草果不同炮制品特征圖譜比較研究

，,，*，

(1.康美(北京)藥物研究院有限公司，北京 102600；2.康美藥業股份有限公司，廣東 普寧 515300)

草果為姜科植物草果(Amomumtsao-koCrevostet Lemaire) 的干燥成熟果實，秋季果實成熟時采收，除去雜質，曬干或低溫干燥。其味辛，溫，歸脾、胃經，具有燥濕溫中、截瘧除痰的功效，可用于寒濕內阻、脘腹脹痛、痞滿嘔吐、瘧疾寒熱、瘟疫發熱的治療[1]。現代藥理學研究表明，草果具有抗氧化[2]、抗菌[3]、抗腫瘤[4-5]、調節胃腸功能[6]、抗誘變、防霉等作用。

目前有關草果的質量評價研究多集中于對桉油精等單一成分及總揮發油的定量測定上，建立草果揮發油類成分的特征圖譜，可作為其質量全面評價研究的基礎，同時對不同炮制品進行比較研究。

1 儀器與試藥

7890B型氣相色譜儀、7697A型氫火焰離子檢測器(安捷倫科技有限公司)；毛細管色譜柱(DB-17，30 m×0.25 mm×0.25 μm、安捷倫科技有限公司)；XPE205型電子分析天平(梅特勒-托利多)；KQ-500DE型(昆山市超聲儀器有限公司)。

乙酸乙酯(分析純、20180310、北京化工廠)；桉油精對照品(110788-201606、98.4%、中國食品藥品檢定研究院)。收集主產地云南草果29批、廣西草果8批和亳州市場3批草果，用于草果藥材特征圖譜研究。

草果仁：取凈草果，按照清炒法(《中國藥典》2015年版四部通則0213)炒至焦黃色并微鼓起，去殼，取仁。姜草果仁：取凈草果仁，按照姜汁炙法(《中國藥典》2015年版四部通則0213)炒干。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適應性[7]

火焰離子檢測器；毛細管色譜柱(DB-17，柱長30 m，內徑25 mm，交聯50%二苯基甲基硅氧烷為固定相，涂膜厚度0.25 μm)；進樣口溫度250 ℃；檢測器溫度300 ℃；分流比5∶1。程序升溫如表1所示。

2.2 對照品溶液制備

取桉油精對照品適量，精密稱定，加乙酸乙酯制成每1 mL含0.1 mg桉油精的溶液，即得。

2.3 供試品溶液制備

取本品粉末(過三號篩)約0.5 g，精密稱定，精密加入乙酸乙酯25 mL，稱定重量，超聲處理(功率600 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用乙酸乙酯補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

表1 程序升溫步驟

2.4 方法學驗證

按照《中國藥典》2005年版一部中藥質量標準分析方法驗證指導原則的要求，對上述方法進行方法學驗證。穩定性實驗表明樣品在24 h內穩定性良好；精密度和重現性試驗測得各共有峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD小于5.0%，說明該方法重復性良好。

2.5 特征圖譜分析結果和相似度分析

2.5.1 草果特征圖譜 分別精密吸取對照提取物溶液與供試品溶液各1 μL，注入氣相色譜儀測定，記錄色譜圖，即得。39批草果樣品的供試品溶液按上述確定條件進樣，記錄色譜圖。利用中藥指紋圖譜相似度評價系統軟件，采用自動匹配法生成共有模式對照特征圖譜，見圖1、圖2。

數據表明，5個特征峰的相對保留時間分別為0.885(峰1)、1(峰2，S)、1.589(峰3)、1.736(峰4)、1.867(峰5)，相對保留時間RSD均小于3%，說明不同產地和不同批次的樣品有較多相同的成分；相對峰面積差異較大，RSD介于50.5%～73.2%之間，說明不同生長地區、不同環境與不同批次的樣品含量差異較大。

圖1 草果藥材對照特征圖譜(S.桉油精)

圖2 39批草果藥材特征圖譜

2.5.2 草果仁特征圖譜 草果仁33批樣品的供試品溶液按上述確定條件進樣，記錄色譜圖。利用中藥指紋圖譜相似度評價系統軟件，采用自動匹配法生成共有模式對照特征圖譜，見圖3、圖4。

圖3 草果仁對照特征圖譜(S.桉油精)

圖4 33批草果仁特征圖譜

數據表明，5個特征峰的相對保留時間分別為0.787(峰1)、1.000(S峰)、1.130(峰3)、1.200(峰4)、1.854(峰5)，相對保留時間RSD均小于1%，說明不同產地和不同批次的樣品有較多相同的成分；相對峰面積差異較大，RSD介于42.7%～62.1%之間，說明不同產地和不同批次的樣品含量差異較大，可能與原料質量和炮制工藝有關。

2.5.3 姜草果仁特征圖譜 姜草果仁15批樣品的供試品溶液按上述確定條件進樣，記錄色譜圖。利用中藥指紋圖譜相似度評價系統軟件，采用自動匹配法生成共有模式對照特征圖譜，見圖5、圖6。

由實驗數據分析可知，5個特征峰中僅1.000(S峰)均有檢出，其他4個特征峰相對保留時間分別為0.787(峰1)、1.130(峰3)、1.200(峰4)、1.854(峰5)部分樣品未檢出。

2.5.4 草果藥材、草果仁和姜草果仁特征圖譜之間的相關性 對草果藥材共有特征圖譜S1、草果仁共有特征圖譜S2和姜草果仁的共有特征圖譜S3進行對比，驗證其是否有相關性，結果見圖7、圖8。

結果表明，草果和草果仁特征圖譜相似度為0.849，相似度高，說明有較多相同的成分，其成分含量比例較為一致；姜草果仁與草果藥材、草果仁有很大差異。

圖5 姜草果仁對照特征圖譜(S.桉油精)

圖6 15批姜草果仁特征圖譜

圖7 草果和草果仁特征圖譜比較

圖8 草果、草果仁和姜草果仁對比

3 討論

按照《香港中藥材標準》草果指紋圖譜的測定方法，對供試品工藝的提取方法(水蒸氣蒸餾法、超聲提取法)，提取溶劑(正己烷、乙酸乙酯)、溶劑用量(10mL、25mL、50mL)進行考察，選定的方法峰形和分離度均良好，理論塔板數按桉油精峰計算不低于5000。

通過對草果不同炮制品的特征圖譜研究，得到草果藥材對照特征圖譜，該圖譜可代表其特性成分，作為草果藥材的鑒別依據。

草果的臨床應用在歷代本草中多記載為去皮殼，藥典規定以草果仁入藥，研究結果表明草果藥材與草果仁有較多的相同成分，草果去殼是否會浪費藥材資源有待進一步商榷。

姜汁炙草果仁見于清代，沿用至今，草果仁姜炙后化學成分變化較大，炮制加熱過程造成揮發性成分散失，揮發性成分的降低會不會造成其臨床療效降低，以及姜炙草果仁的炮制作用機理有待進一步研究。