豬尿中沙丁胺醇?xì)埩舻臋z測(cè)方法介紹

王鏨彧 于世明 李 蕊 江 淼 金慧然 陶 婭

黑龍江省農(nóng)產(chǎn)品和獸藥飼料技術(shù)鑒定站，哈爾濱 150001

沙丁胺醇于1975年首次在我國上市，其能快速地松弛氣道平滑肌，對(duì)因上呼吸道疾病引起的支氣管痙攣有良好的治療效果。當(dāng)沙丁胺醇作為豬的促生長(zhǎng)劑長(zhǎng)期添加使用后，豬宰殺后組織中可能有濃度較高的沙丁胺醇?xì)埩簦耸秤煤缶蜁?huì)出現(xiàn)頭暈、頭痛、肌肉顫動(dòng)、惡心、嘔吐等中毒癥狀，對(duì)心臟病患者和高血壓患者，甚至?xí)＜吧９P者就豬尿中沙丁胺醇?xì)埩舻母鞣N檢測(cè)方法作一總結(jié)，以期為食品藥品安全部門檢測(cè)沙丁胺醇提供科學(xué)參考。

1 高效液相色譜法

高效液相色譜法是在經(jīng)典液相柱色譜基礎(chǔ)上，采用高壓泵、高效填料和高靈敏度檢測(cè)器，實(shí)現(xiàn)了分析速度快，分離效率高和操作自動(dòng)化。檢測(cè)樣品通過提取和凈化后，再使用高效液相色儀進(jìn)行檢測(cè)。金雁等[1]報(bào)道過高效液相色譜法測(cè)定豬肉中沙丁胺醇?xì)埩袅康难芯浚i肉樣品中加入EDTA-2Na、磷酸溶液和高氯酸進(jìn)行提取，提取后的樣品再通過C18固相萃取柱進(jìn)行純化，純化后的樣品經(jīng)高效液相色儀檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果顯示，沙丁胺醇的最佳檢測(cè)波長(zhǎng)是196 nm，在0.04～10.0 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低檢出限為1 μg/mL，其中1、10、50 μg/mL 的平均回收率分別為 71.5%、82.1%、88.1%，3個(gè)回收質(zhì)量濃度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于10%，這說明該高效液相色譜法對(duì)豬肉中沙丁胺醇?xì)埩袅康臏y(cè)定具有良好的靈敏度和精密度。

2 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

質(zhì)譜分析法是通過對(duì)被測(cè)樣品離子的質(zhì)荷比的測(cè)定來進(jìn)行分析的一種分析方法，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀主要由高效液相色譜、接口裝置（電離源）、質(zhì)譜儀組成，高效液相色譜與一般的液相色譜相同，其作用是將混合物樣品分離后進(jìn)入質(zhì)譜儀。朱英才等[2]報(bào)道過使用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)豬尿中沙丁胺醇的殘留，豬尿樣品先用氫氧化鈉溶液和叔丁醇-叔丁基甲醚 (50∶50)溶液進(jìn)行提取，再用MCX小柱進(jìn)行凈化，凈化后的樣品過0.22 μm濾膜后供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀分析。檢測(cè)結(jié)果表明，沙丁胺醇使用MCX小柱凈化后的回收率為93.8%，在1～50 μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低檢出限為0.08 μg/L，最低定量限為0.27 μg/L，其中2、10、50 μg/L的平均回收率分別為89.1%、93.8%、96.6%，3個(gè)回收質(zhì)量濃度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于10%，這表明建立的檢測(cè)方法適用于豬尿中沙丁胺醇的檢測(cè)。

谷旭等[3]使用超高壓液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜法對(duì)沙丁胺醇在豬尿液和其代謝產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)定，豬尿樣品通過乙腈處理，37℃氮?dú)獯蹈梢揖?fù)溶，過0.22 μm濾膜后供試。試驗(yàn)結(jié)果顯示，沙丁胺醇的保留時(shí)間為1.8 min，在正離子模式下，沙丁胺醇的特征離子的質(zhì)荷比為240，沙丁胺醇生成較少的脫水碎片離子的質(zhì)荷比為222。沙丁胺醇給藥后0～6 h尿液樣本中鑒定出的代謝產(chǎn)物最多，共鑒定出可能的代謝物5個(gè)，其中2種代謝產(chǎn)物尚未見報(bào)道。

3 酶聯(lián)免疫吸附法

目前可以使用間接競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫法和直接競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫法來測(cè)定豬尿中沙丁胺醇?xì)埩簦緳z測(cè)方法操作簡(jiǎn)便，分析時(shí)間相對(duì)較短，且檢出限也在不斷降低。鄭宏偉等[4]報(bào)道過酶聯(lián)免疫試劑盒對(duì)豬尿中沙丁胺醇的含量測(cè)定效果和方法。豬尿經(jīng)過孵育和洗板處理后，通過酶標(biāo)儀測(cè)定并使用RIDAWIN軟件計(jì)算供試樣品中沙丁胺醇的含量。試驗(yàn)結(jié)果表明，豬尿中1、2、4和8 ng/mL 4個(gè)不同質(zhì)量濃度的沙丁胺醇的添加回收率分別為86.0%、90.5%、94.5%、93.2%，相對(duì)平均偏差為3.9%～11.6%，這表明本方法適合豬尿中沙丁胺醇的含量檢測(cè)。李建鯤等[5]報(bào)道過一種豬尿中的沙丁胺醇ELISA試劑盒檢測(cè)技術(shù)，使用間接競(jìng)爭(zhēng)ELSA法檢測(cè)豬尿樣樣品中的沙丁胺醇的含量，測(cè)定結(jié)果顯示，該測(cè)定方法可定量測(cè)定豬尿中沙丁胺醇含量的范圍為0.1～3.0 ng/mL，且516批豬尿樣品測(cè)試結(jié)果顯示，建立的測(cè)定方法的靈敏度良好，特別適用于沙丁胺醇低水平殘留的檢測(cè)。

4 膠體金免疫法

膠體金免疫法是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種快速定量檢測(cè)方法。現(xiàn)在膠體金免疫層析試紙條標(biāo)記探針的檢測(cè)靈敏度在不斷提高，對(duì)檢測(cè)物的檢出率也在不斷提升。吳雨豪等[6]報(bào)道過使用多枝狀膠體金免疫層析試紙條定量檢測(cè)豬尿中沙丁胺醇，多枝狀的膠體金有比傳統(tǒng)球形膠體金更高的摩爾消光系數(shù)，試驗(yàn)使用65 nm多枝狀膠體金，將抗沙丁胺醇單克隆抗體標(biāo)記在AuNFs上制備檢測(cè)探針，通過建立了基于T（試紙條檢測(cè)線）/C（質(zhì)控線）比值法來定量檢測(cè)豬尿中沙丁胺醇的含量。試驗(yàn)結(jié)果顯示，豬尿中沙丁胺醇的定量線性范圍為0.05～1.0 ng/mL，最低檢出限為0.027 ng/mL，豬尿中0.05、0.15、0.5 ng/mL 3個(gè)不同質(zhì)量濃度的沙丁胺醇的添加回收率分別為 107.74%、101.53%、110.68%，相對(duì)平均偏差為1.5%～9.1%，這表明本方法適合豬尿中沙丁胺醇的現(xiàn)場(chǎng)快速篩查檢測(cè)。

5 結(jié)語

隨著檢測(cè)分析技術(shù)的不斷發(fā)展，豬尿中沙丁胺醇的檢測(cè)方法的靈敏度和精確度也在不斷提高。相信將來沙丁胺醇的檢測(cè)技術(shù)會(huì)變得更加精確、操作更便捷，各種檢測(cè)方法都朝著實(shí)用方向進(jìn)發(fā)，為消費(fèi)者的食品安全保駕護(hù)航。