血清抗橋粒芯蛋白1和3抗體在天皰瘡臨床診斷中的意義

周小芳，宋志強，鄧向芬，顧洪芝，張 戀，鐘白玉，翟志芳

天皰瘡（pemphigus）是一類累及皮膚和黏膜的自身免疫性皰病，組織病理表現(xiàn)為棘細(xì)胞層松解。患者血清內(nèi)存在針對主要抗原為橋粒芯蛋白1（desmoglein1，Dsg1）和橋粒芯蛋白3（desmoglein3，Dsg3）的自身抗體，該自身抗體是診斷天皰瘡的免疫學(xué)指標(biāo)之一，同時其抗體水平高低與病情變化相關(guān)[1,2]。筆者回顧性分析酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測臨床擬診為天皰瘡患者的血清抗Dsg1和抗Dsg3抗體的陽性率，對其在天皰瘡診斷中的敏感度和特異度進(jìn)行評價。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2014年8月—2017年12月在我院首診時擬診為天皰瘡的患者113例，其中男62例，女51例，年齡12～83歲，平均（47±3.7）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①首診擬診為天皰瘡；②患者臨床皮損面積＞10%，皮損表現(xiàn)為紅斑、糜爛，伴或不伴有水皰、大皰損害；③同時行皮損組織病理、直接和（或）間接免疫熒光檢查；④臨床資料完整。已經(jīng)確診為天皰瘡或經(jīng)過治療的患者，以及臨床資料不完整的患者除外。

1.2 方法

1.2.1 ELISA檢測法 應(yīng)用Dsg1抗體和Dsg3抗體診斷試劑盒（ELISA，日本MBL公司），按照試劑盒說明進(jìn)行操作。結(jié)果判定：Dsg1 ELISA：ELISA指數(shù)≥20 U/ml為陽性；ELISA指數(shù)14～20 U/ml為不確定；ELISA指數(shù)＜14 U/ml為陰性。Dsg3 ELISA：ELISA指數(shù)≥20 U/ml為陽性；ELISA指數(shù)7～20 U/ml為不確定；ELISA指數(shù)＜7 U/ml為陰性。

1.2.2 組織病理檢查 常規(guī)皮膚活檢術(shù)取紅斑或水皰側(cè)皮膚送組織病理檢查，正常皮膚側(cè)送直接免疫熒光檢測，同時抽取外周血行間接免疫熒光檢測。

1.2.3 天皰瘡診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]①臨床表現(xiàn)為皮膚松弛性水皰和大皰，尼氏征陽性，常伴有黏膜損害；②組織病理表現(xiàn)為表皮內(nèi)棘層松解；③間接免疫熒光檢查，血清中有表皮棘細(xì)胞間天皰瘡抗體；④直接免疫熒光檢測，表皮棘細(xì)胞間有IgG、C3沉積。此外，外周血Dsg1抗體和（或）Dsg3 抗體檢測陽性是近年新增的天皰瘡診斷新方法[4]。

2 結(jié)果

113例患者中，77例確診為天皰瘡（包括紅斑型和尋常型）。77例患者組織病理均表現(xiàn)為表皮內(nèi)棘層松解。間接免疫熒光檢測表皮棘細(xì)胞間均有IgG網(wǎng)狀熒光沉積。直接免疫熒光檢測示表皮棘細(xì)胞間有IgG、C3、IgA、IgM網(wǎng)狀熒光沉積39例；表皮棘細(xì)胞間有IgG、C3、IgA網(wǎng)狀熒光沉積7例；表皮棘細(xì)胞間有IgG、C3、IgM網(wǎng)狀熒光沉積1例；表皮棘細(xì)胞間有IgG、C3網(wǎng)狀熒光沉積30例。確診為天皰瘡的77例患者中，Dsg1抗體及Dsg3同時陽性的39例，陽性率為34.51%，Dsg1抗體陽性的 71例（含39例雙抗體陽性的患者），陽性率62.83%，敏感度為92.21%，特異度100%；Dsg3 抗體陽性45例（含39例雙抗體陽性的病例），陽性率39.82%，敏感度58.44%，特異度100%。36例非天皰瘡患者Dsg1 抗體和Dsg3抗體均陰性。

3 討論

天皰瘡直接免疫熒光檢查可見棘細(xì)胞間IgG和C3沉積，同時，血清內(nèi)存在針對主要抗原為Dsg1和Dsg3的自身抗體，因此，通過ELISA法檢測Dsg1、Dsg3特異性抗體，可作為一種新的天皰瘡特異性抗體的檢測技術(shù)。該方法具有高度的敏感性和特異性，同時還可以區(qū)分尋常型和落葉型天皰瘡[5,6]，而且在疾病的不同階段檢查該抗體有助于指導(dǎo)糖皮質(zhì)激素的用量以及判斷病情的轉(zhuǎn)歸[8,9]。

本研究對113例大皰性皮膚病患者進(jìn)行了回顧性研究，其中77例患者經(jīng)臨床表現(xiàn)、組織病理學(xué)檢查、直接和（或）間接免疫熒光檢查。對確診為天皰瘡的77例患者進(jìn)一步分析，其Dsg1抗體陽性 71例（62.83%），敏感度92.21%，特異度100%；Dsg3抗體陽性45例（39.82%），敏感度58.44%，特異度100%。36例其他大皰性皮膚病患者Dsg1 抗體和Dsg3抗體均陰性。總體上看，Dsg1抗體檢測在天皰瘡診斷中的敏感度較高，達(dá)92.21%，這與李洪文等[7]報道抗Dsg抗體在天皰瘡中的總陽性率90.5%結(jié)果相近。閆言等[8]報道抗Dsg3抗體水平與口腔黏膜損害嚴(yán)重程度有顯著相關(guān)性，Dsg3抗體陽性患者多伴有明顯口腔黏膜損害，本文Dsg3抗體敏感度（58.44%）稍低，可能與患者例數(shù)以及入選患者的天皰瘡類型有關(guān)，但二者對天皰瘡的診斷均具有非常高的特異性。有研究表明，天皰瘡患者血清抗Dsg抗體與疾病表型、病情活動性存在明顯相關(guān)性。朱海琴等[9]的研究表明，抗Dsg1和Dsg3抗體類別與天皰瘡臨床類型有關(guān)，而且隨著病情的加重，抗Dsg1和Dsg3抗體滴度有上升趨勢。馮素英等[10]的研究表明，在天皰瘡的不同階段（天皰瘡患者治療前、病情緩解且糖皮質(zhì)激素開始減量時、糖皮質(zhì)激素減量至相當(dāng)于初始量1/2時、維持治療開始時以及隨診2年時）檢查體內(nèi)Dsg1和Dsg3 ELISA指數(shù)是不同的。通過ELISA測定其存在抗體及其滴度變化，對臨床做出正確診斷，進(jìn)一步監(jiān)測病情的活動，制定糖皮質(zhì)激素減量的計劃，預(yù)測疾病的反復(fù)或復(fù)發(fā)，具有重要指導(dǎo)意義[1,4,5]。該研究由于病例數(shù)偏少，未對Dsg1、Dsg3抗體與不同類型天皰瘡的相關(guān)性進(jìn)行分析，需要今后進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行比較分析。

綜上所述，ELISA方法測定天皰瘡患者外周血抗Dsg1抗體和抗Dsg3抗體，方法簡便，對患者創(chuàng)傷小，具有高度的敏感性和特異性，通過檢測其存在和滴度對臨床診斷與治療有重要指導(dǎo)意義。