12種中草藥提取液對香蕉根結線蟲的毒殺活性①

李 春 趙東興 張建春 李 芹

(云南省紅河熱帶農業科學研究所 云南河口661300)

香蕉根結線蟲病（Meloidogyne incognita）是由根結線蟲屬（Meloidogynespp.）的線蟲引起的，是危害香蕉的重要病害之一，各香蕉種植區均有發生，發病率一般為20%～30%，嚴重的達60%以上。香蕉被線蟲危害后植株表現為葉黃、矮小，早衰，抽蕾困難，產量減少，有些蕉園由于根線蟲的影響，有一半以上的香蕉樹不能結出有商品價值的果實［1-5］。

目前，對香蕉根結線蟲的防治研究主要涉及化學防治［6-9］、生物防治［10-11］和抗病品種選育［12］等方面，而生產上多以化學防治為主，化學防治香蕉根結線蟲雖能取得較好效果，但需使用大量化學農藥，且殺線劑多為高毒、高殘留藥劑，在殺死土壤中植物寄生線蟲的同時也殺死了有益生物，嚴重破壞生態平衡，對環境和人體造成很大的危害。植物源殺線蟲劑具有分解快、殘留低、污染少、毒性小等特點，因此，尋找有效的植物或中草藥提取物來防治香蕉根結線蟲，在根結線蟲綜合防治中，具有廣闊發展前景。

本研究選取艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草等12 種中草藥，利用丙酮和水進行提取，研究了這些中藥材提取物對香蕉根結線蟲的毒殺作用，以期找出一種對香蕉根結線蟲有較強毒殺活性的植物，為香蕉根結線蟲的防治提供新的途徑。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 中草藥材料

供試的12 種中草藥購于中藥市場，其名稱、部位及產地見表1。

表1 12種供試中草藥名稱、部位及產地

1.1.2 儀器與試劑

⑴儀器：顯微鏡（Leica DM5000B），植物搗碎機（FK-A），200、300、500目標準分樣篩。

⑵試劑：分析純丙酮、蒸餾水。

1.2 方法

1.2.1 供試線蟲的獲取

試驗用香蕉根采自于云南省紅河熱帶農業科學研究所的香蕉種植基地，將采集的香蕉根洗凈，收集帶根結病根，將病根剪成0.5～1.0 cm 大小，置于植物粉碎機中粉碎，過濾，收集500目篩子中的線蟲卵，配成線蟲300 個/mL 的根結線蟲卵懸浮液。

1.2.2 中草藥提取液的制備

將供試中草藥置于烘箱內在60℃下烘干，粉碎至40 目，貯于黑色塑料袋中，備用。稱取各藥材15 g 與200 mL 具塞三角瓶中，加入150 mL 丙酮和水浸泡過夜，于震蕩機上震蕩提取2 h，過濾，濾液用旋轉蒸發儀濃縮只近干，放置在4℃冰箱中保存備用。

1.2.3 二齡線蟲的培養

將采集的香蕉根洗凈，收集帶根結病根，將病根剪成0.5～1.0 cm 大小，置于植物粉碎機中粉碎，過濾，收集500目篩子中的卵，放于26℃恒溫培養箱中培養6 d，得到大量的二齡幼蟲（J2）。

1.2.4 中草藥提取物對香蕉根結線蟲的毒殺作用

稱取1.2 制備的中草藥提取物0.5 g，用5 mL溶劑溶解后用蒸餾水定容至100 mL，得5 mg/mL 溶液。分別量取2 mL 稀釋液加入直徑3.5 cm 的培養皿中，隨后加入60 條“1.2.3”培養的二齡線蟲，每處理重復3 次，并以5%丙酮水溶液和蒸餾水液為對照，放置于26℃培養箱中，分別于24、48、72 h 后于顯微鏡下觀察線蟲死亡數量，按Abbott公式計算校正死亡率。線蟲死亡計數標準參考文艷華等［13］的方法，即線蟲呈僵直不動為死蟲，線蟲呈彎曲蠕動狀態為活蟲，各中藥材對香蕉根結線蟲的毒殺活性強弱參照文獻［14］的方法進行分級。

線蟲死亡率＝線蟲死亡數/供試線蟲數×100

校正死亡率＝（處理組線蟲死亡率-對照組線蟲死亡率）/（1-對照組線蟲死亡率）×100

2 結果與分析

2.1 12種中草藥丙酮提取物對線蟲的毒殺效果

12 種中草藥丙酮提取物對香蕉根結線蟲的毒殺效果見表2。

表2 丙酮提取物對香蕉根結線蟲的毒殺效果

從表2中的數據可看出，艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細辛和紫莖澤蘭的丙酮提取物在24 h 內對香蕉根結線蟲有較強的毒殺活性，線蟲校正死亡率分別為70.33%、78.96%、86.67%、81.68%、76.84%和79.44%，其殺線蟲活性強度均為“+++”以上，顯著高于其他藥材的毒殺活性；穿心蓮、川芎、馬齒筧、銀杏葉、葉下珠提取物的殺線蟲活性中等，處理24 h 校正死亡率在35.09%～53.86%；黃芪提取物的殺線蟲活性最弱，處理24 h校正死亡率為29.82%。

隨著時間的增長，各中草藥丙酮提取物對香蕉根結線蟲的毒殺活性均有所增加。處理48 h 艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細辛和紫莖澤蘭丙酮提取物對香蕉根結線蟲的毒殺活性增加，線蟲的校正死亡率分別為87.32%、90.34%、100%、90.91%、92.06%和91.13%，殺線蟲活性強度均為“++++”；穿心蓮、川芎、馬齒筧、黃芪、銀杏葉、葉下珠提取物的殺線蟲活性中等，處理48 h 校正死亡率在38.85%～69.38%。72 h 后，艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細辛和紫莖澤蘭丙酮提取物的處理線蟲校正死亡率達到94.98%以上，殺線蟲活性強度均為“++++”；川芎、馬齒筧、黃芪、銀杏葉、葉下珠提取物的殺線蟲活性中等，處理72 h 線蟲校正死亡率在47.09%～64.04%；處理72 h，穿心蓮丙酮提取物的殺線蟲活性較強，線蟲校正死亡率為82.08%，活性強度為“++++”。

2.2 12種中草藥水提取物對線蟲的毒殺效果

12 種中草藥水提取物對香蕉根結線蟲的毒殺效果如表3所示。

表3數據顯示，艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細辛和紫莖澤蘭水提取物在24 h 內對香蕉根結線蟲有較強的毒殺活性，線蟲校正死亡率分 別 為 60.18%、 56.42%、 71.94%、 72.62%、64.56%和52.98%，其殺線蟲活性強度均為“+++”；穿心蓮、川芎、銀杏葉、葉下珠、馬齒筧、黃芪、細辛提取物的殺線蟲活性較弱，處理24 h 校正死亡率均低于30%。

表3 水提取物對香蕉根結線蟲的毒殺效果

隨著時間的增長，各中藥材水提取物對香蕉根結線蟲的毒殺活性均有所增加。處理48 h 艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細辛和紫莖澤蘭水提取物對香蕉根結線蟲的毒殺活性增加，線蟲的校正死亡率分別為75.91%、68.13%、86.56%、82.98%、79.53 和71.91%，殺線蟲活性強度均為“+++”以上；穿心蓮水提取物的殺線蟲活性中等，處理48 h 校正死亡率分別為54.72%；川芎、馬齒筧、黃芪、銀杏葉、葉下珠提取物的殺線蟲活性依然較弱，處理48 h 校正死亡率在26.41%～40.51%。

處理72 h 艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細辛和紫莖澤蘭水提取物對香蕉根結線蟲的毒殺活性進一步增加，線蟲的校正死亡率分別為

86.36%、 80.16%、 95.43%、 89.68%、 86.87%、82.18%和91.23%，殺線蟲活性強度為“++++”；穿心蓮水提取物的殺線蟲活性為中等活性，活性強度達到“+++”以上，處理72 h 校正死亡率為62.14%；川芎、馬齒筧、黃芪、銀杏葉、葉下珠、細辛提取物的殺線蟲活性依然較弱，處理72 h 校正死亡率在32.62%～47.05%。

3 討論與結論

與化學農藥相比，低毒、低殘留、可降解的植物源殺線劑越來越受到人們的重視。據報道［15-18］，苦豆子、紫莖澤蘭、牛心樸子葉、細辛等植物對南方根結線蟲有較強的毒殺活性，本研究的12 種中草藥中艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細辛和紫莖澤蘭的丙酮和水提取物對香蕉根結線蟲的毒殺活性較強，強度均為“+++”以上，而穿心蓮、川芎、馬齒筧、黃芪、銀杏葉、葉下珠的毒殺活性較弱，且隨著處理時間增長，12 種中草藥的丙酮、水提取物對香蕉根結線蟲的毒殺作用均呈增強趨勢。處理24 h 后，艾葉、雞屎藤、苦豆子、牛心樸子草、細辛和紫莖澤蘭的丙酮和水提取物對香蕉根結線蟲的毒殺強度均為“+++”以上；48h 后，6 種中草藥丙酮提取物對香蕉根結線蟲的毒殺活性上升到強活性，即“++++”，而只有苦豆子、牛心樸子草的水提物的毒殺活性上升到強活性；處理72 h后，這6種中草藥水提物的毒殺活性均上升到強活性。

另外，同一種中草藥丙酮提取物對香蕉根結線蟲的毒殺活性大于水提取物的毒殺活性，這可能是提取溶劑極性不同，對中草藥的提取效果不同，丙酮極性較弱，或許能從中草藥中提取出對線蟲有較強活性的物質，這有待于進行進一步的研究證實。