Toll樣受體2基因Arg753Gln和CD14啟動子-159C/T多態性與肺炎鏈球菌病易感性的Meta分析

朱滿桂 馮艷 李夏西

[摘要]目的 評價Toll樣受體2基因Arg753Gln和CD14啟動子-159C/T多態性與肺炎鏈球菌病易感性的相關性。方法 檢索PubMed、Cohrance、Embase、CNKI、維普、萬方等數據平臺，檢索文獻時間限定為從建庫到2017年6月1日。搜尋符合納入和排除條件的隨機對照研究，RevMan 5.3軟件進行Meta分析。結果 納入TLR2有關論文3篇，樣本量總計為951例;納入CD14相關研究2篇，樣本量總計為674例。Meta分析未見TLR2基因Arg753Gln多態性和CD14-159C/T多態性與肺炎鏈球菌病易感性相關（顯性等位基因vs.隱性等位基因：OR=0.76，95%CI=0.40～1.46，P=0.41;顯性基因型vs.隱性基因型時，OR=0.70，95%CI=0.34～1.44，P=0.33）。結論 未見TLR2基因Arg753Gln和CD14-159C/T多態性與肺炎鏈球菌病易感性相關。

[關鍵詞] TLR2 Arg753Gln;CD14-159C/T;多態性;肺炎鏈球菌病;Meta分析

[中圖分類號] R446 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1674-4721（2019）1（b）-0008-04

[Abstract] Objective To investigate the association between TLR2 Arg753Gln and CD14-159C/T polymorphisms and Streptococcus pneumoniae disease. Methods Pubmed， embase， Cohrance， CNKI， VIP， Wanfang Data were searched to get related clinical controlled trials. The time limit for retrieving studies was until June 1， 2017. Meta-analysis was conducted by Revman 5.3 software. Results Three TLR2 related papers were included， with a total sample size of 951 cases. Two CD14 related studies were included， with a total sample size of 674 cases. Meta-analysis showed no correlation between Arg753Gln polymorphism of TLR2 gene and CD14-159C/T polymorphism and susceptibility to Streptococcus pneumoniae disease （dominant allele vs. recessive alleles： OR=0.76， 95%CI=0.40-1.46， P=0.41; dominant genotype vs. recessive genotype： OR=0.70， 95%CI=0.34-1.44， P=0.33）. Conclusion No significant differences between TLR2 Arg753Gln and CD14-159C/T polymorphisms and Streptococcus pneumoniae disease were found in the meta-analysis.

[Key words] TLR2 Arg753Gln; CD14-159C/T; Polymorphism; Streptococcus pneumoniae disease; Meta-analysis

Toll樣受體（TLR）家族以及CD14是兩種重要的模式識別受體，在清除病原體的過程中發揮作用，其基因多態性與感染相關[1]。TLR2本質是細菌脂蛋白的受體，最初被當作介導脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）的細胞信息轉導物質[2]。CD14是LPS的受體，但因CD14缺少跨膜區域，不能經過膜傳遞信息。在天然免疫中，CD14需要TLRs來協同發揮其功能[3]。肺炎鏈球菌可引起侵襲性或非侵襲性疾病[4]。研究顯示每年兒童發生侵襲性肺炎球菌疾病機率為0.63‰[5]。多項TLR2和CD14基因多態性與肺炎鏈球菌的相關性研究結果并不一致[6-8]，為提供TLR2和CD14基因多態性與肺炎鏈球菌病易感性關系的證據，現搜集文獻進行Meta分析，現報道如下。

1對象與方法

1.1研究對象

使用計算機檢索以下電子數據庫：PubMed、CNKI、萬方、VIP等。檢索詞：Streptococcus pneumoniae、肺炎球菌、TLR、CD14。搜索的文章不需要限制語言的類型。檢索文獻時間限定為從建庫至2017年6月1日。

1.2文獻納入和排除標準

納入標準：①公開發布的文獻全文;②文獻包括獨立病例對照試驗設計;③對照組的基因型頻率均與Hard-Weinberg平衡一致;④文獻中包含完整的基因型頻率數據。排除標準：①重復出版文獻或者僅有摘要的會議論文;②研究不是獨立的病例控制;③受試者不是肺炎鏈球菌肺炎;④個案報道。

1.3質量測評以及數據提取

質量評估由2名評估者根據搜索條件進行。2名評估者根據隊列研究評估文件的質量。從每個研究人群中選擇NOS偏倚風險評估標準。如果有爭議，予咨詢通訊作者討論并確定。閱讀全文后以下信息被提取：①一般信息，包括主題，摘要，作者和出版時間;②受試者的基本特征，包括各基因多態性對應的基因型頻率。

1.4統計學方法

使用Review Manager 5.3軟件進行Meta分析。P>0.1，I2<50%，采用固定效應模型。反之，采用隨機效應模型。漏斗圖用來評估潛在發表偏倚。

2結果

2.1文獻檢索結果

對照組全部均為健康人群，納入論文的對照組符合Hardy-Weinberg定律。最終納入TLR2與肺炎鏈球菌病相關的論文為3篇，樣本量總計為951例，其中研究組298例，對照組653例。R為顯性等位基因，Q為隱性等位基因，RR及RQ表示顯性基因型，QQ為隱性基因型（表1）。納入CD14與肺炎鏈球菌病相關的論文為2篇，樣本量總計為674例，其中研究組199例，對照組475例，C為顯性等位基因，T表示隱性等位基因，CC及CT表示顯性基因型，TT為隱性基因型（表2）。

2.2 Meta分析結果

顯性等位基因vs.隱性等位基因時，Q=24.67，P<0.0001，I2=84%，異質性高，采用隨機效應模型得到OR=0.76（95%CI=0.40～1.46），Z=0.82，P=0.41，差異無統計學意義（圖1），即未見TLR2 Arg753Gln+CD14-159C/T多態性與肺炎鏈球菌病易感性相關。

采用相同方法分析顯性基因型（RR/RQ+CC/CT）vs.隱性基因型時（QQ+TT），OR=0.70，95% CI=0.34～1.44，P=0.33，差異無統計學意義（圖2），未見TLR2 Arg753Gln+CD14-159C/T多態性與肺炎鏈球菌病易感性相關。

漏斗圖評估潛在發表偏倚，結果提示，未發現顯著偏倚（圖3）。

3討論

肺炎鏈球菌可定植于正常人鼻咽部，嚴重感染時可經血流播散導致膿毒癥、腹膜炎、腦膜炎等肺炎鏈球菌疾病[10]。基于南亞國家的研究表明侵襲性細菌性疾病中約12.8%是由肺炎鏈球菌引起，且大部分發生于5歲以下的兒童，病死率高[11]。個體對肺炎鏈球菌的易感性與細菌LPS相關的免疫反應相關[12]。Tomlinson等[13]使用表面脂蛋白缺陷的肺炎球菌突變株驗證得出：脂蛋白是TLR介導的肺炎鏈球菌免疫應答的關鍵決定因素。CD14及Toll樣受體是兩種重要的模式識別受體，在介導免疫反應并清除病原體上發揮一定作用[14]。目前研究證實，LPS介導的免疫體系激活過程中，LPS結合蛋白（LPS blinding protein，LBP）以及CD14是最重要環節。CD14是LPS以及LBP的受體，但由于CD14缺少跨膜區以及胞內結構區域，所以無法通過細胞膜進行信息傳遞。CD14功能需要TLRs來共同介導細胞信號轉導[3]。TLR2可識別革蘭陽性菌（如肺炎鏈球菌）的主要致病因素——細胞壁成分肽聚糖PGN與脂磷壁酸LTA[15]，從而激活細胞內信號傳導機制，CD14在這過程并未發揮作用，但由于在不借助外力的情況下TLR2識別抗原效率低下，在CD14的協助下效率能增加百倍以上[16]。TLR2和CD14的協同作用不僅存在于革蘭陽性菌感染，其多態性與炎癥性腸病[17]、口腔腫瘤[18]和哮喘[19]等疾病的易感性亦相關。研究表明肺炎鏈球菌感染時，TLR2基因敲除小鼠較野生型小鼠更易發生敗血癥或腦膜炎[20]，提示TLR2和CD14基因態性可能與肺炎鏈球菌易感性相關。

Moens最早研究TLR多態性與侵襲性肺炎鏈球菌病相關性，發現TLR2和TLR4基因多態性與侵襲性肺炎鏈球菌病不相關，但該研究未將TLR信號轉導通路上的多態性位點納入，故研究有其局限性。其后Yuan[7]和Tellería-Orriols[8]的研究更深入，研究對象增加為TLR2，TLR4和CD14的多態性，但仍未發現TLR2、CD14基因多態性與肺炎鏈球菌病的相關性。本Meta分析納入3篇文獻，最終得到結論：不論是等位基因還是各類基因型的OR值95% CI均經過1，其P值均>0.05，表明TLR2基因Arg753Gln和CD14啟動子-159C/T多態性與肺炎鏈球菌病易感性不相關。

本文不足之處：①納入對象少，總樣本量欠缺。②一種疾病的易感性與多種基因多態性位點相關。即使研究綜合了TLR2與CD14的多態性位點，但沒有考慮TLR信號轉導通路上的其他位點，如TNF-a、IL-6、IL-10等基因多態性位點。③疾病的發生是由于基因和環境的共同作用，研究缺乏基因-基因和基因-環境相互作用的數量。以上缺陷導致本Meta分析的可信度受到一定影響。期待今后更多設計良好的研究得出更切實的結論。

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（收稿日期：2018-06-08 ?本文編輯：孟慶卿）