真菌感染性疾病的檢驗方法與鑒定

容富強

（廣東省江門市新會區皮膚醫院檢驗科，廣東 江門 529100）

真菌主要是真核細胞型的微生物，在臨床上的真菌感染的病原菌可分為條件致病性真菌、病原性真菌、致癌真菌以及產毒型真菌等[1]。近年來，實驗室檢驗常見以條件致病性真菌導致感染[2]。此類感染癥狀主要與抗生素、激素以及免疫抑制劑的濫用、自身機體免疫缺陷存在相關性。本文主要探討關于對真菌感染性疾病的檢驗方法及鑒定情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本院2017年9月-2018年9月間收治的200例真菌感染性疾病患者作為研究對象，包括由各種標本培養分離得出的真菌200株。納入對象包括男性124例、女性76例，患者年齡13歲-82歲，平均（62.4±6.3）歲。納入樣本包括痰液樣本142例、尿液樣本30例、糞便樣本5例、血液樣本15例以及其他樣本8例。患者對研究均知情同意，研究經倫理委員會審批。

1.2 方法 通過無菌采集樣本，對采集處進行局部消毒與處理，將采集到的樣本置于無菌容器中并立即送檢。要求對于不同的真菌感染進行不同部位樣本采集。對懷疑深部真菌感染患者的血液、痰液、腦脊液以及膿液等應及時進行樣本采集；對于淺部感染如表皮真菌感染、體癬等，則應刮取病變邊緣處的痂或皮屑等進行檢查；頭癬則應采集病變的發根等進行檢查。對于活組織檢查的部分樣品需采集雙份，將其中獲得的一份進行病理組織檢查，另一份進行真菌培養檢查，其中，真菌培養檢查主要采用直接鏡檢、培養檢查以及免疫學檢查方法進行檢查。各檢查方法均按照規范操作，對化學免疫分析儀及檢驗試劑盒等儀器依據使用說明書操作步驟進行，做好樣本的檢測記錄，綜合分析檢驗的結果。

1.3 統計學方法 采用統計軟件SPSS 19.0進行分析。計數資料采用率表示。

2 結果

200例患者檢出白色念珠茵134例（67.00%）、熱帶念珠茵30例（15.00%）、光滑念珠茵24例（12.00%）、近平滑念珠菌7例（3.5%）、葡萄牙念珠茵5例（2.5%）。

3 討論

真菌感染主要指致病性的真菌侵入到粘膜、皮膚、肌肉以及內臟等人體表層以下組織所引起的感染癥狀[3]。真菌感染可局限在機體內的某一臟器組織中，也可播散至全身。對于病原性的真菌主要包括淺部感染真菌以及深部感染真菌兩種，其中淺部感染真菌主要為皮膚絲狀菌，深部感染真菌主要為白假絲酵母菌以及新型隱球菌等。深部致病性真菌在正常的人體內不存在，此類真菌一旦侵入人體即可致病，此類真菌常見有球孢子菌、組織胞漿菌以及芽生菌等。而條件致病性真菌則是屬于人體的正常菌群之一，當機體的抵抗力下降時可致病，此類真菌常見如白念珠菌、新型隱球菌以及曲霉菌等。

在臨床上，對于感染性真菌的實驗室檢驗主要步驟包括樣本采集、檢驗程序以及方法，對于檢驗的方法常用有直接鏡檢、培養檢查、免疫學檢查等：（1）直接鏡檢是最為簡單且重要的一種檢驗方法。對于疑似淺部真菌感染的部分病變樣本（皮屑、甲屑、毛發）等的檢測中，將其置于玻片上并滴加濃度10%的氫氧化鉀溶液覆蓋玻片，通過微加熱熔化樣本的角質層使組織透明化，并置于顯微鏡下進行觀察。通過鏡檢可觀察到皮屑、甲屑中存在真菌的菌絲，在毛發內、外部可觀察到成串的孢子，出現上述情況的樣本可初步診斷癬菌感染。對于深部感染的真菌標本（痰液、腦脊液），涂片通過革蘭染色可對真菌的形態特征進行觀察并準確查出感染的種類。深部感染涂片常用染色方法除了革蘭染色，還包括瑞氏染色、乳酸酚棉藍染色以及熒光染色等。（2）培養檢查中，常用葡萄糖蛋白胨瓊脂培養基進行培養，對于深部真菌可采用血瓊脂或采用腦心浸液葡萄糖血瓊脂，于37oC下進行培養。根據不同菌種的可運用不同的培養基培養。在培養檢查中對細菌生長進行有效抑制，可于培養基中加入抗生素進行處理。培養方法常用有大試管培養法、平皿培養法以及玻片培養法等，多數的真菌培養溫度可選擇28oC，對于深部真菌則應選擇37oC進行培養。該檢查方法對于菌種鑒定需通過鑒別培養基結合分子生物學或生化反應等鑒定。（3）免疫學試驗是在近年來興起的一種用以對深部感染真菌抗體檢測的方法，可輔助診斷假絲酵母菌、莢膜組織胞漿菌以及曲霉菌等。但由于系統性感染的患者常出現免疫功能下降導致檢測不出抗體，多數真菌間的抗原性存在交叉反應，且在正常人群中存在一定比例的檢測陽性率，因此免疫學試驗結果需結合臨床實際情況進行診斷。通過免疫學可檢測血清以及其他部位的真菌抗原，因此對于真菌感染的早期診斷中具有一定的價值。

對于真菌感染性疾病的檢驗中，通過直接鏡檢、培養檢查、免疫學檢查等方法，可對臨床真菌感染患者的菌種進行有效檢出，而通過對真菌感染性疾病進行真菌檢驗與鑒定，可減少或避免臨床濫用抗生素的現象，該檢測方法具有重要的臨床價值。