蒙藥成分體內分析研究進展

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(內蒙古醫科大學，內蒙古 呼和浩特 010110)

體內藥物分析是由藥物分析學派生出來的一門新興學科，主要研究生物機體內藥物及其代謝產物和內源性物質的質與量的變化規律[1,2]；而蒙藥成分體內分析系以體內藥物分析為基礎，綜合應用生物學、化學、蒙醫藥學的理論、方法和技術，研究并闡明蒙藥有效成分的體內過程，特別是其體內的代謝方式和代謝產物，分析探討蒙藥藥效物質基礎，保證臨床用藥的安全、有效、可控。因此，本研究將從蒙藥成分體內分析的研究意義、研究方法及現代研究進展等三個方面進行闡述。

1 蒙藥成分體內分析的研究意義

1.1 有助于闡明蒙藥體內物質基礎及其作用機制

眾所周知，蒙藥的藥效作用是蒙藥成分與機體相互作用的結果，眾多成分只有被吸收入血后才能產生藥效，根據這一觀點，給藥后血液中所含有的成分才是蒙藥體內直接作用物質，因此蒙藥有效物質基礎及其作用機制的研究需要基于血清藥物化學與血清藥理學[3，4]。血清藥物化學與血清藥理學為蒙藥成分體內分析研究提供了有效手段，如采用蒙藥成分體內分析研究，可揭示給藥后血清中的移行成分，并通過建立蒙藥血清化學動態圖譜來反映蒙藥成分群在體內的動態變化，可有助于蒙藥血清藥物化學研究蒙藥中具有生物活性的物質基礎[5]。對含藥血清進行藥效觀察，目前可采用器官培養、細胞培養和基因表達等方法，以探究蒙藥可能的作用機制[6]。

1.2 新藥發現、設計及研發的新途徑

蒙藥在體內的運行過程包括吸收、分布、代謝、排泄，并在此過程中可能產生毒性。在蒙藥成分體內分析過程中，人或動物肝臟及消化道含有各種藥物代謝酶，這些酶對口服吸收的蒙藥成分進行生物轉化，有些成分會導致新藥結構失效，有些成分會產生毒性。另外通過蒙藥成分體內分析研究，若發現不良的藥代動力學參數也可導致新藥研發失敗。綜上所述，新藥的合理設計與開發，應該充分考慮蒙藥體內分析過程中的代謝途徑及相關代謝特征[7]。

1.3 藥物評價的重要內容

要確保蒙藥臨床應用安全、合理、有效，首先要保證蒙藥的質量，且要對蒙藥進行全面的質量控制。通過蒙藥成分體內分析，加強蒙藥成分的藥代動力學研究、安全性評價及生物利用度研究，以了解蒙藥成分結構、理化性質、劑型及生產工藝與蒙藥療效、血藥濃度、藥理作用、體內生物轉化等的關系，這些研究已成為評價藥品質量的重要內容[8]。

2 蒙藥成分體內分析的研究方法

2.1 體內樣品的采集與前處理

目前蒙藥成分體內分析所要采集的樣品一般為血液和尿液，除此以外，還可能采集唾液、乳汁、腦脊液等。有時，可能會測定體內任意組織或器官中藥物濃度。如今，一般的做法是在給藥一定時間后處死動物，通過制備組織勻漿等方法進行測定。近年來，出現了運用微透析技術采集樣品，該技術可應用于任何組織和器官，對組織無明顯的傷害，且可在活體、自由活動的狀態下采集樣品，可以在非麻醉狀態下研究動物體內各種微環境的變化[9]。體內樣品的前處理涉及到很多方面，包括除蛋白、樣品的分離純化、藥物的游離富集等。常用的技術方法有蛋白質沉淀法、有機消解法、液-液萃取法、固相萃取法、自動化SPE技術、固相微萃取技術、微透析技術等。其中，在諸多體內分析研究工作中，血漿或其他組織樣品用得最多的前處理法就是除蛋白法及固相萃取法，本研究不再對其他方法進行過多論述[10]。

2.2 蒙藥成分體內分析技術

蒙藥成分體內分析是要測定復雜生物樣品中的藥物成分，通常含量均較低。因此，需要選擇高靈敏度、高選擇性的分析方法[11]。色譜技術一直是蒙藥成分體內分析技術中的強有力手段。目前，最新研究進展主要集中在柱切換技術、手性色譜技術、高效毛細管電泳、高效液相色譜和色譜聯用技術等。其中在蒙藥成分體內分析技術中，最為常用的是高效液相色譜和色譜聯用技術。

2.3 蒙藥成分體內分析方法的建立和評價

2.3.1蒙藥成分體內分析方法的建立 蒙藥成分體內分析方法的建立，首先要確定測定目的，結合藥物成分的結構、理化特征和體內存在狀態，參考相關文獻，擬定方法，然后進行一系列實驗，以選擇最合適的實驗條件，驗證分析方法是否適應實際樣品的測定。篩選分析方法主要包括檢測條件和分離條件的篩選。確定檢測條件和分離條件后，蒙藥成分體內分析的一般步驟為以純品進行測定、以處理過的空白樣品進行測定、回收率測定、體內實際樣品的測定等。

2.3.2蒙藥成分體內分析方法的評價 建立蒙藥成分體內分析方法后，為了驗證方法的可行性和可靠性，需要使用技術指標進行方法驗證。這些技術指標包括：標準曲線與線性范圍、準確度、精密度、靈敏度、穩定性等。標準曲線是指生物樣品中所測定成分的濃度與響應值的相關性，用回歸方程來評價。在蒙藥成分體內分析過程中，標準曲線與線性范圍應能覆蓋全部待測樣品中蒙藥成分的濃度。準確度系指用該方法測得的生物樣品中待測成分的濃度與其真實濃度的接近程度，分為絕對回收率和方法回收率。精密度系每次測定結果與多次測定的平均值的偏離程度，表示該方法的重復性。精密度可用重復性、中間精密度、重現性來表示。靈敏度是指一種分析方法可以檢測出的有關化合物的最小量，常用檢測限、定量限、最低檢測濃度來表示。在蒙藥成分分析中所需要測定的樣品例數居多，通常需要幾個工作日進行分析。因此生物樣品和前處理后的溶液穩定性就尤為重要，具體方法中有室溫和冷凍穩定性考察。

3 蒙藥成分體內分析研究進展

董玉、薩礎拉等[12]制備類風濕性關節炎動物模型，灌胃蒙藥復方森登-4及其各單味藥有效組分，分離制備含藥血清，建立蒙藥復方森登-4體外及含藥血清HPLC特征圖譜，分析蒙藥復方森登-4、各單味藥體外及其大鼠含藥血清特征圖譜，比對、歸屬并鑒定出了蒙藥復方森登-4體外化學成分及口服蒙藥復方森登-4后的大鼠吸收入血成分，共發現了47個峰。包明蘭、巴根那等[13]通過血清藥物化學方法，追蹤觀察單味藥、藥對及全方中入血指標性化學成分梔子苷在急性肝損傷大鼠體內的動態變化，揭示梔子單味藥在地格達-4味湯中的作用和地位，并初步探討地格達-4味湯保肝效應的有效成分。結果表明梔子與肋柱花藥對相應時間點血中梔子苷含量均高于單味梔子和全方，且地格達-4味湯全方相應時間點血中梔子苷含量均低于單味梔子及藥對。巴根那等[14]以地格達-4味湯水提物為示例藥物，以D-GlaN致急性肝損傷大鼠為研究對象，應用液質聯用儀和核磁共振儀對急性肝損傷大鼠灌胃給藥地格達-4味湯后的血清中移行成分進行LC-MSDTrap分析，結果表明灌胃給藥地格達-4味湯后，在以D-GlaN致急性肝損傷大鼠血清中共檢測到9個移行成分，其中4個移行成分為地格達-4味湯原型成分，即4-O-β-glucopyranosylacetophenone、草夾竹桃苷、獐牙菜苦苷、Sweroside，5個移行成分為代謝產物。雷露靜、王煥云等[15]基于血清藥物化學理念，建立了三子散含藥血清指紋圖譜，分析血中移行成分，為三子散藥效物質基礎的研究及質量控制提供了科學依據，結果建立三子散含藥血清指紋圖譜，指認20個共有峰并確認了其中5個成分。肖云峰、王玉華等[16]對牦牛心臟配伍和家豬心臟配伍八味沉香散的丁香酚藥代動力學進行比較研究，結果表明，在兩種不同動物心臟配伍的八味沉香散中丁香酚代謝情況不相同，配伍牦牛心臟組方的代謝較好，其最大峰質量濃度更高、體內轉運速率更快、吸收進入血液循環的總量更多。歐陽輝、楊世林等[17]研究蒙藥藍盆花在大鼠體內的主要藥效成分及其代謝產物，建立了大鼠灌胃藍盆花提取物后尿液、糞便和血漿中藍盆花活性物質及其代謝物的鑒定方法，共鑒定出28個效應成分和31個代謝產物，表明藍盆花黃酮類化合物代謝，主要途徑為氧化、硫酸化、甲基化、葡萄糖醛酸化等。