維藥高孜班提取物對 D－半乳糖致衰老小鼠模型的作用

阿娜古麗·馬合木提，熱比姑麗·伊斯拉木，曼爾丹·尼牙孜

（新疆維吾爾自治區維吾爾醫藥研究所·新疆維吾爾醫方劑學實驗室，新疆 烏魯木齊 830049）

高孜班亦稱牛舌草，別名為高孜班印地、叁尕吾里，為紫草科植物意大利牛舌草 Anchusaitalica Retz.或同科植物琉璃苣 Borage of ficinales L.的地上部分。維吾爾醫學認為，高孜班屬性濕熱，功能生濕生熱，調節異常黑膽質，潤濕補腦，祛寒補心，爽心悅志，潤燥消炎，止咳平喘等，主治干寒性或黑膽質性疾病，如干性腦虛，寒性心虛、心悸、憂郁癥，干性胸膜炎、肺炎及結核疾病等，寒性咳嗽、感冒、氣短等[1－2]。目前，高孜班作為新疆維吾爾自治區維吾爾醫醫院院內制劑主要藥物，在抗抑郁、抗老年癡呆領域也有一定進展。本課題組前期已開展了維藥高孜班化學成分相關實驗研究[3－5]。本研究中通過D－半乳糖致衰老小鼠模型實驗，探討了維藥高孜班提取物的抗衰老作用及其可能的途徑，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物、試藥與儀器

動物：SPF級昆明種小鼠，60只，雌雄各半，體質量（20±2）g，由新疆實驗動物研究中心提供，動物實驗許可證號為SCXK（新）2016－0001。動物實驗經新疆維吾爾自治區維吾爾醫藥研究所藥物安全性評價中心（藥物非臨床研究質量管理規范中心，SYXK＜新＞2016－0005）審核，符合動物倫理委員會的管理準則。實驗開始前檢疫，經一般行為觀察，選用符合要求的54只小鼠進行實驗。

試藥與儀器：高孜班（Gao Zi Ban，GZB，新疆麥迪森維藥有限公司，產地巴基斯坦，批號為201602）；D－半乳糖（D－galactose，上海藍季科技發展有限公司，批號為161210）；0.9%氯化鈉注射液（新疆華世丹藥業股份有限公司，批號為 18030508）；維生素 E（vitamin E，VE，上海源葉生物科技有限公司，批號為CAS＃59－02－9，YY11518－100 g分進）。小鼠白細胞介素 2（IL－2）試劑盒（批號為 20171120）、小鼠白細胞介素 6（IL － 6）試劑盒（批號為 20171202）、小鼠腫瘤壞死因子 －α（TNF －α）試劑盒（批號為20171111），均購于武漢博士德生物技術有限公司。Model550型酶標儀（美國 Bio－Rad公司）；Thermo fisher低溫冰箱（－86℃，賽默飛世爾高科技＜中國＞有限公司）；TGL－5－A型低速大容量離心機（上海安亭科學儀器廠）。

1.2 方法

高孜班提取物的制備[3－4]：取高孜班 20 kg，粗粉碎，加石油醚冷浸，脫脂，藥渣粉末曬干，分別取粉碎脫脂后的高孜班每份10 kg，加15倍量70%乙醇，回流提取 2 h，共提取3次，濾過，濾液減壓濃縮至1 500 mL，備用。

D－半乳糖致小鼠衰老模型建立[6－7]：將54只KM小鼠隨機分為正常對照組（10只）和衰老模型組（44只），雌雄各半。正常對照組小鼠腹腔注射生理鹽水；衰老模型組小鼠腹腔注射 D－半乳糖（200 mg／kg），1次／天，連用46 d。

對 D－半乳糖致小鼠衰老模型的影響：造模成功后，將符合要求的40只小鼠隨機分為衰老模型組（模型組）、陽性對照藥維生素 E 組（VE 組，10 mg／kg）、GZB提取物高劑量組（GZB －H 組，3.65 mg／kg）、GZB 提取物低劑量組（GZB －L 組，1.8 mg／kg），各 10 只。各組灌胃給予相應藥物，正常對照組灌胃等體積生理鹽水。各組灌胃容積均為每10 g體質量0.2 mL，1次／日，連續3周。小鼠每周測1次體質量，根據體質量變化隨時調整給藥劑量。各組小鼠于末次給藥1 h后，摘眼球法取血。4℃下3 000 r／min離心10 min，取上清液于－86℃保存待測。然后快速常規取出腦組織，用生理鹽水沖洗，濾紙吸干；隨后取適量腦組織，稱定質量，制勻漿，在4℃下3 000 r／min離心10 min，取上清液，待測。采用酶聯免疫吸附（ELISA）法分別檢測血清和腦組織IL－2，IL－6，TNF－α水平，操作步驟均按試劑盒說明書進行[8－9]。

1.3 統計學處理

采用SPSS 17.0統計軟件 One－Way ANOWA方法進行多組樣品均數比較，所得數據用±s表示，檢驗水準 α＝0.05。

2 結果

2.1 對血清中IL－2，IL－6，TNF－ 水平的影響

與正常對照組比較，衰老模型組小鼠血清IL－2水平降低，IL－6和 TNF－α 水平升高（P＜0.01）。與衰老模型組比較，VE組、GZB－H組小鼠血清IL－2水平升高，IL－6和 TNF－α水平降低（P＜0.01）；GZB－L組小鼠血清 IL－2水平升高（P＜0.05），血清 IL－6和TNF－α 水平降低，但差異無統計學意義（P＞0.05）。詳見表1。

表1 各組小鼠血清中 IL－2，IL－6，TNF－ 水平比較（X ± s，pg／mL，n＝10）

2.2 對腦組織中IL－2，IL－6，TNF－ 水平的影響

與正常對照組比較，衰老模型組小鼠腦組織IL－2水平降低，IL－6和 TNF－α水平升高（P＜0.01）；與衰老模型組比較，VE組和GZB－H組小鼠腦組織IL－2水平升高，IL－6和 TNF－α 水平降低（P＜0.05）；GZB－L組小鼠腦組織IL－2水平升高，IL－6水平降低（P ＜0.05），雖小鼠腦組織 TNF－α 水平降低，但差異無統計學意義（P ＞0.05）。詳見表 2。

表2 各組小鼠腦組織中 IL－2，IL－6，TNF－ 水平比較（X ± s，pg／mL，n＝10）

3 討論

衰老是生物體在生命周期中隨著年齡的增長而發生的全身各組織、器官功能減退和穩態功能下降的過程，是諸多病理、生理過程綜合作用的結果，是一個不可抗拒的過程[10－11]。延緩衰老藥物是一類從機體物質和能量代謝出發，在組織器官、細胞及分子水平上延緩各種退行性變化，提高生物活力、延長壽命的藥物。由于生物體復雜，因此延緩衰老藥物研究的途徑和方法也有多種[12－13]。其中，D－半乳糖致衰老動物模型以衰老的代謝學說為指導建立的，是目前最常用的制備衰老模型的方法[14]。

本研究結果顯示，與正常對照組比較，衰老模型組小鼠血清、腦組織IL－2水平降低，IL－6和TNF－α水平升高（P＜0.01）。提示 D－半乳糖致衰老動物模型成立。衰老的特征之一是免疫功能降低，主要表現為免疫細胞數量減少和功能減弱[5－7]。與衰老模型組比較，VE組和GZB－H組小鼠血清和腦組織中IL－2水平均升高，IL－6和 TNF－α 水平均降低（P＜0.05）；GZB－L組小鼠血清 IL－2水平升高（P＜0.05），雖小鼠血清IL－6和TNF－α水平均降低，但差異無統計學意義（P ＞0.05）；GZB－L組小鼠腦組織 IL－2水平升高，IL－6水平降低，TNF－α水平降低，但差異無統計學意義（P＞0.05）。提示VE具有抗衰老作用，增強小鼠免疫功能，可延緩衰老；GZB提取物通過增強小鼠免疫功能，延緩衰老，且具有一定的劑量依賴性。

綜上所述，維藥高孜班提取物可通過調節 D－半乳糖致衰老小鼠模型免疫狀態，從而起到抗衰老作用，但有待深入研究。