柴胡黃芩藥對的基礎研究探析＊

張程亮，蘭露露，任秀華，劉 東

（華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院藥學部 武漢 430030）

藥對又稱對藥，是臨床上中藥配伍相對固定的兩味藥物搭配形式，是在中醫藥理論指導及辨證論治的前提下，遵循中藥配伍的“七情和合”理論，從而發揮協同增效（功效拓展或增強）或配伍減毒（減輕或消除副作用）等作用[1]。柴胡與黃芩是中醫臨床常見的藥對（以下簡稱柴黃藥對），首見于張仲景的《傷寒論》，是仲景名方中之一，在小柴胡湯等經典方劑中配伍應用[2]；柴胡苦平，疏肝開郁，和解退熱，升舉陽氣；黃芩苦寒，清熱燥濕，瀉火解毒，止血，安胎。柴胡入少陽肝膽，調暢氣機；黃芩也為少陽要藥，直折郁熱。二藥相合，升散外邪，清解郁熱，調和表里，和解少陽[3]。近些年國內學者對柴黃藥對的藥效成分和藥理作用進行廣泛的研究，取得了一定的研究成果。本文將該領域研究綜述如下，以期為中醫藥研究工作者對柴黃藥對的深入開發提供參考。

1 柴黃藥對配伍對主要藥效成分溶出的藥學研究

柴胡的主要藥效成分是柴胡皂苷A、D[4],黃芩的主要藥效成分是黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素[5]。柴胡黃芩配伍后在提取過程中各種成分可能會發生相互作用，導致主要化學成分或溶出度產生變化，進而影響藥效的強弱。不少學者針對柴黃藥對配伍后的主要藥效成分溶出情況進行了考察。

1.1 配伍比例對藥效成分溶出的影響

柴黃藥對與柴胡、黃芩單藥相比，配伍后柴胡皂苷和黃芩苷的煎出量增加[6]，并且柴胡黃芩的配伍比例對黃芩苷煎出量有一定影響，研究發現，柴胡、黃芩1：2配伍時黃芩苷的煎出量最大，與黃芩單藥相比增加19.3%[7]。但是劉逢芹[8]等利用RP-HPLC 考察柴黃藥對不同配伍比例中黃芩苷的溶出量時發現，不同比例配伍對提取液中黃芩苷的含量影響較小，可能是柴胡的用量偏少而達不到“混煎增溶”的效果所致，所以仍需進一步研究配比對主要藥效成分溶出的影響。

1.2 提取方式對藥效成分溶出的影響

不同提取溶劑對柴黃藥對中藥效成分的溶出具有一定的影響。研究發現，柴胡黃芩配伍后水提、醇提對黃芩苷提出率影響不大，無論水提或是醇提，柴黃藥對中黃芩苷的含量都比黃芩單獨提取要高；而提取溶劑對柴胡皂苷的提出率影響較大，采用乙醇更能較為完全地將柴胡皂苷提出，水提則無效[9]。因此，在前期研究的基礎上，侯緒浩等[10]使用70%乙醇作為提取溶劑考察柴胡黃芩配伍前后柴胡皂苷A、D的溶出量差異，結果顯示，柴胡皂苷A的提出量幾乎比柴胡單藥的溶出量多一倍，柴胡皂苷D的提出量也比配伍前提高了45%。

總體來看，柴胡黃芩配伍可以增加有效成分的溶出，這可能是柴黃藥對配伍后藥效增強的物質基礎。然而目前的研究主要集中與兩藥配伍后主要藥效成分的溶出，對于其他物質的溶出情況尚未見研究。更重要的是，兩藥配伍后主要藥效成分在體內的藥動學考察尚未見報道，這也是將來值得探索和考察其協同作用機制的方向。

2 藥理研究

柴黃藥對的藥理作用十分廣泛，具體有以下幾個方面。

2.1 緩解肝損傷

以柴黃藥對為主要組成的小柴胡湯等多種方劑臨床上已經用于治療各種急慢性肝炎[11]?，F代藥理學研究發現，柴黃藥對對酒精[12]、對乙酰氨基酚[13]、四氯化碳（CCl4）[14]等物質誘導的急性肝損傷具有較好的保護作用。柴胡黃芩的配伍比例對于其在不同類型肝損傷中的保護效果具有一定的影響，例如柴胡-黃芩（1∶2）配伍時對大鼠酒精性肝損傷[12]和對乙酰氨基酚[13]引起急性肝損傷的保護作用療效最佳，可以顯著降低大鼠血清中丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）水平，提高肝組織中總蛋白的含量，改善肝組織炎癥變性和脂肪變性；而柴胡-黃芩（2∶1）配伍時對CCl4所致肝損傷保護作用最佳[14]。研究發現，柴黃藥對保護肝損傷的活性成分主要存在于水飽和正丁醇部位[15,16]。柴黃藥對緩解肝損傷的機制可能包括抗凋亡、抗氧化、抑制環氧合酶、抗炎等，具體介紹如下。

2.1.1 抗凋亡

CCl4通過直接攻擊細胞膜和線粒體導致肝細胞凋亡，這是誘導肝損傷的重要病理機制。陳慧慧[17]利用血清藥理學方法同時考察了不同比例柴黃藥對對于CCl4誘導肝損傷的保護作用，結果發現各比例配伍的柴黃藥對含藥血清均能不同程度降低受損肝細胞上清液中的AST、ALT水平，提高受損肝細胞的Bcl-2表達，降低Bax 表達，提高Bcl-2/Bax 比值，并減少肝細胞凋亡小體產生，從而對抗CCl4誘導的細胞凋亡。還有研究者[18]通過考察柴黃藥對含藥血清對異煙肼所致肝細胞損傷的保護作用，發現柴黃藥對可以抑制Fas及Fas L的表達，降低細胞總凋亡率，表明其可能是通過抑制Fas/Fas L通路來發揮抗凋亡作用。

2.1.2 抗氧化

有關柴胡皂苷[19]和黃芩苷[20]抗氧化應激的作用已經在肝臟疾病中被廣泛研究和反復驗證。在酒精[16]和CCl4[21]誘導的肝損傷大鼠實驗中，柴黃藥對可下調肝損傷大鼠血清中轉氨酶及丙二醛的升高水平，并提高谷胱甘肽和超氧化物歧化酶的活性，進一步防止肝細胞脂肪變性、壞死和纖維組織增生，還可促進白蛋白合成和甘油三酯代謝，表明柴黃藥對可能通過拮抗自由基及其引發的脂質過氧化反應來改善肝細胞損傷狀態。

2.1.3 抑制環氧合酶

環氧合酶-2（COX-2）與多種細胞和組織的炎癥損傷及增殖過程有關，在肝臟炎癥、脂肪變性、纖維化等發展中有著重要的作用[22-23]。柴黃藥對可以抑制酒精性肝損傷大鼠肝組織中COX-2 的過度表達[24]，仝艷等人[25]通過分子對接、分子動力學模擬和結合自由能計算結合的方法，探究柴胡和黃芩中主要活性成分柴胡皂苷A、柴胡皂苷D、黃芩苷、黃芩素與COX-2 的相互作用，結果表明柴胡與黃芩作用的靶點不同，在以COX-2 為酒精性肝損傷的治療靶點時，黃芩素與COX-2的結合能力最強，是起主要作用的中藥活性成分。

2.1.4 抗炎

CCl4損傷肝細胞時，體內TLR4-NFκB信號通路介導的炎癥反應表達增強[26]，柴黃藥對水煎液對肝細胞中的NFκBp65 和TLR4 蛋白具有抑制作用，說明其緩解肝損傷的機制可能與下調體內TLR4-NFκB 信號通路，降低炎癥有關[27]。為了明確其作用的有效成分及作用機制，李敏等[28]在前期實驗研究的基礎上，應用柴胡皂苷D和黃芩苷配伍干預CCl4損傷的肝細胞，證實了柴胡皂苷D-黃芩苷配伍可通過下調TLR4-NFκB信號通路保護肝細胞。

雖然國內外已有大量的研究發現柴胡中主要成分柴胡皂苷和黃芩中主要活性物質黃芩苷可通過抗氧化應激[29]、抗炎[20]、抗凋亡[30]等多方面保護肝細胞，這些均可能是柴黃藥對配伍后保護肝細胞的作用機制，然而兩者配伍后不同藥效成分是否從不同靶點、或者同一機制協同發揮作用尚不得而知，具體的網絡藥理學機制有待更多的研究來揭示。

2.2 抗肝纖維化

王斌等人用復合因素法建立大鼠肝纖維化模型，應用不同劑量的柴黃藥對進行干預，結果發現，各劑量的柴黃藥對均能顯著降低肝纖維化大鼠血清中透明質酸（HA）、Ⅲ型前膠原（PCⅢ）和Ⅳ型膠原（Ⅳ-C）等促纖維化因子的水平，同時緩解肝臟纖維化的病理學改變，其中18 g生藥·kg-1組的作用最為明顯，證實了柴黃藥對具有明確抗肝纖維化作用[31]。柴黃藥對干預可以有效抑制CCl4誘導的肝星狀細胞（HSC）增殖，使HSC表面的TLR4 和NF-κB mRNA 及蛋白的表達明顯降低，從而減少NF-κB誘導的炎性反應和細胞壞死及纖維化，因此調控TLR4-NF-κB 信號通路可能是柴黃藥對抗纖維化的作用機制之一[32,33]。

2.3 抗病毒作用

柴黃藥對在治療柯薩奇B3嗜心臟病毒(CVB3m)誘導的心肌炎方面具有良好的效果。王雪峰等[34]以腹腔注射CVB3m誘導的心肌炎小鼠（VMC）為模型，觀察柴胡、黃芩提取物對病毒性心肌炎小鼠整體保護作用,結果表明柴胡、黃芩提取物對感染小鼠心肌病理組織學、電鏡超微結構改變均有明顯改善作用，使小鼠死亡率明顯降低。柴胡、黃芩可以促進受染心肌凋亡并下調凋亡相關因子Bcl-2 的表達，說明其作用機制可能與促進受染細胞的凋亡有關[35]。通過檢測黃芩提取物、柴胡提取物和配伍提取物給藥后VMC 心肌組織中CVB3mRNA復制和干擾素（IFN）mRNA表達情況，發現黃芩與柴胡在抑制病毒復制和誘生干擾素方面各有優勢，而配伍組則兼具兩種作用，在病毒復制高峰時期表現出明顯優勢[36]。謝斌等[37]在柴黃藥對的血清藥理學研究中發現，柴黃藥對可以保護受CVB3m感染的心肌細胞，但是等量配伍提取物含藥血清在體外保護細胞方面與單味藥相比無顯著性差異，這一結果可能與此研究未考察不同配比柴黃藥對的作用有關，未來應進一步尋求療效最佳的劑量配比關系，以明確藥對治療病毒性心肌炎的效果。

研究發現，柴胡與黃芩配伍還能顯著抑制雞胚內流感病毒，對小鼠肺炎病毒所致小鼠肺指數增高有降低作用且可以降低小鼠的死亡率[38]。雖然還未有文獻報道柴黃藥對具有抗乙肝病毒的作用，但已發現柴胡中的柴胡皂苷C可以抑制HBsAg分泌和HBV-DNA的產生，黃芩中的成分漢黃芩素可以顯著抑制HBsAg、HBeAg 分泌和HBV-DNA 的產生[39]，所以柴黃藥對在抑制乙型肝炎病毒方面可能具有協同作用。

2.4 解熱作用

柴黃藥對作為和解少陽的重要配伍，在解肌退熱方面具有良好的療效[40]?！侗静輩R言》云：“清肌退熱，柴胡最佳，然無黃芩不能涼肌達表”，說明柴胡與黃芩配伍在退熱方面有協同作用?，F代藥理研究發現，柴黃藥對的不同配伍比例對不同發熱模型大鼠解熱作用強度有差異。柴胡黃芩1∶2 配伍對2，4-二硝基苯酚致熱大鼠模型的解熱作用最強，而柴胡黃芩1：1配伍對干酵母發熱模型大鼠的解熱作用則表現較好[41]。在對柴黃藥對中有效組分及其配伍的退熱效用考察中，發現柴黃藥對中化學成分群的不同配方對發熱模型表現出不同的作用，其中揮發油部分(B)、黃酮部分(D)和剩余混合物部分(E)在解熱效應中發揮重要作用，化學成分群BDE為正交設計法優選出的抑制LPS誘導大鼠發熱最佳配方[42]。北京中醫藥大學的楊江萍[43]在對柴胡、黃芩退熱有效部位和作用機制研究中，發現了皂苷類和黃酮類化合物是柴黃水提液中退熱的主要效應物質，其退熱機制主要涉及體溫中樞正調質前列腺素E2(PEG2)、環磷酸腺苷(cAMP)的調節及抑制內生致熱原如腫瘤壞死因子α（TNF-α）、β內啡肽（β-EP）的合成和釋放。

2.5 治療肝癌

雖然柴胡皂苷[44]和黃芩苷[45]防治肝癌的作用已被大量的實驗證實，但是柴胡和黃芩配伍后的抗肝癌作用研究卻少見報道，有研究發現柴胡皂苷A、黃芩素及其配伍組對人肝癌HepG2和SMMC-7721 細胞具有抑制增殖、促凋亡的作用，且配伍后作用均強于單藥。柴黃藥對在防治肝癌方面具有明顯的協同作用，其可能是通過誘導凋亡相關基因Caspase-3 表達升高和下調COX-2 表達發揮作用[46]，但具體的作用機制有待進一步研究。

2.6 利膽

柴黃藥對入少陽膽經，具有疏肝利膽之功效[47]。孫付軍等[48]通過考察柴胡黃芩單藥及不同比例配伍對大鼠膽汁分泌總量和膽汁中主要成分含量的影響，結果表明柴胡和黃芩配伍應用可以增加膽汁的分泌量，同時提高膽汁中膽紅素和膽固醇水平。而且黃芩和柴胡配伍比例在1∶2和1∶1之間利膽效果最優最佳，其利膽作用在一定范圍內可能隨黃芩含量的增加而增強。

2.7 抗癲癇

中醫認為肝氣郁滯是癲癇的主要病機，柴胡黃芩二藥相伍，恰可和解少陽，又可以疏肝理氣、養肝柔肝，利于癲癇的治療[49]。有學者考察柴胡黃芩1∶1、5∶2配伍和柴胡、黃芩單藥對不同模型癲癇小鼠的抗癲癇作用，發現柴胡黃芩5∶2 配伍可明顯延長戊四氮誘導的小鼠急性癲癇模型的發作性陣攣潛伏期、發作性強直潛伏期以及死亡潛伏期，且可降低最大電休克模型中小鼠的驚厥率[50]，表明柴黃藥對對癲癇治療有良好的效果，且其抗癲癇作用與柴胡的劑量可能有一定的量效關系。

3 結語

柴黃藥對是中醫方劑中的經典配伍，已被證明具有顯著的疾病防治作用。本文通過收集近些年針對柴黃藥對的文獻報道，進行了總結和歸納。從上文可見，現代藥學研究發現柴黃藥對配伍可以增加主要藥效成分柴胡皂苷和黃芩苷的溶出；藥理實驗研究表明，柴黃藥對在緩解肝損傷、抗肝纖維化、抗病毒、解熱、治療肝癌、利膽和抗癲癇等方面具有不錯的療效。然而，目前有關柴黃藥對主要藥效成分在體內的生物利用度考察尚未見報道，其具體靶點和深入的作用機制仍未被闡明。因此未來可通過蛋白質學和代謝組學等手段闡明藥對作用于機體后的功效物質變化，并通過分子網絡藥理學深入研究其作用靶點和具體機制，為柴黃藥對的深入開發提供參考。