PIVKA-Ⅱ、AFP和AST/ALT比值聯合檢測在HBV感染原發性肝癌中的診斷價值

楊利擁，王 強，盧小嵐，張 霞，王東生△

(1.重慶市第九人民醫院檢驗科， 重慶 400700；2.川北醫學院醫學檢驗系/附屬醫院檢驗科/轉化醫學研究中心，四川南充 637000)

在我國，肝癌位于常見癌癥中的第4位和常見癌癥死亡原因中的第3位[1]。據估計，全世界每年肝癌新發病例中，有50%發生在我國[2]，而乙型肝炎病毒(HBV)感染是導致肝癌發生最常見的原因[3]。我國對于肝癌的診斷與治療指南推薦超聲和血清甲胎蛋白(AFP)水平作為高危人群的監測方法。然而，在臨床使用過程中，AFP診斷原發性肝癌的靈敏度僅為40%～60%，早期原發性肝癌的靈敏度僅為10%～20%，存在靈敏度較低的缺點，易造成疾病的漏檢[4-5]。谷草轉氨酶(AST)和谷丙轉氨酶(ALT)是評價肝細胞功能的2個重要的酶，其比值的高低可用于評價肝臟的損傷程度。異常凝血酶原(PIVKA-Ⅱ)是一種在肝細胞合成過程中缺乏維生素K而導致合成缺陷的凝血酶原，無凝血功能。肝細胞癌時，由于癌細胞對凝血酶原前體的合成發生異常，凝血酶原前體羧化不足，生成大量的PIVKA-Ⅱ[6]。作為新近發現的診斷原發性肝癌的腫瘤標志物，PIVKA-Ⅱ可能作為一種自體生長因子參與肝細胞癌的進展，PIVKA-II血清水平與肝癌的大小、相關的微血管浸潤、肝移植和/或肝癌結節切除后轉移和復發密切相關。相對于AFP來說，在診斷原發性肝癌的靈敏度方面，PIVKA-Ⅱ具有較強的優勢[7-8]。因此，為進一步明確PIVKA-Ⅱ，以及聯合AFP和AST/ALT比值檢測在原發性肝癌中的診斷價值，筆者進行了以下研究。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取川北醫學院附屬醫院2016年11月至2017年8月經病理檢查確診為原發性肝癌的初診患者68例，其中男57例、女11例，年齡(51±9)歲；對照人群資料：膽囊疾病患者8例，其中男5例、女3例，年齡(52±11)歲；肝臟良性疾病患者94例，其中男79例、女15例，年齡(43±13)歲；其他器官疾病患者7例，其中男5例、女2例，年齡(47±10)歲。所有原發性肝癌患者及對照組患者均存在持續6個月以上的HBV感染。收集上述人群血清標本，凍存于-80 ℃冰箱備用。

1.2檢測方法 取出凍存標本，置于37 ℃孵箱內復溶后，3 800 r/min離心5 min。采用化學發光法定量檢測兩組人群血清PIVKA-Ⅱ水平，電化學發光法定量檢測血清AFP水平，速率法檢測血清AST和ALT含量，并計算AST/ALT比值。所有操作嚴格按照儀器和試劑說明書進行。Abbott Architect i1000全自動免疫分析儀以及配套的PIVKA-Ⅱ試劑盒均為美國雅培產品，Cobas e602電化學發光儀及配套的AFP試劑盒均為德國Roche公司產品，AU5800全自動生化分析儀及配套的AST和ALT試劑盒均為美國貝克曼-庫爾特公司產品。

1.3聯合應用的數據處理 參照文獻所述[9]，受試者工作特征曲線(ROC曲線)確定PIVKA-Ⅱ、AFP和AST/ALT比值對原發性肝癌的診斷臨界值(cut-off)。血清PIVKA-Ⅱ、AFP和AST/ALT比值水平相對其相應的診斷臨界值的倍數采用Mcut-off表示。本研究通過對相應腫瘤標志物的Mcut-off之和的分析來評價腫瘤標志物聯合檢測對HBV感染人群中原發性肝癌的診斷價值。

1.4統計學處理 采用SPSS19.0軟件包完成。經正態性檢驗，兩組人群血清PIVKA-Ⅱ、AFP和AST/ALT比值均呈偏態分布，數據采用中位數(范圍)表示。兩組間數據比較采用Mann-WhitneyU檢驗。P<0.05為差異有統計學意義，P<0.01為差異有明顯統計學意義。ROC曲線確定診斷臨界值、曲線下面積(AUC)、診斷敏感度和特異度。

2 結 果

2.1兩組人群血清PIVKA-Ⅱ、AFP水平和AST/ALT比值水平比較 對兩組人群血清PIVKA-Ⅱ、AFP水平和AST/ALT比值數據進行正態性檢驗，表明所有疾病組數據均呈偏態分布。原發性肝癌組PIVKA-Ⅱ、AFP水平和AST/ALT比值水平，明顯高于HBV感染的其他疾病組，差異有明顯統計學意義(Z=-11.864，-9.499和-4.526，P<0.01)。結果見表1。

2.2PIVKA-Ⅱ、AFP水平和AST/ALT比值單獨檢測對原發性肝癌的診斷價值 單獨應用于診斷原發性肝癌，血清PIVKA-Ⅱ、AFP水平和AST/ALT比值的診斷臨界值分別設定為100.42 mAu/mL、232.35 ng/mL和1.571時，PIVKA-Ⅱ與AFP和AST/ALT比值的AUC之間比較，差異均有統計學意義(P<0.05)，而AFP與AST/ALT比值之間比較，差異無統計學意義(P>0.05)。具體結果見表2、圖1。

表1 兩組人群血清PIVKA-Ⅱ、AFP和AST/ALT比值水平比較[中位數(范圍)]

表2 PIVKA-Ⅱ、AFP和AST/ALT比值對原發性肝癌的診斷價值

注：與AFP比較，aP<0.01；與AST/ALT比值比較，bP<0.01；與AST/ALT比值比較，cP>0.05

表3 PIVKA-Ⅱ、AFP和AST/ALT比值聯合檢測對原發性肝癌的診斷價值

圖1 血清PIVKA-Ⅱ、AFP和AST/ALT比值單獨診斷原發性肝癌的ROC曲線

圖2 血清PIVKA-Ⅱ、AFP和AST/ALT比值聯合診斷原發性肝癌的ROC曲線

2.3PIVKA-Ⅱ、AFP水平和AST/ALT比值聯合檢測對原發性肝癌的診斷價值 PIVKA-Ⅱ、AFP水平和AST/ALT比值聯合檢測診斷原發性肝癌的AUC均較單獨應用有所提高，尤其PIVKA-Ⅱ聯合AST/ALT比值應用的AUC達到0.955，具有很高的靈敏度和一定的特異度。具體結果見表3、圖2。

3 討 論

PIVKA-Ⅱ是一種凝血酶原功能異常的蛋白質。其診斷原發性肝癌的靈敏度為48%～62%，特異度為81%～98%。相對于AFP來說，在肝臟良性疾病方面，PIVKA-Ⅱ具有更高的特異度[10]。基于以上的優點，PIVKA-Ⅱ被日本肝臟病學協會寫入指南，用于評價原發性肝癌的監測和治療效果[11]。

慢性HBV感染是導致發生原發性肝癌的重要因素[12]，通過對本院原發性肝癌的統計分析，HBV感染的原發性肝癌患者占所有原發性肝癌的比例為88.31%，結果證明HBV是引起原發性肝癌的主要原因。因此本研究的原發性肝癌人群以及對照組人群均選擇的是HBV感染超過6個月的人群，了解這部分原發性肝癌人群血清PIVKA-Ⅱ、AFP水平和AST/ALT比值，以及其診斷價值將具有非常重要的臨床意義。本研究通過對PIVKA-Ⅱ、AFP和AST/ALT比值的Mcut-off之和所得的結果進行分析來評價腫瘤標志物聯合檢測對原發性肝癌的診斷價值，主要基于以下兩方面的考慮：(1)對于診斷腫瘤來說，血清腫瘤標志物越高，受檢者罹患腫瘤的風險也就越高；(2)單個腫瘤標志物陽性，可能存在一部分病例漏檢的情況。然而，多個腫瘤標志物同時陽性，即使為低滴度的陽性，也應引起高度重視，從而有效提高檢出率。因此本研究采用Mcut-off之和來評價PIVKA-Ⅱ、AFP和AST/ALT比值聯合診斷原發性肝癌，提高診斷的價值。

WANG等[13]研究發現，血清PIVKA-Ⅱ是早期運用于診斷原發性肝癌及微血管侵犯的腫瘤標志物，PIVKA-Ⅱ的使用可有效提高腫瘤預后評估及指導治療策略。從研究數據分析發現，PIVKA-Ⅱ和AFP單獨應用于診斷HBV感染原發性肝癌時，PIVKA-Ⅱ的AUC明顯高于AFP，表明PIVKA-Ⅱ的診斷價值明顯高于AFP，同時，PIVKA-Ⅱ的靈敏度為89.70%，明顯高于AFP的58.80%，而2種腫瘤標志物診斷原發性肝癌的特異度差異無統計學意義，造成這方面的原因可能與本次研究所選用的HBV感染原發性肝癌全部為首次初診病例有關，這表明PIVKA-Ⅱ在診斷早期HBV感染原發性肝癌方面，明顯優于AFP，這與WANG等[13]和YU等[14]報道一致。同時，研究數據也證明了上述觀點。PIVKA-Ⅱ、AFP和AST/ALT比值單獨應用于診斷原發性肝癌時，PIVKA-Ⅱ的診斷價值明顯高于AFP和AST/ALT比值，尤其在診斷靈敏度方面，這與YU等[14]報道相一致，PIVKA-Ⅱ在診斷早期原發性肝癌方面，優于AFP。對于AFP在HBV感染人群中，診斷原發性肝癌的特異度較低的原因，可能與對照人群選擇密切相關，AFP在肝臟良性疾病中存在升高的現象。本次研究所選用的原發性肝癌全部為首次初診病例，這可能是造成PIVKA-Ⅱ的診斷價值明顯優于AFP的主要原因。PIVKA-Ⅱ聯合AST/ALT比值應用于原發性肝癌的診斷，AUC結果有所提高，達到0.955，而AUC結果越高，表明診斷價值也就越大[15]，另外聯合檢測具有較高的陽性似然比和陰性似然比，這意味著聯合檢測應用于原發性肝癌診斷，在保證較低的誤診率的情況下，能更大程度地提高原發性肝癌的檢出，從而避免漏檢情況的發生。

4 結 論

PIVKA-Ⅱ對原發性肝癌具有較好的診斷價值，尤其是聯合AST/ALT比值檢測時對于提高HBV感染的原發性肝癌的檢出率具有較大幫助。因此，PIVKA-Ⅱ作為一項新近的廣泛運用于臨床的腫瘤標志物，其與AST/ALT比值聯合檢測將能有效提高原發性肝癌的診斷靈敏度，在原發性肝癌的早期診斷方面具有良好的應用前景。