遵義地區犬狂犬病毒血清抗體流行病學調查與大學生對該病的認知情況分析

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狂犬病是世界上影響人類健康最古老的疾病之一，最早的記載見于4300年前美索不達米亞(古王國，在今伊拉克境內)的埃什努納(Eshnunna)法典[1]。該病是由狂犬病病毒(Rabies Virus， RV)引起的一種病毒性動物傳染病，它發生在150多個國家和地區，病死率為100%，是全球不容忽視的公共衛生問題。據世界衛生組織(World Health Organization，WTO)統計，全球每年由狂犬病導致的死亡人數約59 000人(CI:25 000-159 200)，大約每15 min就有一人因狂犬病而失去生命，每1 h就有1 000人接受暴露后治療，死亡病例中，36%位于非洲，60%位于亞洲，其中印度最多，占總數1/3，而中國則以每年約兩千人死亡數字位居第二[2-3]。雖然一些食肉動物和蝙蝠種群是狂犬病毒的天然宿主，但全球95%的人狂犬病病例是由犬咬傷傳播感染[4]。

近年來，歐美國家及包括中國在內的亞洲國家均開展過關于犬狂犬病病的血清流行病學調查，調查結果存在較大差異。目前，我國新疆[5]、四川[6]、呼和浩特[7]、南京[8]、廈門[9]等省市已有犬狂犬病血清學調查的文獻報道，但遵義地區犬狂犬病的感染情況未見文獻報道，因此，本試驗開展有關犬狂犬病的流行病學調查，以了解本地區人群對狂犬病的認識程度，摸清遵義地區犬狂犬病的流行情況，為本地區犬狂犬病的綜合防治及預警監測提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1主要試驗盒 RV生物素雙抗原夾心ELISA試劑盒(Canine RV-Ab ELISA KIT，10-77-138，201710)，購自上海酶聯生物科技有限公司。

1.2問卷調查 采用網絡問卷(問卷星)對遵義地區大學生開展有關狂犬病的社會問卷調查，共收集647份有效問卷，問題涉及性別、年級、專業、犬狂犬病基本知識、犬咬傷后傷口處理措施等。

1.3血清樣品 采集及處理 2016年6月至2017年6月于遵義地區寵物醫院采集422份犬血清樣品，其中297份來自寵物犬，125份來自流浪犬，雄性占58.06%(245/422)，雌性占41.94%(177/422)。血液樣品經3 000 r/min離心10 min后取血清于2 mL的EP管中，置于-20 ℃冰箱保存待用。并對犬的基本信息進行歸納統計，包括犬品種、性別、年齡、既往病史、疫苗注射情況等。

1.4RV血清抗體檢測 血清樣品采用ELISA試劑盒檢測RV抗體，根據說明書要求操作。每板設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔。以空白對照調零，在450 nm波長依序測量各孔的吸光度(OD450值)。結果判定：試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10，臨界值計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15，陰性判定：樣品OD450值<臨界值者為犬RV陰性，陽性判定：樣品OD450值≥臨界值者為犬RV陽性。

1.5數據分析 運用SPSS24.0版比率分析不同變量置信區間，交叉表卡方檢驗分析寵物犬、流浪犬以及犬性別之間RV抗體陽性率是否存在差異，以P<0.05認為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1犬血清來源信息統計結果 422份犬血清來源信息詳見表1、表2。調查發現，297例寵物犬中192例接種過狂犬疫苗、65例未接種狂犬疫苗、40例狂犬疫苗接種信息不詳，125例流浪犬免疫信息不詳。

2.2RV血清抗體檢測結果 RV血清抗體檢測結果顯示，犬RV血清抗體的總陽性率為43.36%(183/536)，雄性陽性率為41.63%(95%CI0.35-0.48)，雌性陽性率為45.76%(95%CI0.38-0.53)，犬性別之間RV抗體陽性率無統計學差異(χ2=0.714,P>0.05)；寵物犬RV抗體陽性率為56.57%(95%CI0.51-0.62)，其中接種過狂犬疫苗的寵物犬其RV抗體陽性率為77.08%(148/192)，未接種狂犬疫苗或接種信息不詳寵物犬RV抗體陽性率為19.06%(20/105)，流浪犬RV抗體陽性率為12%(95%CI0.06-0.18)，寵物犬RV抗體陽性率顯著大于流浪犬(χ2=71.143,P<0.05)，詳見表3、表4。

2.3問卷調查結果 本次調查共收集調查問卷647份，其中，男性占44.36%(287/647)，女性占55.64%(360/647)，醫學類專業人數占61.67%(399/647)，非醫學類專業人數占38.33%(248/647)，調查人數性別與年級分布情況詳見圖1。

調查人群中，45.75%(296/647)的人曾被犬咬傷或抓傷過，傷人動物犬中，自家寵物犬占34.12%(101/296)，他家寵物犬占57.43%(170/296)，流浪犬占5.07%(15/296)，不清楚者占3.38%(10/296)，詳見圖2。曾被犬咬傷或抓傷的調查者中，60.47%(179/296)的人認為處理傷口的最佳方式是用肥皂水或清水徹底沖洗傷口，39.19%(116/296)的人認為是采用酒精或碘伏消毒傷口，高達77.36%(229/296)的人認為應在24 h內接種狂犬疫苗。

被調查者中當被問及犬接種狂犬疫苗后，被其咬傷的人是否有必要接種人用狂犬疫苗時，90.11%(583/647)的調查者認為有必要、僅有4.95%(32/647)的認為沒有必要、4.95%(32/647)不清楚。

表1 犬樣本基本信息統計表Tab.1 Statistical table of basic information of dog samples

表2 犬品種信息統計表Tab.2 Statistics table of dog variety information

表3 不同性別犬RV抗體陽性率Tab.3 Positive rate of RV antibody in different sex dogs

表4 不同來源犬RV抗體陽性率Tab.4 Positive rate of RV antibody in dogs from different sources

圖1 問卷調查人數信息統計Fig.1 Information statistics table of questionnaire survey

圖2 被犬咬傷人數情況統計表Fig.2 Statistics on the number of bites by dogs

3 討 論

3.1遵義地區RV血清學調查 本次調查共收集犬血清422份，422份血清來源犬中貴賓、雪納瑞、博美分別占35.07%(148/422)、12.32%(52/422)、10.66%(45/422)，3種小型犬種共占58.06%(245/422)，由此可見，小型犬種深受遵義地區寵物主喜愛。犬血清RV抗體檢測發現，RV抗體總陽性率為40%(12/536)，寵物犬、流浪犬、雄性犬、雌性犬的RV抗體陽性率分別為56.57%(168/297)、12%(15/125)、41.63%(102/245)、45.76%(81/177)，犬性別與RV抗體陽性差異無統計學差異(P=0.398)，寵物犬與流浪犬RV抗體陽性差異存在統計學意義(P=0.001)，調查結果與國內某些省市陽性率相比，高于廣州(59.05%)[10]、廣西(67.57%)[11]、雅安(77.68%)[12]，低于新疆(55.53%)[13]、長沙(65.4%)[14]，與國外調查結果相比存在差異，例如，Kartskhia[15]等調查發現，格魯吉亞地區犬RV抗體陽性率高達98.3%(237/241)，其狂犬疫苗覆蓋率達65%(373/572)；Peres等[16]檢測發現巴西圣保羅州農村地區51只犬中，68%的犬RV抗體滴度處于保護水平(≥0.5 UI/mL)，32%的犬低于保護水平；Pimburage等[17]對斯里蘭卡卡魯塔拉區510例犬肌肉接種單價RV滅活疫苗，在接種后0 d，30 d，180 d，360 d采用RFFIT進行RV抗體檢測，結果發現，單劑量的狂犬疫苗不能使40.42%的流浪狗與57.14%未接種過疫苗的幼年犬產生免疫保護水平的抗體滴度，犬只有在多次疫苗接種后才能使抗體滴度高于保護水平；Saeki等[18]對日本216只幼犬(<91 d)進行RV抗體檢測，結果顯示，216只幼犬中僅有34只超過中和抗體效價的8倍，如忽略母源抗體存在的可能，幼犬單劑量的疫苗免疫不能使抗體效價達到持續或足夠的水平；我國蔣碧美等[19]研究發現，犬全年免疫一次狂犬疫苗的抗體合格率達不到WHO推薦的標準(全年維持在70%以上)，而實行春秋兩季2次免疫，能有效提高犬RV的抗體保護水平。由此可知，犬進行狂犬疫苗接種后，部分犬不能產生免疫保護水平的抗體滴度，要使抗體效價達到足夠水平必須連續接種狂犬疫苗。檢測用犬的來源與檢測結果密切相關，此次調查犬血清標本數僅為422例，檢測結果只能反映本次調查情況。

根據貴州統計年鑒顯示近兩年貴州狂犬病死亡人數僅為112人(2015年62人， 2016年50人)[20]，而本地區犬RV的總陽性率高達43.36%(183/536)，如果高陽性率表明犬高的狂犬病病毒感染率，而死亡人數與犬RV高陽性率之間存在偏差，可能推測本地區犬RV抗體陽性率要明顯低于43.36%，因為寵物犬中未接種狂犬疫苗或接種信息不詳的犬(RV陽性率為19.06%)與流浪犬(RV陽性率為12%)的陽性率很可能是與RV疫苗免疫有關，寵物犬中疫苗接種信息不詳不代表其實際未進行過RV疫苗免疫，且由于流浪犬RV免疫背景無法知曉，在成為流浪犬之前寵物主也可能已經對其進行過RV疫苗免疫。

3.2問卷調查分析 問卷調查發現，647人中曾被犬咬傷或抓傷的占45.75%(296/647)，其中，91.55%(271/296)的人是被寵物犬所傷，8.45%(25/296)的人被流浪犬或不明身份犬所傷，說明寵物犬是仍然是傳播RV的一個嚴重威脅。647人中77.28%(500/647)的人認為實驗過程中被犬咬傷或抓傷最有可能患狂犬病，56.41%(365/647)的人知道被犬咬傷或抓傷應立即使用肥皂水或清水徹底沖洗傷口，75.89%(491/647)的人知道RV主要入侵人體的神經系統，77.43%(501/647)的人認為被犬咬傷后應在24 h以內進行狂犬疫苗接種，說明在校大學生對狂犬病相關知識具有一個較高的認知水平。

調查發現，39.41%(255/647)的寵物主未對其寵物犬進行狂犬疫苗的免疫接種，這種情況對于人與犬狂犬病的預防是極為不利的，而在狂犬病多發的非洲國家，犬狂疫苗覆蓋率低，也是其狂犬病多發的原因之一。例如，非洲馬拉維每年因狂犬病發生死亡的人數接近500人，全國40萬多只犬中，僅有0.5%的犬接種過狂犬疫苗[3, 21]；Garba[22]調查發現尼日利亞尼日爾州犬與人的比例為1∶5.4，該州732 476只犬中大約30.4%的犬從未接種過狂犬疫苗；坦桑尼亞東部農村社區人群中，以往的大規模疫苗接種運動只覆蓋了狗群的24.4%[23]。

3.3狂犬病的流行與控制 雖然狂犬病對公共健康造成嚴重威脅，但在亞洲和非洲國家，狂犬病仍然是一種易被忽視的疾病。家養犬是狂犬病控制的主要目標，是RV傳播給人類和其他家畜的主要宿主，但在犬狂犬病疫情控制較好的歐洲、北美、澳大利亞及部分拉丁美洲國家狂犬病的傳染原為蝙蝠、狐、貓鼬、豺、狨猴和浣熊等野生動物，而被犬咬傷患狂犬病死亡的病例十分罕見[24]，在美國犬已不是RV的主要宿主。美國2003年至2014年7月間僅報告了33例人類狂犬病死亡的病例，絕大多數是因為接觸了蝙蝠等野生動物而導致的，2015年10月，一名77歲的懷俄明州居民因蝙蝠咬傷感染狂犬病而死亡，這是自2012年以來美國第1例國內感染病例[25-26]。Klevar等[27]認為搜救犬的跨境運輸也可能導致狂犬病在歐洲的傳播，檢測發現從東歐進口到挪威的搜救犬(已接種狂犬疫苗)53.33%(40/75)未能產生足夠的抗體滴度(≤0.5 IU/mL)。

海地是西半球人類與動物狂犬病發病率最高的國家，由于獸醫準入門檻較低、流浪犬較多、動物福利水平較低等原因加劇了狂犬病的發生，Medley等[28]對海地2013年至2015年間的1 409只瘋狗進行了回顧性的評價，實驗室檢測發現1 409只瘋狗中48只患有狂犬病，雖然對所有犬咬傷者進行狂犬疫苗接種是減少人類狂犬病死亡的一種非常有效的方法，然而，這可能給遭受低風險暴露的受害者造成不必要的經濟負擔，處方過量也會導致地區疫苗供應短缺，特別是對于海地這樣一個資源短缺的國家。Schildecker等[29]對海地2005個寵物主人進行流行病學調查，調查發現，超過50%的犬處于放養狀態，超過80%的犬主人在為他們的犬咨詢狂犬疫苗接種時遇到困難，32%的犬在調查前一年發生死亡，死亡的犬中18%的犬與狂犬病的癥狀一致，人被犬咬傷十分常見，超過3%的受訪者在調查前一年被犬咬傷過。

世界動物衛生組織(OIE)將狂犬病列為法定報告的B類動物疫病，目前控制該病的方法主要是向動物咬傷者提供有效的暴露后預防(PEP)，而全球每年因狂犬病而造成的經濟損失高達86億美元，其中大量資金用于狂犬病暴露人群狂犬病疫苗與免疫球蛋白的注射[30]。2015年12月，WTO、OIE、FAO等組織在瑞士日內瓦招開了支持全球狂犬病控制聯盟(GARC)的重要國際會議，制定了消除犬介導的人類狂犬病的框架性協議，以確保2030年實現消除狂犬病的目標[31]。孟加拉政府已貫徹實施4種積極策略以保證消除狂犬病：宣傳、溝通和社會動員、狗咬傷后的現代治療、犬大規模疫苗接種和犬的種群管理[32]；2010年，在比爾蓋茨和梅琳達基金會的支持下，菲律賓維沙揚群島開始了狂犬病的清除項目，研究表明對犬進行大規模的疫苗接種比對在人身上進行治療更具成本效益[33]。

控制和消滅狂犬病不單是一個純粹的醫學問題，也是一個社會經濟、政治、動物福利問題，世界范圍內消滅狂犬病需要各個國家的共同努力，2030年才能實現消滅狂犬病的目標。

利益沖突：無