014年1月至2014年12月的大腸癌標本存檔蠟塊共20例、癌旁組織20例、正常淋巴結組織20例、轉移淋巴結組織20例、大腸息肉（腺瘤）組織20例。大腸癌組織中男性14例，女性6例，年齡34～76歲。按2010版《消化系統腫瘤WHO分類》標準進行分類[2]。

1.2 組織芯片的制備：癌旁正常黏膜組織、癌組織、息肉（腺瘤組織）組織、轉移淋巴結組織及正常淋巴結組織。

1.3 免疫組織化學染色：已知陽性對照片及PBS代替一抗陰性對照片進行對照。Mena單克隆抗體及非生物素免疫組化ElivisionTM plus檢測試劑盒均按照說明書進行實際操作。

1.4 方法：大腸癌組、癌旁組織組、息肉（腺瘤）組及淋巴結組樣本為石蠟包埋組織，照試劑說明書進行：4 μm切片、二甲苯脫蠟、梯度酒精水化后高壓鍋熱處理5～8 min，過氧化物酶阻斷血清封閉，加I抗60 min，磷酸鹽緩沖液洗3次，每次2 min；II抗15 min，磷酸鹽緩沖液洗3次，每次2 min；鏈霉菌抗生物素-過氧化酶10 min，DAB顯色5～10 min，蘇木素復染5～10 s，脫水、封片。

1.5 判定標準：Mena蛋白的陽性染色主要定位于細胞質，呈棕黃色顆粒狀。在400倍鏡下根據胃黏膜上皮或腫瘤細胞胞質的染色程度進行分析評分。染色程度分為4級：基本不著色者為0分，著色淺者為1分，著色適中者2分，著色深者為3分；著色細胞占計數細胞百分率≤5%為0分、6%～25%為1分、26%～50%為2分、≥51%為3分。將著色程度與著色細胞百分率得分乘積，為其最后得分。0～1分為陰性（-），2～3分為弱陽性（+），4～6分為陽性（++），6分以上強陽性（+++）。其中Mena（-）與（+）為低表達，（++）與（+++）為高表達[3]。

1.3 統計學處理：SPSS 15.0軟件及SHEsis軟件進行統計學分析，檢驗顯著水準為α=0.05，P＜0.05有統計學的意義。

2 結 果

2.1 Mena蛋白在大腸癌組織中的表達：Mena蛋白在大腸癌中與年齡、性別及部位無關。與分化程度相關：中低分化的表達高于高分化（P＜0.05）；與組織學分型有關：潰瘍型與浸潤型大腸癌 Mena 的高表達率明顯高于腫塊型（P＜0.05）；淋巴結轉移的Mena蛋白表達明顯高于正常淋巴結（P＜0.05）；腫瘤標志物中CEA及CA199升高組Mena蛋白表達明顯高于正常腫瘤標志物組（P＜0.05）。見表1。

2.2 Mena蛋白在不同組織中的表達：正常的大腸黏膜上皮不表達或表達呈弱陽性，大腸癌組織中則過表達。Mena蛋白在癌組織、轉移淋巴結、腺瘤中的表達依次降低（P＜0.05），癌旁組織中表達較弱（P=0.564），正常淋巴結中不表達。與癌旁正常大腸黏膜腺上皮相比，大腸癌組織Mena蛋白表達水平明顯升高（P＜0.05）。通過圖1可見：大腸癌組織中Mena蛋白染色較深，呈現黃色，在轉移淋巴結、腺瘤及癌旁組織中的染色依次變淺，而在正常淋巴結中不染色。見表2。

圖1 Mena在不同組織中的表達 （IHC×400） A.癌組織，B.正常淋巴結，C.息肉（腺瘤），D.癌旁組織，E.轉移淋巴結

表1 Mena蛋白在大腸癌中的表達

表2 不同組織中Mena蛋白的表達

3 討 論

隨著人民生活水平的提高、飲食結構的改變，大腸癌的發生率呈升高趨勢[4]；已經成為全球第三的癌癥及癌癥相關的第四大死亡原因[5]。Mena蛋白的表達與腫瘤的發生發展相關，尚鮮有文獻報道Mena蛋白表達與大腸癌發生發展的關系。本研究發現：Mena蛋白（表2）在癌組織、轉移淋巴結、腺瘤中的表達依次降低，癌旁組織中表達較弱，正常淋巴結中不表達。與癌旁正常大腸黏膜腺上皮相比，大腸癌組織Mena蛋白表達水平明顯升高（P＜0.05）。圖1顯示：大腸癌組織中Mena蛋白染色較深，呈現黃色，在轉移淋巴結、腺瘤及癌旁組織中的染色依次變淺，而在正常淋巴結中不染色。這樣的結果預示著Mena蛋白的表達增加可作為大腸癌的標志物。淋巴結轉移的原發腫瘤與無淋巴結轉移的原發腫瘤相比，染色得分明顯高于后者，預示著Mena的表達遞增與大腸癌的發展有關。

超過80%的大腸癌標本Mena蛋白染色陽性，25%的標本染色強度是3+，60%的標本染色強度是2+。說明Mena的過度表達在大腸癌的初級步驟中可能發揮重要作用[7]。檢測大腸癌組織中Mena蛋白表達發現：Mena蛋白與年齡、性別及部位無關（表1）；與分化程度、組織學分型、淋巴結轉移及腫瘤標志物CEA與CA199相關。Gurzu[5]等發現：正常大腸黏膜和無異形增生的息肉的Mena蛋白陰性表達，而異形增生的息肉Mena蛋白則過表達；正常宮頸鱗狀上皮中Mena雖然未表達，但染色強度隨著CIN級別的增加而增強[8]。這與我們研究的結果一致。進一步對每一病例的免疫組化分析發現：大腸癌浸潤的萌發位置，Mena免疫組化染色加強；與分化的腫瘤相比，腫瘤的萌出部位Mena蛋白的免疫組化反應明顯增加；以上結果預示著Mena的表達增強可能會促進腸癌的大浸潤轉移[9]。在符合大腸癌的病例和鄰近的非腫瘤上皮細胞中，Mena蛋白表達有統計學意義上的上升，證明Mena蛋白的表達會因為大腸癌的惡性轉化而改變，并且其在大腸癌的進展中發揮作用。腫瘤的增長速度，腫瘤大小，Dukes分期，壁內擴散，腫瘤分化程度，淋巴結有無轉移，血管浸潤，轉移距離等等，都被用來預測直結腸癌患者的預后。因此可以認為：大腸黏膜異型增生和癌癥發生的早期事件是Mena蛋白的過表達。綜上所述，Mena蛋白的過度表達可能會成為預測大腸癌患者預后的新指標。當然，這需要大樣本、多數據的進一步研究。