T細(xì)胞亞群在乙肝病毒相關(guān)性肝癌患者中的變化及其臨床意義

廖鈺霖,何淑婭,宋曉玉

(四川省腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科,四川成都 610041)

原發(fā)性肝癌(PLC)是全世界最常見(jiàn)第5位癌癥，慢性乙型肝炎病毒(HBV)是肝硬化和肝細(xì)胞癌的最常見(jiàn)危險(xiǎn)因素，在國(guó)內(nèi)所引起的PLC病例占80%，此外，國(guó)內(nèi)有7%的人群感染了HBV[1-2]。

HBV相關(guān)的PLC(HBV-PLC)被認(rèn)為是一種炎癥性癌癥。在HBV感染的情況下，病毒特異性的T細(xì)胞可能具有保護(hù)效應(yīng)。有研究在HBV感染的黑猩猩以及受HBV感染的患者中敲除HBV特異性CD8+T細(xì)胞可阻滯HBV的清除[3]，HBV的控制與具有多功能性的CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞存在有關(guān)。然而在HBV感染長(zhǎng)期存在的情況下，患者機(jī)體的細(xì)胞免疫功能會(huì)出現(xiàn)耐受，其中T細(xì)胞的功能改變尤為明顯[4]。我國(guó)學(xué)者在HBV-PLC患者中發(fā)現(xiàn)其血清中IL-10呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，而且細(xì)胞毒性T細(xì)胞出現(xiàn)了功能抑制[5]，與非HBV-PLC患者相比，前者血清中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例出現(xiàn)了顯著升高[6]，從而導(dǎo)致患者不良臨床預(yù)后。可以推測(cè)T細(xì)胞亞群對(duì)HBV-PLC患者的進(jìn)展及預(yù)后有著一定的聯(lián)系，但是目前鮮有這方面的詳盡報(bào)道。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究為前瞻性研究，選取2015年5月至2017年6月本院收治的所有原發(fā)性肝癌患者136例，依據(jù)是否存在HBV感染分為HBV-PLC組(78例)和非HBV-PLC組(58例)，其中HBV-PLC組中男性患者42例，女性患者36例，年齡31～68歲平均(52.54±12.26)歲，HBV的感染經(jīng)血清學(xué)及HBV DNA定量檢測(cè)后確診；非HBV-PLC組中男性患者34例，女性患者24例，年齡29～65歲，平均(51.82±13.06)歲，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后發(fā)現(xiàn)，兩組患者在年齡及性別構(gòu)成總體分布上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表明兩組患者基線水平一致，所有PLC患者的診斷均經(jīng)影像學(xué)及病理學(xué)得到確診。本次研究經(jīng)過(guò)了醫(yī)院倫理委員會(huì)審查及患者書(shū)面知情同意。此外，符合以下情況的病例需排除：(1)血清學(xué)證實(shí)合并有其他肝炎病毒感染；(2)合并有細(xì)菌感染；(3)免疫缺陷的患者；(4)服用了影響免疫系統(tǒng)功能的藥物；(5)合并有嚴(yán)重臟器功能不全的患者。

1.2方法 T細(xì)胞亞群及免疫炎性因子檢測(cè)所有患者血清中CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和Treg細(xì)胞百分比采用德國(guó)BD公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀。免疫炎性因子包括IL(白細(xì)胞介素)-10、IL-6、IL-1β和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，其檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者T細(xì)胞亞群及免疫炎癥因子比較 同非HBV-PLC患者相比，HBV-PLC患者T細(xì)胞亞群出現(xiàn)了顯著失調(diào)，見(jiàn)表1。如表2所示，HBV-PLC患者免疫炎癥因子也出現(xiàn)了顯著失調(diào)，其IL-1β和TNF-a表達(dá)水平明顯高于非HBV-PLC患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而IL-10水平明顯低于非HBV-PLC患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 兩組患者T細(xì)胞亞群比較

表2 兩組患者免疫炎癥因子比較

表3 不同臨床預(yù)后的HBV-PLC患者T細(xì)胞亞群比較

2.2不同臨床預(yù)后的HBV-PLC患者T細(xì)胞亞群及免疫炎癥因子比較 對(duì)HBV-PLC患者進(jìn)行出院后隨訪6個(gè)月，記錄患者死亡事件發(fā)生數(shù)，并依據(jù)是否死亡結(jié)局將78例HBV-PLC患者分為死亡組(31例)和存活組(47例)，兩組患者在年齡及性別構(gòu)成比上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表3所示，死亡組患者CD4+T細(xì)胞和Treg細(xì)胞百分比明顯高于存活組(P<0.05)，而CD8+T細(xì)胞百分比明顯低于存活組(P<0.05)。而且死亡組患者促炎因子水平也要明顯高于存活組(P<0.05)，而抗炎因子IL-10也要明顯低于存活組(P<0.05)。見(jiàn)表4。

2.3T細(xì)胞亞群及免疫炎癥因子對(duì)HBV-PLC患者不良臨床結(jié)局的影響大小分析 由以上結(jié)果可知，不同臨床結(jié)局患者T細(xì)胞亞群和免疫炎癥因子存在明顯差別，意味著這些因素可能對(duì)HBV-PLC患者的臨床結(jié)局有不同程度的影響，為了明確這些因素影響大小，筆者將這些指標(biāo)進(jìn)行了二分類多因素的Logistic回歸模型分析，其結(jié)果如下表5所示。由結(jié)果可知，T細(xì)胞亞群(CD4+T和Treg細(xì)胞)均是HBV-PLC患者不良臨床結(jié)局的強(qiáng)風(fēng)險(xiǎn)因素，其OR值分別為3.765和2.238(P<0.05)，而CD8+T細(xì)胞可能是一個(gè)保護(hù)性因子，其OR值為-3.537(P<0.05)，而炎癥因子(IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-a)對(duì)HBV-PLC患者臨床結(jié)局的影響均不如T細(xì)胞亞群。

表4 不同臨床預(yù)后的HBV-PLC患者免疫炎癥因子水平比較

表5 不同HBV-PLC臨床結(jié)局患者危險(xiǎn)因素Logistic回歸分析結(jié)果

3 討 論

在中國(guó)，原發(fā)性肝癌主要是通過(guò)慢性HBV感染-肝硬化發(fā)展而來(lái)的[7]。因而PLC的一個(gè)主要風(fēng)險(xiǎn)因素則是HBV的感染，因而在HBV-PLC和非HBV-PLC患者中的免疫功能狀態(tài)是完全不相同的。在HBV-PLC患者中，存在淋巴細(xì)胞百分比增高表明了存在一個(gè)比較嚴(yán)重的系統(tǒng)性炎性反應(yīng)過(guò)程。T淋巴細(xì)胞對(duì)于免疫反應(yīng)過(guò)程是至關(guān)重要的。T淋巴細(xì)胞包括CD4+輔助性T細(xì)胞(Th細(xì)胞)、CD8+T細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL細(xì)胞)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)等等，Th細(xì)胞在增強(qiáng)和推進(jìn)抗腫瘤免疫反應(yīng)中起到了重要作用，因?yàn)樗軌虼龠M(jìn)B淋巴細(xì)胞中抗體的產(chǎn)生增加和CD8+T細(xì)胞向CTL細(xì)胞分化的增加[8-9]。CTL細(xì)胞能夠識(shí)別腫瘤抗原從而直接清除腫瘤細(xì)胞，因而扮演了腫瘤細(xì)胞“清道夫”的角色而發(fā)揮出了抗腫瘤效應(yīng)[10]。Treg細(xì)胞在抗腫瘤免疫反應(yīng)應(yīng)答中主要扮演著負(fù)性調(diào)控因子的角色，其表達(dá)升高會(huì)使得PLC患者臨床結(jié)局惡化，意味著此時(shí)的Treg細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用明顯減退。T細(xì)胞亞群數(shù)量的失調(diào)出現(xiàn)在許多類型的癌癥中，包括非小細(xì)胞肺癌、頭頸部癌和卵巢癌中[11-13]。類似的，本研究也顯示出了HBV-PLC患者中出現(xiàn)了T細(xì)胞亞群(CD4+T、CD8+T和Treg細(xì)胞)的數(shù)量與非HBV-PLC患者相比明顯不同，這表明了T細(xì)胞功能的紊亂和抑制，這就可能與HBV-PLC患者不良免疫反應(yīng)有重要關(guān)系。同樣，2014年的研究顯示在HBV-PLC患者中出現(xiàn)了Treg細(xì)胞水平的顯著上調(diào)，并且與患者HBV DNA的病毒載荷量呈正相關(guān)[6]。這些結(jié)果表明了Treg細(xì)胞水平與PLC患者的不良預(yù)后也具有正相關(guān)性，正如本研究所示，死亡組患者Treg細(xì)胞水平要明顯高于存活組，意味著降低Treg細(xì)胞水平可能改善患者臨床結(jié)局。

免疫系統(tǒng)中的自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)能分泌細(xì)胞因子(如TNF-α、IL-10)和趨化因子來(lái)影響宿主免疫反應(yīng)，還可以通過(guò)穿孔素/顆粒酶或受體相關(guān)的信號(hào)通路(如Fas、腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)性配體)殺滅受病毒感染的細(xì)胞[14-15]，B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞主要分別參與抗體的產(chǎn)生和細(xì)胞調(diào)控的免疫反應(yīng)。有研究發(fā)現(xiàn)在HBV-PLC患者中所出現(xiàn)的淋巴細(xì)胞(包括NK細(xì)胞、T和B淋巴細(xì)胞)水平的降低反映出了HBV-PLC患者中抗腫瘤和抗病毒免疫反應(yīng)的受損情況的發(fā)生[16]，而且在HBV-PLC的病理發(fā)生過(guò)程中，研究發(fā)現(xiàn)胸腺輸出功能也出現(xiàn)了受損，這些結(jié)果表明了HBV-PLC患者中T細(xì)胞的減少可能至少部分促進(jìn)了早期胸腺產(chǎn)生的抑制[16]，從而免疫功能出現(xiàn)了抑制。LIU等[16]的研究表明CD4+T和CD8+T在HBV-PLC患者中呈現(xiàn)高度活化狀態(tài)，這種過(guò)度激活可引起T淋巴細(xì)胞的死亡，這將消耗掉大量的T淋巴細(xì)胞并因此減低了HBV-PLC患者中的CD4+T和CD8+T水平，因此在HBV-PLC患者中T細(xì)胞的減少可能也是部分由于T淋巴細(xì)胞的過(guò)度活化所致。本研究結(jié)果也表明了HBV-PLC患者和其中的死亡患者中CD8+T數(shù)量要更低，而CD4+T升高的原因可能是CD8+T顯著下降所引起的相對(duì)升高所致。

由于HBV-PLC是一種免疫炎性疾病，患者體內(nèi)的TNF-α能夠使白細(xì)胞活性增加，分泌IL-1β的量也隨之增加，IL-1β反過(guò)來(lái)又可刺激免疫細(xì)胞分泌TNF-α，使之持續(xù)性增加，因而在本研究中筆者發(fā)現(xiàn)HBV-PLC患者中的TNF-α和IL-1β水平要明顯高于非HBV-PLC患者。IL-10能夠調(diào)控免疫反應(yīng)進(jìn)程，其降低意味著免疫反應(yīng)受到抑制，對(duì)于患者機(jī)體來(lái)說(shuō)則是非常不利的，其過(guò)表達(dá)可抑制促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β的過(guò)度釋放，因而本研究中HBV-PLC患者和死亡患者中IL-10要明顯低于對(duì)照患者。CD4+T在抗炎因子IL-10的作用可以分化成Treg細(xì)胞，而CD8+T則在促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α的作用下可分化為CTL，因而CD4+T的增加和CD8+T的減少意味著HBV-PLC患者的免疫反應(yīng)應(yīng)答減退，患者預(yù)后較差。這些結(jié)果似乎表明了T細(xì)胞亞群和免疫炎性因子可能對(duì)HBV-PLC患者的臨床結(jié)局都有著重要影響，但是筆者通過(guò)進(jìn)一步Logistic回歸模型分析顯示，T細(xì)胞亞群(CD4+T和Treg細(xì)胞)均是HBV-PLC患者不良臨床結(jié)局的強(qiáng)風(fēng)險(xiǎn)因素，而CD8+T細(xì)胞可能是一個(gè)保護(hù)性因子，其降低意味著患者不良結(jié)局風(fēng)險(xiǎn)較大，而炎性因子(IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α)對(duì)HBV-PLC患者臨床結(jié)局的影響均不如T細(xì)胞亞群，這表明了T細(xì)胞亞群在HBV-PLC患者臨床結(jié)局中起到了主導(dǎo)作用。

4 結(jié) 論

本研究對(duì)PLC是否存在HBV感染的情況進(jìn)行了T細(xì)胞亞群變化檢測(cè)，并探討了這些亞群變化與患者臨床結(jié)局的關(guān)系，結(jié)果表明HBV-PLC患者中存在顯著的T細(xì)胞免疫功能失調(diào)，T細(xì)胞亞群可能成為HBV-PLC患者臨床不良結(jié)局的預(yù)測(cè)因子。