慢性HIV感染者外周血T細胞CD28、CD160表達水平的研究*

肖江峰,陳永宏,黃 倩,鄒燕瓊,鄧建寧

(1.重慶三峽中心醫院御安分院感染科,重慶，404000；2.重慶三峽醫藥高等專科學校附屬醫院康復科，重慶，404000；3.廣西省南寧市第四人民醫院艾滋病外科，廣西南寧 530023)

人類免疫缺陷病毒(HIV)，即艾滋病(獲得性免疫缺陷綜合征)病毒，是造成人類免疫系統缺陷的一種病毒[1-2]。自1981年發現以來，關于HIV的研究不斷增加，已知免疫缺陷是HIV入侵人體后造成的最大的威脅，HIV感染患者存在不同程度的免疫紊亂。研究發現HIV感染的T細胞上抑制性共刺激分子表達有所升高，而T細胞功能存在不同程度的降低[3-4]，這可能與HIV引起的免疫缺陷有關[5]。CD160是常見的抑制性共刺激分子，主要表達于T細胞、天然殺傷性T細胞和天然殺傷細胞。CD160是HVEM的配體，并考慮與抗PD-1抗體一起提供具有抗HIV的免疫檢查點抑制劑。CD160也被認為是人類HIV病毒作用的重要調控靶點。與CD160不同，T細胞上CD28的表達主要在體內發揮免疫作用[6]。CD28分子不僅可以促進T淋巴細胞增殖，還可誘導多種免疫應答相關細胞因子分泌。研究發現，CD28及CD160作為共刺激分子中的重要成員，在互相制約及調節T細胞功能中具有重要的作用[6]。因此，筆者對100例受試者進行研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年12月至2016年12月收治的50例HIV患者，作為觀察組，并征集50例本院體檢的健康志愿者，作為對照組。以上觀察組患者均確診為慢性HIV感染者，并且各組性別、年齡等差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。本研究經倫理委員會批準，患者以及家屬知情并同意本研究。

1.2納入以及排除標準

1.2.1納入標準 患者年齡在20～60歲之間；均未經抗病毒治療，均無機會性感染或腫瘤，排除丙肝、乙肝等嗜肝病毒感染，無失代償期肝病，無自身免疫性、遺傳代謝性肝病；符合第八版內科學中HIV感染的診斷標準[7]。

1.2.2排除標準 本身有嚴重呼吸或者循環系統疾病(如先天性心力衰竭及肺功能障礙)；藥品濫用或依賴者；對本研究所用藥物過敏者；各種原因引起的急性呼吸道感染者。

1.3方法 所有患者入院后抽取抗凝全血10 mL，離心分離血漿放置于-80 ℃低溫冰箱待測。采用FACS流式細胞儀(購自美國BD公司)，進行外周血白細胞計數和T淋巴細胞亞群分類，包括CD4+、CD8+及CD28等，并計算百分比。采用RT-PCR熒光探針法進行外周血HIV病毒載量測定(試劑盒購自上海嵐派生物技術有限公司)。取新鮮外周血，分離單個核細胞，分別加入CD160-APC抗體，室溫避光孵育20 min，加1 mL的PBS(轉速1 500 r/min、離心半徑12.5 cm)離心5 min，棄上清，然后加入10 g/L多聚甲醛固定后上流式細胞儀檢測，Flowjo軟件分析檢測結果。觀察并記錄所有研究參與者一般資料(包括性別、年齡、外周血CD4+T計數、CD4+/CD8+等)、CD4+、CD8+T細胞上CD160及CD28的表達及初始T細胞(TN)、中央記憶T細胞(TCM)、效應記憶T細胞(TEM)、終末效應記憶T細胞(TEMRA)亞群上CD160表達的百分比及平均熒光強度(MFI)、2種細胞里病毒載量，并分析CD28及CD160的表達水平與患者CD4+和CD8+T細胞計數和病毒載量的相關性。

2 結 果

2.1兩組患者基本資料比較 兩組患者性別、年齡等一般資料無明顯差異(P>0.05)，觀察組患者外周血CD4+、CD4+/CD8+明顯低于對照組(P<0.05)，具有統計學意義。詳見表1。

2.2CD160的表達情況比較 隨著CD4+T細胞上CD160的表達增加，CD4+T細胞呈下降趨勢，兩者呈負相關(r=-0.561，P<0.05)；隨著CD8+T細胞上CD160的表達增加，CD8+T細胞數量呈上升趨勢，兩者呈正相關(r=0.619，P<0.05)；而HIV-RNA拷貝數量隨著CD4+、CD8+T細胞上CD160表達的增加而增加，兩者呈正相關(r=0.684，P<0.05、r=0.459，P<0.05)，差異有統計學意義。見圖1。

表1 兩組患者基本資料比較

圖1 兩組患者CD4+和CD8+T細胞上CD160的表達與CD4+和CD8+T細胞計數以及外周血HIV RNA載量的相關性比較

2.3CD28的表達情況比較 隨著CD4+/CD8+T細胞上CD28的表達增加，CD4+/CD8+T細胞計數呈上升趨勢，兩者呈正相關(r=0.621，P<0.05、r=0.527，P<0.05)，而HIV-RNA拷貝數量隨著CD4+、CD8+T細胞上CD28表達的增加而降低，兩者呈負相關(r=-0.634，P<0.05、r=-0.582，P<0.05)，具有統計學意義。詳見圖2。

圖2 兩組患者CD28的表達與CD4+和CD8+T細胞計數以及HIV RNA載量的相關性比較

2.4兩組患者各亞群CD8+T細胞CD160表達情況 兩組患者CD8+T細胞CD160在TEMRA亞群表達陽性率及MFI差異無統計學意義(P>0.05)，觀察組患者CD8+T細胞CD160在TN、TCM、TEM亞群表達陽性率及MFI均明顯高于對照組(P<0.05)，差異有統計學意義。詳見表2。

表2 各組患者各亞群CD8+T細胞CD160表達比較

3 討 論

艾滋病是一種危害性極大的傳染病，由感染HIV引起。HIV是一種能攻擊人體免疫系統的病毒[8]。它把人體免疫系統中最重要的CD4+T淋巴細胞作為主要攻擊目標，大量破壞該細胞，使人體喪失免疫功能。隨著病程進展艾滋病患者可合并各種機會性感染及惡性腫瘤，病死率較高。艾滋病危害較大，不僅嚴重影響患者生活質量，而且具有較高的傳染性。艾滋病目前尚未有理想的根治方案，并且HIV導致機體免疫缺陷的途徑尚未研究清楚。為此，探究HIV引起免疫缺陷的作用方式顯得尤為重要。研究發現，HIV感染者細胞免疫及體液免疫均受到明顯影響，但以T細胞免疫受損為主[9]。CD4+、CD8+是T細胞中最主要的免疫細胞，正常情況下，CD4+細胞在整個T淋巴細胞中占65%，CD8+占35%，其比值為1.75～2.10之間。慢性HIV感染者由于免疫系統受到損傷，表現為CD4+數量減少，CD8+數量相對增多，出現比例失調。表明免疫力已經損傷到非常嚴重程度。研究發現，HIV感染者正負性共刺激分子表達受到影響，可能與CD4+、CD8+功能紊亂有關[10]。CD28及CD160分別作為共刺激分子中的正性和負性共刺激分子，在調節T細胞功能中具有重要的作用。HIV感染患者病毒難以清除的重要原因就是正負性共刺激分子的表達紊亂，而CD160的增殖可以抑制HIV患者CD4+T細胞的增殖以及細胞因子的分泌。鄭海清等[11]和DUVERGER等[12]在對HIV患者T細胞進行基因檢測后發現CD28在基因水平上就存在表達降低的現象。

本研究中，兩組患者性別、年齡等一般資料差異無統計學意義(P>0.05)，觀察組患者外周血CD4+/CD8+明顯低于對照組(P<0.05)，差異有統計學意義。隨著CD4+T細胞上CD160的表達增加，CD4+T細胞呈下降趨勢，兩者呈負相關(r=-0.561，P<0.05)，而HIV-RNA拷貝數量隨著CD4+T細胞上CD160表達的增加而增加，兩者呈正相關(r=0.684，P<0.05)；隨著CD8+T細胞上CD160的表達增加，CD8+T細胞數量呈上升趨勢，兩者呈正相關(r=0.619，P<0.05)，HIV-RNA拷貝數量隨著CD8+T細胞上CD160數量的增加而增加，兩者呈正相關(r=0.459，P<0.05)。此結果表明，HIV對CD4+、CD8+T細胞上CD160表達的影響不同，隨著HIV-RNA拷貝數量增加，CD160表達增加，而此時CD4+T細胞計數有所下降，導致CD4+/CD8+T比值失調。考慮抑制性共刺激分子CD160過度表達引起CD4+T細胞的功能紊亂。肖晗等[13]也在研究中發現，CD160的過度表達對HIV感染者免疫功能有一定的抑制作用。隨著CD4+T細胞上CD28的表達增加，CD4+T細胞計數呈上升趨勢，兩者呈正相關(r=0.621，P<0.05)，而HIV RNA拷貝數量隨著CD4+T細胞上CD28表達的增加而降低，兩者呈負相關(r=-0.634，P<0.05)；隨著CD8+T細胞上CD28的表達增加，CD8+T細胞數量呈上升趨勢，兩者呈正相關(r=0.527，P<0.05)，HIV-RNA拷貝數量隨著CD8+T細胞上CD28數量的增加而增加,兩者呈正相關(r=-0.582，P<0.05)。此結果表明，與CD160不同，CD28在HIV感染患者體內可以發揮一定的免疫作用，其與HIV-RNA拷貝數呈負相關，而與CD4+、CD8+T細胞計數呈正相關。王利偉等[14]也在研究中發現，CD28與HIV患者免疫功能有關，隨著HIV的進一步感染，CD28逐漸受到破壞。兩組患者CD8+T細胞CD160在TEMRA亞群表達陽性率及MFI差異無統計學意義(P>0.05)，觀察組患者CD8+T細胞CD160在TN、TCM、TEM亞群表達陽性率及MFI均明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。此結果表明，CD160升高對記性性T細胞和初始T細胞可能都有影響，但其主要通過影響記憶性T細胞表達發揮作用。王陸軍等[15]也在研究中得出相似的結論。

4 結 論

慢性HIV感染患者中CD28表達有所減少，而CD160表達有所增加，可能與HIV患者CD4+、CD8+T細胞減少有關，其中CD160主要影響記憶性CD8+T細胞。