CA199、TMPRSS4在早期非小細胞肺癌組織的表達及在腫瘤血管形成中的作用

黃漢琮 陳乾華 楊曉蕊

(航空總醫院，北京 100012)

肺癌是目前臨床常見的惡性腫瘤之一，對人類健康危害極其嚴重〔1〕。相關報道顯示〔2〕，近年來各個國家的肺癌發病率平均增長了15%～65%。肺癌患者中大部分是非小細胞肺癌(NSCLC)患者預后通常較差，很大一部分原因是診斷出肺癌病變時已經是肺癌中晚期，錯過了最佳治療時間。穿膜絲氨酸蛋白酶(TMPRSS)4是穿膜絲氨酸蛋白酶中的主要成員，具有胰蛋白活性〔3〕。本研究探討TMPRSS4、糖鏈抗原(CA)199在早期NSCLC組織及癌旁組織的表達及與腫瘤血管形成中的作用。

1 資料和方法

1.1一般資料 選取2014年1～12月在中國醫科大學航空總醫院胸外科接受治療的原發性早期NSCLC患者85例，男56例，女29例，年齡40～73〔平均(61.52±10.93)〕歲，平均體重指數(21.7±2.1)kg/m2。所有患者經病理診斷證實為早期NSCLC。腺癌64例，鱗癌21例；高分化33例，中分化與低分化各26例。排除標準：①入院前已接受化療、放療以及其他抗癌治療；②合并糖尿病、高血壓等疾病；③有顱腦、肝臟等遠處轉移。

1.2研究方法

1.2.1采用免疫組化法檢測NSCLC患者體內癌組織及癌旁組織CA199、TMPRSS4及CD34的表達 手術取患者癌組織及癌旁組織制成切片并染色。將切片置于60℃的環境中保存1 h，采用二甲苯溶液脫蠟、酒精退水。分成3份分別加入TMPRSS4、CA199及CD34抗體進行單抗，培育后自來水沖洗，復染、氨水反藍、脫水干燥等操作，最后封片進行鏡檢。記錄CA199及TMPRSS4陽性檢出率。

1.2.2采用Real-time PCR檢測癌組織與癌旁組織中TMPRSS4 mRNA的表達量 提取14對NSCLC患者癌組織及癌旁組織的總RNA，根據D260/D280的比值來測定RNA的濃度。反應條件為95℃下預變性2 min，94℃下變性20 s，60℃退火20 s，72℃下延伸30 s，總共40個循環。

1.3結果判斷 在鏡下觀察免疫組織化學的結果，若細胞質與細胞核呈現棕黃色的細顆粒則為陽性表達，TMPRSS4蛋白的陽性表達為細胞膜陽性。根據陽性細胞所占的百分比分為陽性及陰性：陽性細胞率<25%為陰性，≥25%為陽性。根據腫瘤血管形成的定量評價方法對微血管密度(MVD)進行計數。

1.4統計學方法 采用SPSS13.0軟件進行χ2及t檢驗，相關性分析選用Spearman法。

2 結 果

2.1NSCLC患者CA199的表達與臨床病理類型、癌旁組織的關系 CA199在癌組織中陽性率為91.76%，明顯高于癌旁組織中的陽性率(16.47%)；TNM分期中Ⅰ期的陽性率為82.35%，明顯低于Ⅱ期的陽性率(98.04%)，差異均有統計學意義(均P<0.05)。見表1。

表1 NSCLC患者CA199的表達與病理類型、癌旁組織的關系〔n(%)〕

2.2NSCLC患者TMPRSS4 mRNA表達量、蛋白陽性檢出率與癌旁組織的關系 TMPRSS4 mRNA在癌組織中的表達量為1.827±0.451，顯著高于癌旁組織(0.915±0.316)；TMPRSS4蛋白在癌組織中的檢出率為82.35%，顯著大于癌旁組織(16.47%)，差異均有統計學意義(t=15.269,P=0.000;χ2=73.798,P=0.000)。

2.3NSCLC組織內 MVD 與臨床病理特征的關系 TNM分期Ⅱ期的患者高MVD的比例顯著高于Ⅰ期，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 NSCLC組織內 MVD 與臨床病理特征的關系(n)

3 討 論

CA199是細胞膜上的糖脂質，分子量較大，是目前臨床上對胰腺癌敏感度最高的腫瘤標志物〔4〕。有相關報道表明，TMPRSS4在人體正常組織中很難檢測到，但在胰腺癌及各種癌癥組織中通常呈現高表達〔5〕。CD34蛋白是一種人體血管內皮細胞的特殊標志物，臨床上能夠通過對CD34蛋白的表達檢測腫瘤患者腫瘤組織中的腫瘤血管密度，從而判斷腫瘤血管的形成〔6〕。本研究結果提示CA199在NSCLC患者癌組織中的表達明顯多于癌旁組織，對肺癌的早期診斷具有重要意義。李培超等〔7，8〕的研究中發現，CA199可作為肺癌的一個檢測指標，而對腫瘤病理分型診斷意義不大。在本研究中，CA199在肺癌組織中的表達遠高于癌旁組織同樣能證明此結論。原因可能在于TMPRSS4表達在某些器官和腫瘤組織的細胞表面，具有可以降解細胞膜及其細胞外基質的潛在功能，因此可以促進腫瘤的擴散和轉移。本研究結果提示NSCLC的發生、加重與TMPRSS4的高表達關系密切。有報道亦證實，TMPRSS4基因的表達若較高能夠導致NSCLC患者腫瘤血管形成〔9〕。本研究中TNM分期Ⅱ期的患者高MVD的比例顯著高于Ⅰ期。這與郭延林等〔10〕報道的NSCLC腫瘤的發展程度與TMPRSS4表達水平、MVD水平密切相關相符。綜上，TMPRSS4及CA199在NSCLC組織中為高表達，CA199對早期診斷NSCLC的具有重要意義，TMPRSS4促進了腫瘤的發展與腫瘤血管的形成。