骨調(diào)素、趨化因子和細胞因子水平與銀屑病關(guān)系的探究

馬小娜，王 爽，呼菊蓮，史龍泉，王宏東，張 輝，韓曉虹

銀屑病為常見的慢性炎癥性疾病，其病因不明且發(fā)病過程不可預(yù)測，發(fā)病率可達2%～3%[1,2]。尋常性銀屑病最為常見，約占銀屑病的95%左右，其臨床表現(xiàn)為邊界清楚、形狀不規(guī)則的紅斑，表面覆蓋多層鱗屑，且鱗屑易脫落，嚴(yán)重患者可擴散至全身[3,4]。銀屑病因其病情頑固不易治愈，患者需終生治療。有關(guān)細胞因子和趨化因子與銀屑病之間的關(guān)系研究較多[5,6]。Komorowski等[7]發(fā)現(xiàn)銀屑病患者血清中與肥胖者脂肪組織中骨調(diào)素（osteopontin，OPN）濃度較健康對照組高，而且肥胖和銀屑病有一定的相關(guān)性，患者的體重與銀屑病的嚴(yán)重程度也具有一定的相關(guān)性[8,9]。本研究探討OPN、CC類趨化因子配體 5[chemokine(C-C motif)ligand 5，CCL5]、趨化因子（C-X-C）配體 9[chemokine（C-X-C motif）ligand 9，CXCL9]、腫瘤壞死因子 -α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和 γ-干擾素（interferon-γ，IFN-γ）與銀屑病發(fā)生之間的關(guān)系，同時也分析銀屑病患者上述因子水平是否與患者肥胖狀態(tài)相關(guān)，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選擇2011年3月—2015年6月在我院就診的銀屑病患者，研究對象納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18歲；②均為尋常性銀屑病患者；③前4周均未給予銀屑病藥物或光療；④無免疫性疾病或慢性代謝病史；⑤病歷資料完整。根據(jù)上述納入標(biāo)準(zhǔn)共納入108例患者（研究組），其中肥胖患者53例，非肥胖患者55例；同時納入31例體檢健康志愿者為對照組，肥胖者15例，非肥胖者16例；所有納入的研究對象均簽訂知情同意書，本研究同時經(jīng)醫(yī)院道德倫理委員會審核通過。

研究組和對照組在年齡、性別、體質(zhì)（BMI）指數(shù)、肥胖、腰圍、腰臀比和腰高比方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05），具有臨床可比性（表1）。

1.2 方法

1.2.1 相關(guān)指標(biāo)定義 銀屑病嚴(yán)重程度采用銀屑病面積和嚴(yán)重度指數(shù)（psoriasis area severity index，PASI）進行評估，若PASI≥10則為中重度銀屑病[10]；根據(jù)中國肥胖問題工作組建議和中國成人超重和肥胖癥預(yù)防控制指南[11]，采用BMI進行評估，若BMI≥28 kg/m2則定義為肥胖。

1.2.2 OPN、趨化因子和細胞因子濃度測定 于受試者肘靜脈處采集外周全血10 ml，置于枸櫞酸鈉（濃度為0.129 mol/L）抗凝管中，于4 ℃，離心條件為978×g，離心15 min，分離血漿，并貯存在-30 ℃，待檢（血漿樣品在1個月內(nèi)完成檢測）。

OPN水平檢測采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）， 人 ELISA 檢測試劑盒購自R&D公司，具體操作按照說明書完成，采用多功能酶標(biāo)儀分別測定標(biāo)準(zhǔn)品和樣本A450吸光度，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算樣本中的OPN量，檢測靈敏度為0.011 ng/ml；CXCL9、CCL2和CCL5水平的測定均采用北京康潤生物公司人ELISA檢測試劑盒，操作參照說明書進行，分別測定標(biāo)準(zhǔn)品和樣本A450吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算樣本的CXCL9、CCL2和CCL5含量，檢測靈敏度為31.3 pg/ml。TNF-α和IFN-γ測定采用北京康潤生物公司人ELISA檢測試劑盒，操作參照說明書進行，分別測定標(biāo)準(zhǔn)品和樣本A450吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算樣本的TNF-α和IFN-γ含量，檢測靈敏度為3.9 pg/ml。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS.22.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析，連續(xù)性變量以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（xˉ±s）描述，組間差異性比較采用t檢驗；分類資料以百分比的形式描述，組間差異性比較采用χ2檢驗或Fisher精確檢驗，ROC曲線分析OPN的臨界值，采用多因素分析OPN水平與臨床特征的關(guān)系，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組和對照組OPN水平

研究組OPN水平為（42.98±20.32）ng/ml，對照組為(12.08±4.02)ng/ml，兩組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=8.399，P＜0.001）；研究組中肥胖患者OPN為（42.56±21.04）ng/ml，非肥胖患者為（43.04±19.08）ng/ml，兩者相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.114，P=0.455）；對照組中肥胖者OPN為（12.38±3.96）ng/ml，非肥胖患者為（11.98±4.02）ng/ml，兩者相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.494，P=0.311）。研究組中肥胖患者的OPN水平顯著高于對照組肥胖者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=25.362，P＜0.001）；PASI≥10銀屑病患者OPN水平為（43.02±20.14）ng/ml與PASI＜10[（42.06±21.02）ng/ml]相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.242，P=0.404）；肥胖銀屑病患者中平均PASI為（52.1±11.4）分，其中PASI≥10為53例，非胖患者PASI為（36.8±10.9）分，PASI＜10為12例（21.8%）。

血漿中OPN診斷銀屑病患者的臨界值為18.01 ng/ml，曲線下面積為0.802，診斷的敏感性為78%，特異性為74%；高血漿OPN水平與銀屑病的發(fā)生相聯(lián)系，銀屑病患者較正常健康人群相比高血漿OPN水平風(fēng)險顯著增加（P＜0.001）（表2）。

表1 研究組和對照組臨床基本特征

2.2 研究組和對照組趨化因子和細胞因子水平

研 究 組 CCL5、CXCL9、TNF-α 和 IFN-γ水 平分 別 為（4011.5±1024.1）pg/ml、（682.7±104.8）pg/ml、（76.7±33.4）pg/ml 和（41.6±10.5）pg/ml，對 照 組 為（2489.7±788.6）pg/ml、（622.2±118.4）pg/ml、（14.2±2.9）pg/ml和 10.1 pg/ml，兩組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=7.641，P＜0.001；t=2.757，P=0.003；t=10.067，P＜ 0.001；t=3.683，P=0.011）；研究組CCL2 水平為（785.6±344.5）pg/ml，對照組為（755.6±107.6）pg/ml，兩組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.477，P=0.317）。PASI≥10銀屑病患者CCL5水平為（4236.5±1113.4）pg/ml、CXCL9水平為（704.5±102.1）pg/ml、CCL2 水平為（796.4±339.3）pg/ml，與PASI＜10[（3988.3±877.3）pg/ml、（665.4±98.3）pg/ml和（781.5±342.7pg/ml）]相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.143，P=0.128；t=1.542，P=0.092；t=0.202，P=0.419），而TNF-α水平差異具有統(tǒng)計學(xué)意義[（102.2±18.4）pg/ml 對（51.1±16.5）pg/ml，t=13.932，P＜0.001）]。

2.3 CXCL9和TNF-α水平與OPN的相關(guān)性

研究組銀屑病患者OPN水平與CXCL9和TNF-α水平均無顯著相關(guān)性（r=0.008，P=902；r=0.112，P=887）（圖 1）。

3 討論

銀屑病為自身免疫性疾病，與促炎因子的生成相關(guān)聯(lián)[2]。OPN是免疫系統(tǒng)細胞分泌的糖蛋白，如脂肪組織巨噬細胞、角質(zhì)形成細胞、平滑肌、內(nèi)皮細胞。成骨細胞和肝細胞等等。OPN可以與不同種類的泛表達受體相互作用，包括整合素和CD44變異體，并在生理和病理過程中扮演著重要作用，例如炎癥和免疫反應(yīng)，增強Th1反應(yīng)而抑制Th2 反應(yīng)。OPN同時也參與Th17細胞系的調(diào)節(jié)，同自身免疫功能紊亂相關(guān)聯(lián)，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和克羅恩病[7,12]。研究發(fā)現(xiàn)銀屑病患者血清中和肥胖者脂肪組織中OPN濃度較健康對照者升高[7]，而且肥胖和銀屑病也具有一定的相關(guān)性，研究發(fā)現(xiàn)隨著體重的增加PASI也隨之增加[8,9]。本研究結(jié)果也進一步證實先前的研究觀察，銀屑病患者血漿中OPN水平高于對照組，但是肥胖和非肥胖銀屑病患者相比OPN水平并無顯著性差異，對于肥胖和非肥胖的對照組也具有類似的結(jié)果。此外，高血漿OPN水平與銀屑病的發(fā)生相關(guān)聯(lián)，銀屑病患者較正常健康人群相比高血漿OPN水平風(fēng)險顯著增加，這也表明OPN可能是影響銀屑病發(fā)病機制的一個重要因素。

表2 多因素回歸分析銀屑病患者高血漿OPN的相關(guān)因素

圖1 OPN水平與CXCL9和TNF-α水平的關(guān)系

另外，外周血中趨化因子水平較細胞因子水平更高，這也促使其可作為量化的更為方便和可靠指標(biāo)，因此，趨化因子可作為銀屑病治療效果的監(jiān)測因子。在疾病早期，通過抑制趨化因子下調(diào)促炎因子水平，其可作為特定細胞因子阻滯替代性選擇，趨化因子受體至少有一個配體，不同的趨化因子與不同的受體相結(jié)合；所以趨化因子和OPN可作為銀屑病最有潛力的生物指標(biāo)[9,13]。銀屑病患者經(jīng)高克曼（Goeckerman）法治療后，隨著CCL2和CCL5水平降低，皮膚的病變部位也得以緩解[14]；王凱新等[15]研究新疆地區(qū)尋常性銀屑病患者CXCL9和CCL5水平顯著高于正常人群，但是不同民族之間并無顯著性差異。本研究結(jié)果也表明銀屑病患者的CXCL9和CCL5水平高于對照組，但是銀屑病患者和健康人相比CCL2水平并無明顯差異；此外，先前的針對性探討銀屑病患者細胞因子與趨化因子之間的關(guān)系，如CCL2、CCL3、CXCL1、CXCL9、白細胞介素（IL）-6和IL-12或IL-13與PASI之間的關(guān)系，則常出現(xiàn)相反的的研究結(jié)果[16,17]。Ekma等[17]的 研 究 顯示，雖然銀屑病患者CXCL9、CXCL10、CCL17、CCL20 和CCL22水平高于對照組，但是只有CCL20與PASI相關(guān)，而且對于接受治療的患者細胞因子水平與對照組相比并無顯著性差異，此項研究也與本研究的結(jié)果相似。

本研究尚存在一定的不足之處。首先，研究所納入的患者數(shù)量較少，其統(tǒng)計分析略顯不足；其次，本研究僅分析患者血漿中各因子變化，并未采集患者病變處進行研究；第三，研究中所采用的手段具有一定的局限性，在測定銀屑病患者中OPN、趨化因子和細胞因子之間的相關(guān)性時，僅采用ELISA法進行檢測。因此，后續(xù)的研究應(yīng)該擴大標(biāo)本數(shù)量，同時采用多種研究方法，檢測患者血漿及病變處OPN、趨化因子和細胞因子的變化。

本文研究結(jié)果顯示，銀屑病患者血漿中OPN、CCL5、和CXCL9水平均高于健康者，而且其水平與患者是否肥胖無明顯相關(guān)性；高血漿OPN水平與銀屑病的發(fā)生相關(guān)聯(lián)，銀屑病患者較正常健康人群相比高血漿OPN水平風(fēng)險顯著增加。因此，OPN可能是影響銀屑病發(fā)病機制的重要分子，可作為銀屑病診斷的生物標(biāo)志物，或可用于臨床銀屑病患者的診斷。