特應性皮炎患者皮膚中轉谷氨酰胺酶2蛋白的檢測

沈 輝，高艷薇

特應性皮炎（atopic dermatitis，AD）是一種自身變態反應性疾病，其發病機制復雜[1]，臨床主要為IgE和嗜酸粒細胞增多[2]，具體的致病機制仍未完全闡明，研究其發病機制對于疾病的防治具有積極的意義。轉谷氨酰胺酶2（transglutaminase-2，TG2）是角質包膜形成的關鍵蛋白，在皮膚的最后分化階段起到關鍵的作用[3]。已有研究顯示TG2作為自身抗原參與了一些自身免疫性疾病的發病過程[4]。本研究檢測了AD患者皮膚中轉谷氨酰胺酶2蛋白表達的水平，借此探討其在AD致病中的作用。

1 病例和方法

1.1 病例資料

收集我院2017年1月—2018年1月皮膚科診治的AD患者52例的皮損組織，納入標準：符合Williams AD診斷標準[5]。排除標準：伴發皮膚炎癥以及其他免疫異常病變者，曾服用糖皮質激素類或免疫抑制劑治療者。另取我院同期痣切除患者切緣周圍正常皮膚標本30例作為正常對照。AD組男28例、女24例，平均年齡（32.28±6.62）歲（8～52歲）；對照組男27例、女25例，平均年齡（32.15±6.71）（9～51歲）。兩組患者在性別、年齡方面具有可比性（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 皮膚組織TG2蛋白表達的酶聯免疫吸附試驗（ELISA） 取AD患者皮損處皮膚50 mg，1 ml PBS緩沖液中組織勻漿，離心取上清，酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測上清中TG2蛋白表達水平，檢測試劑盒購自上海魯汶生物科技有限公司，交由檢驗科參照試劑盒說明書步驟操作。加入相關試劑顯色后，450 nm波長測定樣品的吸光度，結合試劑盒提供的標準品繪制標準曲線，對照標準曲線計算各樣本皮膚組織中TG2蛋白表達水平。

1.2.2 臨床觀察指標 記錄患者的嗜酸粒細胞計數和評估AD評分（SCORAD），SCORAD評分根據臨床癥狀按 0、1、2、3 等級評分[6]。

1.4 統計學方法

SPSS16.0軟件處理實驗數據，計量數據符合正態分布，采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，Spearman檢驗分析各指標間的相關關系，檢驗水準α=0.05，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 AD患者皮膚組織TG2 蛋白表達和臨床指標的變化

AD患者皮膚組織TG2 蛋白為（11.57±3.25 ）ng/ml，顯著高于對照組（0.16±0.03）ng/ml（P＜0.01）。AD患者嗜酸粒細胞計數為（0.52±0.13）×109/L，顯著高于對照組（0.31±0.07）×109/L（P＜0.01）。AD患者SCORAD評分為（8.46±1.54）分，顯著高于對照組的（0.09±0.02）分（P＜0.01）（表1）。

表1 兩組TG2 蛋白和臨床指標比較

2.2 AD患者皮膚組織TG2 蛋白表達與臨床指標的相關性分析

Spearman檢驗分析顯示AD患者皮膚組織中TG2蛋白表達與患者的性別和年齡無顯著相關性，但TG2蛋白與AD患者的嗜酸粒細胞計數（r=0.473，P＜0.05）和SCORAD評分（r=0.462，P＜0.05）呈顯著正相關（表2）。

表2 TG2蛋白與AD患者嗜酸粒細胞計數和SCORAD評分的相關性分析

3 討論

皮膚屏障功能受損是AD發生、發展的主要機制之一，近年來正逐漸引起學者們的關注[7]。TG2是一種多功能蛋白，由331個氨基組成，可以參與細胞分化、炎癥、遷移和傷口愈合在內的多種細胞過程[8]。在皮膚組織角質包膜形成過程中需要TG2的酰基轉移或賴氨酸殘基轉移作用，為皮膚屏障功能維護的重要活性分子[9]。Li等[7]的研究發現谷氨酰胺轉胺酶基因缺失小鼠會發生皮膚屏障功能的損傷，表皮局部對刺激的保護性反應減少，在紫外線照射過程中皮膚的炎癥反應顯著減低，可能是內質網鈣釋放，在缺失了TG2后，無法打開鈣通道。本研究顯示AD患者皮膚組織中TG2高表達，可能是這些高表達的TG2，加強了炎癥通路的激活，導致了患者病程的發生和進展。蘇惠春等[10]使用ELISA檢測AD患者TG2特異性IgE水平表達，發現患者有高的血清特異性TG2-IgE表達，并且與患者的病情呈正相關，這可能是皮膚中高表達的TG2激活了機體的免疫反應，產生了針對TG2的特異性IgE抗體。自身變態反應也是AD的一個主要發病機制，臨床研究已經發現患者體內會出現一些針對自身蛋白的特異性IgE抗體，這些特異性IgE抗體的滴度與患者的病情動態變化呈現正相關[11]。這一結果從側面驗證了筆者的研究結果。本研究的相關性分析顯示AD患者皮膚組織TG2 蛋白表達水平與患者的外周血嗜酸粒細胞計數和SCORAD評分呈顯著正相關，提示了TG2高表達可能參與了AD病變的進展。

綜上所述，本研究顯示AD患者皮膚組織中TG2蛋白高表達，其表達水平與患者的外周血嗜酸粒細胞計數和SCORAD評分呈顯著正相關。