針刺夾脊穴對大鼠胃腸動力障礙的作用及機制

魏峰，宋艷華，程斌，于慧娟，張莉莉

(1山東中醫藥大學附屬醫院，濟南250014；2山東中醫藥大學；3濟南市中心醫院)

功能性胃腸病是臨床常見病，研究表明針刺對胃腸運動功能紊亂具有較好的療效[1，2]。夾脊穴具有改善胃腸運動障礙，促進胃腸蠕動的作用[3]，目前對其作用機制的研究多集中于低位中樞神經，缺乏對延髓、下丘腦、海馬等高位中樞神經的研究。迷走神經背核(DMV)是中樞神經調節胃腸運動的最基本核團，在調節胃腸運動中發揮關鍵作用。DMV通過釋放谷氨酸和γ-氨基丁酸(GABA)等神經遞質作用于DMV內不同受體，實現對胃腸運動功能的調控。研究表明DMV復合體微量注射N-甲基-D-天冬氨酸受體(NMDAR)或GABA受體(GABAR)阻斷劑對胃腸運動的調控作用不同[4，5]。基于此，2016年10月～2018年6月本研究觀察針刺夾脊穴對胃腸蠕動障礙大鼠模型胃腸運動功能的作用，并考察DMV中的NMDA或GABAR對夾脊穴促進胃腸運動功能作用的影響。

1 材料與方法

1.1 動物、試劑及儀器 SD雄性大鼠45只，180～210 g，由山東大學實驗動物中心提供，動物生產許可證號SCXK(魯)20090001，標準飼料喂養，自由攝食、飲水；室溫18～22 ℃，空氣濕度40%～50%，自然光照明，換氣風扇通風。硫酸阿托品注射液(天津藥業集團)，葡聚糖藍-2000(上海超研生物科技有限公司)，犬尿烯酸(美國Sigma 公司)、法克羅芬(美國Sigma 公司)、荷苞牡丹堿(美國Selleck公司)、腦立體定位儀立體定位儀(日本Narishige公司)。

1.2 動物分組及模型制備 將大鼠隨機分為空白對照組、模型組、針刺組、針刺+NMDAR拮抗劑組、針刺+GABAR拮抗劑組，每組9只。禁食12 h，除空白對照組外其余各組皮下注射硫酸阿托品注射液(2 mg/kg)，建立胃腸動力障礙模型。空白對照組皮下注射等量生理鹽水。

1.3 DMV微量注射 各組給予葡聚糖藍-2000(20 mg/mL)1 mL灌胃，20 min后給予20%烏拉坦腹腔注射麻醉，待麻醉穩定后將大鼠俯臥位固定于鼠腦立體定位儀上，剪去頭頂部毛發，于兩耳連線沿正中切開皮膚1.5～2 cm，鈍性分離剝開皮下筋膜和骨膜，露出“十”字縫和“人”字點。移動鼠腦立體定位儀上下標尺，調節鼠頭部平面，使“十”字縫與“人”字點高水平，即顱骨水平位。核團定位根據Paxinos和watson大鼠腦立體定位圖譜進行DMV定位：P 13.24 mm，R 0.7 mm，H 8.15 mm。確定位置后用牙科鉆(鉆頭直徑l mm)鉆破顱骨。玻璃微量移液器將相應藥物注入迷走神經運動背核。針刺+NMDAR拮抗劑組給予犬尿烯酸5 μL，針刺+GABAR拮抗劑組給予荷苞牡丹堿、法克羅芬5 μL，注射于1 min完成[6]。空白組、模型組和針刺組注射無菌水5 μL。

1.4 針刺方法 DMV微量注射10 min后，針刺組、針刺+NMDAR拮抗劑組、針刺+GABAR拮抗劑組給予夾脊穴針刺。腧穴定位參照中國針灸學會實驗針灸分會制定的《動物針灸穴位圖譜》和華興邦《大鼠穴位圖譜的研制》，背部夾脊穴：雙側T8～12各椎下正中旁開約3 mm，毫針直刺2 mm后，接SDZ-IV型電子針療儀，電壓9 V，疏密波型，混頻20～100 Hz，刺激30 min。

1.5 觀察指標 針刺結束10 min，脫頸椎處死動物，結扎賁門、幽門及回盲部，取出胃及小腸組織。胃排空率：將胃剪碎，使用去離子水將胃內色素殘留物充分清洗，至洗液體積為4 mL，混勻，10 000 r/min離心5 min，取上清液測620 nm處光密度[7]。胃排空率=(1-胃內殘留色素吸光度÷標準管色素吸光度)×100%。小腸推進率:將小腸平鋪于紙板上，自然拉直，量取幽門括約肌至色素最前端及至回盲部的距離，二者之比×100%為小腸推進率。注：標準管色素吸光度為葡聚糖藍-2000(20 g/L)1 mL稀釋于2 mL蒸餾水后測得620 nm處吸光度值。

2 結果

2.1 針刺夾脊穴對大鼠胃排空率、小腸推進率的影響 與正常組比較，模型組胃排空率、小腸推進率低(P均<0.01)；與模型組比較，針刺組胃排空率、小腸推進率高(P均<0.05)。見表1。

表1針刺夾脊穴對大鼠胃排空率、小腸推進率的影響

2.2 注射GABA受體拮抗劑、NMDA受體拮抗劑對針刺夾脊穴作用的影響 注射GABA受體拮抗劑荷苞牡丹堿(針刺+荷苞牡丹堿組)或法克羅芬(針刺+法克羅芬組)后胃排空率、小腸推進率與針刺組比較差異無統計學意義(P均>0.05)。注射NMDA受體拮抗劑犬尿烯酸(針刺+犬尿烯酸組)后胃排空率、小腸推進率下降，較針刺組低(P均<0.05)。見表2。

表2注射GABA受體拮抗劑、NMDA受體拮抗劑對針刺夾脊穴作用的影響

3 討論

夾脊穴與經絡臟腑存在密切的聯系，處于督脈和膀胱經第一側線之間。膀胱經為十二經脈核心，督脈為陽脈之海，總督一身之陽氣。兩經均循行背部，其經脈在脊柱兩側深部相互貫通，夾脊穴位于經氣外延重迭覆蓋之處，故夾脊穴可以一穴調兩經，具有整合兩經經氣之作用。夾脊穴是華佗對背俞穴的特殊用法，其本身就具體調理臟腑功能的作用。從解剖位置而言，脊柱兩旁的交感干神經節借節間支連接成左右兩條交感干，并通過交通支與脊神經聯系，隨脊神經分布到周圍器官或臟器，支配和調控周圍器官或臟器的功能[8,9]。針刺夾脊穴可刺激脊神經前后支、交感神經干通過的脊神經，在相應脊髓節段內，實現經內臟感覺纖維與內臟運動纖維的聯系。故夾脊穴深層的椎旁交感神經干、脊神經后支和神經纖維末梢被認為是其針灸效應的神經生理學基礎[10]。本研究發現，針刺夾脊穴可明顯提高胃腸運動障礙模型大鼠的胃排空率和小腸推進率，說明夾脊穴具有促進胃腸運動功能的作用。本研究中所取的夾脊穴與支配胃腸的內臟神經處于同一脊神經階段，針刺刺激可以通過激活相應的脊神經產生神經沖動至中樞神經系統調控胃腸運動。

支配胃的副交感節前神經元主要位于DMV，公認其在調節胃腸功能活動中發揮樞紐作用。DMV與中樞和外周神經存在廣泛的纖維聯系，是集內臟感覺傳入和傳出于一體的內臟副交感節前中樞。DMV既可接受來自胃腸道的感覺信息，又可接受來自高級中樞的信息，并發出沖動通過副交感運動神經下傳支配胃腸道的運動[11]。既往研究證實，DVC是針刺調整胃運動和分泌的重要中樞部位[12]。DMV通過其副交感節前運動神經元經迷走神經傳出釋放乙酰膽堿到節后神經元支配胃腸道運動，其節后神經元部分為膽堿能興奮性神經元，部分是為非腎上腺素能非膽堿能抑制性神經元，因此迷走神經對胃運動具有興奮和抑制兩種效應[13]。其中膽堿能纖維是興奮性纖維，末梢釋放乙酰膽堿，通過M受體促進胃運動功能；而抑制性纖維是非膽堿能非腎上腺素能纖維，末梢釋放肽類遞質，引起胃底部的容受性舒張。因此迷走神經對胃運動具有興奮和抑制兩種效應。因此DMV對胃腸運動的調節效應，取決于突觸后GABA受體、NMDA和非NMDA型谷氨酸受體活化。本研究采用GABA受體拮抗劑荷苞牡丹堿、法克羅芬及NMDA受體拮抗劑犬尿烯酸微量注射，觀察二者對夾脊穴促進胃腸運動的作用，結果表明使用荷苞牡丹堿和法克羅芬特異性抑制DMV中GABA受體活化，對夾脊穴促進胃腸運動無明顯影響；而微量注射犬尿烯酸后，夾脊穴促進胃腸運動的作用被明顯抑制，證實夾脊穴調控胃腸功能的作用是通過DMV中NMDA受體來介導的。

綜上所述，針刺夾脊穴對胃腸運動障礙模型大鼠的胃腸運動功能具有促進作用，這種促進作用與DMV中的NMDA受體關系密切，而DMV中的GABA受體對該作用無明顯影響。這為認識夾脊穴調節胃腸功能的中樞機制提供了新的思路。