抗過(guò)敏類(lèi)健康產(chǎn)品中非法添加氯苯那敏的快速篩查方法研究

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(東莞市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 東莞 523808)

氯苯那敏又稱撲爾敏，屬于第一代組胺H1受體拮抗劑，為常用的抗過(guò)敏藥物，廣泛用于治療各種皮膚過(guò)敏癥、過(guò)敏性鼻炎、藥物及食物過(guò)敏等。氯苯那敏具有明顯的中樞抑制作用，可引發(fā)交叉過(guò)敏，引起嗜睡困倦、口渴心悸、皮膚瘀斑、出血傾向以及肝損傷等[1-4]。

目前市場(chǎng)上存在許多種抗過(guò)敏類(lèi)健康產(chǎn)品，大多宣稱其成分主要為純天然成分，不含西藥。不法分子利用中成藥和保健食品成分復(fù)雜的特點(diǎn)，非法添加氯苯那敏[5-9]，夸大宣傳功效，給人民群眾的身體健康帶來(lái)嚴(yán)重威脅。

本研究建立了一種簡(jiǎn)單快速的化學(xué)顯色反應(yīng)方法，可用于抗過(guò)敏類(lèi)健康產(chǎn)品中是否非法添加氯苯那敏的快速篩查。此外，本研究還建立了高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，用于快篩結(jié)果的確證。

1 儀器與試藥

AB SCIEX3200QTRAP液質(zhì)聯(lián)用儀；賽多利斯BP211D電子天平；馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)100047-200606，含量99.7%)；甲醇、乙酸及乙酸銨均為色譜純，水為超純水，其余試劑為化學(xué)純?？惯^(guò)敏類(lèi)健康產(chǎn)品為市購(gòu)滴鼻劑(共31批)。

2 方法與結(jié)果

2.1 化學(xué)顯色反應(yīng)快篩方法

2.2.1 取樣 結(jié)合收集的樣品及市面流通的此類(lèi)健康產(chǎn)品的實(shí)際情況，推薦取樣量如表1所示。

表1 各劑型推薦取樣量

注：如為固體樣，需研細(xì)。

2.1.2 供試品處理 取供試品1mL放入裝有5mL水的A瓶中，閉塞，振搖1min，靜置后吸取水溶液1mL，加入裝有2mL醋酸-醋酸鈉緩沖鹽溶液(pH=3.6)的B瓶中，振搖后加入1mg/mL的鈣紫紅色素溶液1mL，搖勻，再加入3mL二氯甲烷，振搖，靜置分層。

2.1.3 結(jié)果判斷 觀察二氯甲烷層(下層)顏色，如顯粉紅至紅色，表明供試品含氯苯那敏；如顏色無(wú)變化，則不含氯苯那敏。

2.2 方法驗(yàn)證

2.2.1 專屬性試驗(yàn) 分別取馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品及陰性樣品感冒退熱顆粒(批號(hào)：MC003，生產(chǎn)廠家：廣東益和堂制藥有限公司)適量，按“2.1.2”項(xiàng)方法，觀察二氯甲烷層的顏色。結(jié)果：陽(yáng)性對(duì)照溶液管中的二氯甲烷層顯紅色，陰性對(duì)照溶液管中二氯甲烷層為無(wú)色，表明該反應(yīng)專屬性良好。

2.2.2 靈敏度試驗(yàn) 取馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品適量加水溶解，稀釋制成0.001mg/mL～0.5mg/mL靈敏度檢測(cè)溶液，按“2.1.2”項(xiàng)方法，分別加入不同濃度的靈敏度檢測(cè)溶液，結(jié)果顯示方法的最低檢出限為0.005mg/mL。

2.3 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

2.3.1 色譜條件 色譜柱：CAPCELL PAK C18MG III 5μm，2.0×150mm；流動(dòng)相：以0.4%乙酸-0.04%乙酸銨緩沖溶液-甲醇(45∶55)，流速：0.2mL/min；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：30℃。

2.3.2 質(zhì)譜條件 ESI電離源；正離子模式；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)掃描方式；噴霧電壓：5 500V；氣簾氣壓力：25psi；霧化氣壓力：40psi；輔助加熱器溫度：400℃；輔助氣壓力：40psi；碰撞氣壓力：Medium；碰撞室出口電壓：3 V，解簇電壓(DP)及碰撞能量(CE)。見(jiàn)表2。

表2 馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品的質(zhì)譜條件優(yōu)化結(jié)果

2.3.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱定馬來(lái)酸氯苯那敏對(duì)照品約10mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取上述溶液1mL置100mL量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

2.3.4 供試品溶液的制備 稱密量取1mL供試品溶液置25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液1mL置100mL量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，過(guò)0.2μm濾膜，取續(xù)濾液即得。

2.3.5 樣品測(cè)定 取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μL注入液質(zhì)聯(lián)用儀，按照LC-MS/MS測(cè)定條件分別進(jìn)行分析，按下表3判定，5批樣品中確證非法添加氯苯那敏。典型圖譜見(jiàn)圖1-圖2。

表3 定性離子對(duì)相對(duì)豐度的最大允許相對(duì)誤差 (%)

圖1 氯苯那敏對(duì)照品的質(zhì)量色譜及離子對(duì)

圖2 樣品(B-24)中的氯苯那敏的質(zhì)量色譜及離子對(duì)

3 結(jié)果評(píng)價(jià)

應(yīng)用本方法篩查31批市售抗過(guò)敏類(lèi)樣品，結(jié)果有5批檢出非法添加氯苯那敏，并經(jīng)高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法確證。本方法篩查的靈敏度為100%，漏檢率為0，正確率為100%。

4 討論

4.1 快篩前處理方法研究

本研究對(duì)快篩前處理曾考察過(guò)多種化學(xué)鑒別方法：①針對(duì)馬來(lái)酸的不飽和雙鍵，利用其還原性可使酸性高錳酸鉀試液褪色；②針對(duì)氯苯那敏結(jié)構(gòu)的吡啶環(huán)含第三氮原子，呈堿性，可與重金屬鹽類(lèi)(如氯化汞、硫酸銅、碘化鉍鉀等)及苦味酸等沉淀劑發(fā)生沉淀反應(yīng)等；③針對(duì)氯苯那敏側(cè)鏈上的叔胺結(jié)構(gòu)，可與枸櫞酸醋酐試液加熱后反應(yīng)顯紫紅色等。但以上方法專屬性不強(qiáng)，且使用毒害試劑或需增加輔助加熱儀器等，均不適用于開(kāi)發(fā)現(xiàn)場(chǎng)快速篩查方法。本快篩方法通過(guò)向待測(cè)樣品中加入特定pH值的緩沖鹽溶液，使氯苯那敏單元中側(cè)鏈?zhǔn)灏方Y(jié)構(gòu)帶電，從而與顯色劑鈣紫紅色素發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，生成非極性的有色絡(luò)合物，經(jīng)二氯甲烷萃取后，使二氯甲烷層溶液變色。此方法簡(jiǎn)便快捷靈敏，無(wú)需使用額外輔助設(shè)備。

4.2 檢出限

馬來(lái)酸氯苯那敏單次常用口服劑量為4mg，本化學(xué)快篩方法檢出氯苯那敏的單次最少檢出量?jī)H為0.03mg，簡(jiǎn)單靈敏，可廣泛應(yīng)用于抗過(guò)敏類(lèi)健康產(chǎn)品中非法添加氯苯那敏的快速篩查。

在高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜方法中，取不同濃度的對(duì)照品溶液進(jìn)樣，記錄質(zhì)量色譜圖并計(jì)算信噪比S/N值，至S/N≈3為檢出限，結(jié)果該法檢出限為0.01ng，滿足確證方法要求。

5 結(jié)語(yǔ)

本實(shí)驗(yàn)建立了抗過(guò)敏類(lèi)健康產(chǎn)品中非法添加氯苯那敏的化學(xué)反應(yīng)快篩方法，共計(jì)對(duì)31批樣品進(jìn)行測(cè)定，經(jīng)高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法確證有5批樣品非法添加馬來(lái)酸氯苯那敏。本實(shí)驗(yàn)方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確，可廣泛應(yīng)用于抗過(guò)敏類(lèi)健康產(chǎn)品中非法添加氯苯那敏的快速篩查。