細(xì)胞免疫功能檢測(cè)在病毒性心肌炎中的臨床價(jià)值探討

楊海霞，孔慶鑄，彭建明

(中山市博愛醫(yī)院 檢驗(yàn)科,廣東 中山528403)

作為一種因病毒感染而導(dǎo)致的局灶性或彌漫性心肌變性或壞死性疾病，病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)可以導(dǎo)致患者心功能障礙，出現(xiàn)一系列不良反應(yīng)[1]。同時(shí)其在急性期過后仍然有潛在活動(dòng)性的可能，嚴(yán)重的可以導(dǎo)致患者猝死[2,3]。目前VMC的發(fā)病機(jī)制仍未完全明了，以往研究[4,5]表明病毒性心肌炎的患者多有細(xì)胞免疫功能低下的表現(xiàn)，同時(shí)可伴有免疫調(diào)節(jié)失衡的表現(xiàn)，因而患者細(xì)胞的免疫功能可能是影響患者病毒性心肌炎發(fā)生和預(yù)后的一個(gè)重要因素。為此，選擇2015年11月至2017年11月于我院治療的病毒性心肌炎患者為研究對(duì)象，對(duì)該類患者治療前后的T細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞(nature killer cell,NK)和腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)和分析，同時(shí)與健康對(duì)照組相對(duì)比，借以了解病毒性心肌炎患者的免疫功能相關(guān)因子的變化情況，為臨床病毒性心肌炎的診斷與治療提供思路。

1 資料與方法

1.1一般資料選擇2015年11月至2017年11月于我院治療的94位病毒性心肌炎患者為研究對(duì)象納入實(shí)驗(yàn)組，其中52位男性，42位女性，患者的年齡在21-64歲之間，其平均年齡(42.3±8.4) 歲。所有納入研究對(duì)象均參考相關(guān)規(guī)范的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6,7]，同時(shí)排除了有其他重要臟器原發(fā)性疾病或免疫系統(tǒng)疾病的患者，此外，近期有過使用激素治療歷史的患者也被排除。還選取同期100例來我院行體檢的健康人群作為對(duì)照組，其中男性56例，女性44例，其年齡在19-62歲，平均年齡為(41.8±7.6) 歲。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的一般資料相比較其差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，表明兩組基線資料具有可比性。

1.2治療方法

使用中西醫(yī)結(jié)合的療法對(duì)病毒性心肌炎患者進(jìn)行治療，堅(jiān)持抗病毒、抗感染的基本原則和補(bǔ)充患者電解質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)心肌等相關(guān)對(duì)癥支持治療，必要時(shí)加用抗心律失常的相關(guān)藥物。此外，給予患者黃芪注射液和丹參注射液進(jìn)行靜脈滴注治療，療程持續(xù)1個(gè)月。

1.3檢測(cè)方法

所有研究對(duì)象均在入院24 h內(nèi)和出院時(shí)接受靜脈采血行免疫功能相關(guān)因子的檢測(cè)。使用間接免疫熒光法對(duì)研究對(duì)象外周血中T淋巴細(xì)胞亞群CD3、CD 4、CD8和CD4/CD8等活性水平進(jìn)行檢測(cè)，使用的是中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院所提供的相關(guān)檢驗(yàn)試劑。使用125IUdR釋放試驗(yàn)來檢測(cè)NK細(xì)胞的活性水平：使用125IUdR對(duì)K562細(xì)胞標(biāo)記作為靶細(xì)胞，計(jì)算的效靶比為100∶1，并持續(xù)溫育20 h，設(shè)置培養(yǎng)液對(duì)照作為為自然釋放，以TritonX-100對(duì)照作為最大釋放，沉淀后的細(xì)胞接受胰蛋白酶和DNA酶相關(guān)處理，再對(duì)試劑進(jìn)行離心，使用γ計(jì)數(shù)器測(cè)量其上清液和沉淀細(xì)胞的cpm值，最后根據(jù)125IUdR釋放的百分率減去自然釋放百分率進(jìn)行計(jì)算。TNF-α水平的測(cè)定方法為：選用細(xì)胞培養(yǎng)板小孔中生長(zhǎng)良好的小鼠成纖維細(xì)胞L929作為研究用的靶細(xì)胞，后加入遞倍稀釋的待檢血清和抗凝全血經(jīng)細(xì)菌脂多糖誘導(dǎo)培養(yǎng)12 h的上清，同時(shí)加人定量的放線菌素D來提高靶細(xì)胞的相關(guān)敏感性，同時(shí)設(shè)定培養(yǎng)液作為陰性對(duì)照，標(biāo)準(zhǔn)定量TNF-α作為陽性對(duì)照。經(jīng)過24 h室溫孵育后，進(jìn)行洗滌和結(jié)晶紫染色，后洗去相關(guān)染料，繼續(xù)加入10 g/L 的SDS進(jìn)行溫育，并在酶標(biāo)儀上檢測(cè)A570值，最后根據(jù)陰性對(duì)照孔細(xì)胞50%溶解樣品的最大稀釋度的倒數(shù)來作為TNF-α的活性單位。

1.4觀察指標(biāo)

本研究的觀察指標(biāo)為研究對(duì)象外周血中T淋巴細(xì)胞亞群CD3、CD4、CD8活性水平和CD4/CD8比值，同時(shí)觀察外周血中NK細(xì)胞和TNF-α的表達(dá)水平。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件SPSS 22.0對(duì)本研究的所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，研究對(duì)象的細(xì)胞活性水平均采用“x—±s”表示，組間比較使用t檢驗(yàn)進(jìn)行對(duì)比分析，如果檢驗(yàn)結(jié)果P<0.05，則表示兩組數(shù)據(jù)對(duì)比差異具有顯著性，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 外周血T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平

如表1所示，和健康對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組的CD3、CD4、CD8活性水平和CD4/CD8比值均顯著下降，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.001)；如表2所示，病毒性心肌炎患者治療后的外周血CD3、CD4、CD8活性水平和CD4/CD8比值均顯著高于治療前，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。

表1 兩組外周血T淋巴細(xì)胞亞群對(duì)比

表2 病毒性心肌炎患者治療前后外周血T淋巴細(xì)胞亞群對(duì)比

2.2 外周血NK細(xì)胞活性和TNF-α水平

如表3所示，和健康對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組的NK細(xì)胞活性和TNF-α水平均顯著下降，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.001)；如表4所示，病毒性心肌炎患者治療后的外周血NK細(xì)胞活性和TNF-α水平均顯著高于治療前，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.001)。

表3 兩組外周血NK細(xì)胞活性和TNF-α水平對(duì)比

表4 病毒性心肌炎患者治療前后外周血NK細(xì)胞活性和TNF-α水平對(duì)比

3 討論

作為常見的心血管疾病之一，病毒性心肌炎對(duì)患者的影響較為嚴(yán)重，但是目前病毒性心肌炎的發(fā)病機(jī)制仍然不明確，其可能與病毒感染后直接引起的患者心肌損傷和免疫功能失調(diào)相關(guān)[8,9]。有學(xué)者[10]報(bào)道該過程中細(xì)胞免疫可能比體液免疫具有更加顯著的作用。病毒性心肌炎與與多種病毒如脊髓灰質(zhì)炎病毒、肝炎病毒和流感病毒等密切相關(guān)[11]，而在機(jī)體防御病毒感染的過程中，機(jī)體的細(xì)胞免疫發(fā)揮著重要作用，其中T淋巴細(xì)胞既是細(xì)胞免疫的效應(yīng)細(xì)胞，也是機(jī)體非常重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞[12]，因此，T淋巴細(xì)胞對(duì)病毒性心肌炎的發(fā)生、治療和預(yù)后有著極為重要的作用。

以往研究[13-16]報(bào)道，T淋巴細(xì)細(xì)胞的功能、數(shù)量以及相關(guān)比例的變化和多種疾病的發(fā)生預(yù)后存在密切相關(guān)性。淋巴細(xì)胞中CD3主要指示的是成熟T淋巴細(xì)胞的數(shù)量，而CD4作為一種有誘導(dǎo)性的T淋巴細(xì)胞亞群,機(jī)體CD4水平的增加則表示機(jī)體的免疫功能得到改善[17]。一般情況下，機(jī)體的CD4/CD8處于一種動(dòng)態(tài)平衡,借以維持機(jī)體免疫功能的有效。而作為一種粒狀淋巴細(xì)胞，NK細(xì)胞也是機(jī)體免疫系統(tǒng)的非常重要的組成部分，機(jī)體的NK細(xì)胞主要通過自然殺傷發(fā)揮的細(xì)胞毒作用[18]。此外，NK細(xì)胞在機(jī)體抗病毒感染和機(jī)體免疫監(jiān)視過程中也起非常重要的作用[19]。NK細(xì)胞可以選擇性殺傷病毒感染的靶細(xì)胞[20]。而作為機(jī)體巨噬細(xì)胞分泌的一種重要分子蛋白，TNF-α主要由機(jī)體的單核巨噬細(xì)胞分泌， 其可以顯著抑制病毒的復(fù)制和減少病毒蛋白的合成，進(jìn)而減少病毒顆粒的產(chǎn)生，導(dǎo)致病毒感染性下降[21]。此外，TNF-α可以直接殺傷病毒感染細(xì)胞。值得注意的是，TNF-α具有一定的致熱性，其抗病毒的具體機(jī)制尚有待繼續(xù)探索[21]。

本文結(jié)果表明，與健康對(duì)照組相比，病毒性心肌炎患者 CD3、CD4、CD8活性水平和CD4/CD8比值均顯著下降，說明病毒感染后，機(jī)體的T細(xì)胞亞群并不能有效地輔助機(jī)體的免疫細(xì)胞，導(dǎo)致病毒損害心肌細(xì)胞，同時(shí)，NK細(xì)胞活性和TNF-α水平均顯著下降，均提示機(jī)體細(xì)胞免疫受損。而經(jīng)過治療后，病毒性心肌炎患者 CD3、CD4、CD8活性水平和CD4/CD8比值和NK細(xì)胞活性、TNF-α水平顯著回升，均提示細(xì)胞免疫參與了病毒性心肌炎的發(fā)生發(fā)展與預(yù)后，與以往相關(guān)研究[22,23]發(fā)現(xiàn)較為一致，這些細(xì)胞免疫功能均是病毒性心肌炎診斷和評(píng)價(jià)預(yù)后非常重要的參考指標(biāo)。

綜上所述，病毒性心肌炎患者均存在著顯著的免疫功能紊亂，而機(jī)體的CD3、CD4、CD8活性水平、CD4/CD8比值和NK細(xì)胞活性、TNF-α水平均可以較好地反映機(jī)體的免疫功能狀態(tài)，這些可以作為病毒性心肌炎診斷和評(píng)價(jià)預(yù)后重要參考指標(biāo)，為病毒性心肌炎診斷與治療提供重要參考。

作者簡(jiǎn)介：楊海霞(1976-)，女，本科，主管技師，主要從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作。