Girdin在宮頸癌中的表達及其與血管生成的關系

曲曉媛 劉曉慶 尹秀花

山東中醫藥高等專科學校

宮頸癌是女性常見惡性腫瘤之一，占全部腫瘤發病的第三位，僅次于乳腺癌和結直腸癌，全球每年新增宮頸癌患者達50萬例以上。截至目前，宮頸癌發病機制尚未完全明確，其血管生成的機制亦未完全明了。

腫瘤的發生發展、增殖侵襲及轉移均依賴于腫瘤血管生成。腫瘤血管生成活躍程度對組織病理分級、放療及預后判斷都具有重要評估價值。Girdin（Gird of actin filaments）作為一種在哺乳動物中普遍表達的肌動蛋白結合蛋白[1]，在腫瘤的起始進展過程中扮演重要角色[2]。本研究旨在探索與腫瘤血管生成關系密切的Girdin在宮頸癌中的表達及其與血管生成的關系，以明確其在宮頸癌血管生成中的作用。

一、資料和方法

（一）一般資料

選擇煙臺毓璜頂醫院2015年1月至2016年12月經手術病理證實的宮頸癌患者60例，作為實驗組。所有患者均首次發病，術前未行任何治療。另選擇同期在該院因收集的正常宮頸組織標本20例，作為對照組。該研究已經倫理學委員會批準，患者知情同意。

（二）主要試劑

兔抗人Girdin多克隆抗體，鼠抗人CD34單克隆抗體。

（三）方法

1.標本處理。術中取新鮮標本，10%甲醛固定，常規石蠟包埋。每例組織連續切片4μm×3片，一片行HE染色明確病理診斷，其余兩張行免疫組化染色。

2.免疫組化（Envision二步法）染色。實驗步驟嚴格按照操作方法說明進行，Girdin多克隆抗體濃度1：120，CD34單克隆抗體濃度1：60。陰性對照采用PBS代替一抗，陽性對照采用結腸癌組織。

3.免疫組化結果判定。

（1）Girdin判定標準。Girdin陽性結果為細胞漿內出現棕黃色顆粒。每張切片隨機觀察10個高倍鏡視野，計數100個宮頸癌細胞中陽性細胞數目，根據胞漿染色強度和陽性細胞百分比評定。胞漿染色強度：無染色計0分，淺黃色計1分，棕黃色計2分，深棕色計3分。陽性細胞百分比：無染色細胞為0分，染色細胞≤25%為1分，染色細胞26%～50%為2分，染色細胞＞50%為3分。上述兩項相乘，按乘積分4級：0分為陰性（-），1～2分為弱陽性（＋），3～5分為中等陽性（＋＋），≥6分為強陽性（＋＋＋）。

（2） MVD計數。CD34標記腫瘤組織血管內皮細胞。以清晰棕黃色單個或數個血管內皮細胞圍繞成簇作為1個血管標記。低倍鏡選擇MVD熱區，轉高倍鏡下計數，取5個視野MVD平均值作為MVD。

（四）統計學方法

采用SPSS17.0統計軟件。計量數據用均數±標準差表示。各參數值之間比較用x2檢驗及相關系數檢驗，相關性采用Spearman等級相關檢驗，以P ＜0.05為差異有顯著性。

二、結果

（一） Girdin在正常宮頸組織和宮頸癌中的表達

Girdin在正常宮頸組織中不表達。宮頸癌中Girdin陽性率61.7%(37/60)。Girdin在宮頸癌中表達高于正常宮頸組織，差異有顯著性（P＜0.05）。

（二）宮頸癌組織中的MVD計數

正常宮頸組織中MVD 18.3±3.99，宮頸癌中MVD 39.35±5.13。宮頸癌組織與正常宮頸組織MVD計數比較，差異有顯著性(P＜0.05）。

（三）宮頸癌中Girdin與MVD之間的關系

宮頸癌中Girdin表達與MVD呈正相關（r=0.420，P＜0.01）。

三、討論

（一）Girdin在宮頸癌中的表達

Girdin是日本學者于2005年首次發現并報道的一種細胞內大分子蛋白，普遍表達于哺乳動物細胞中，由1870個氨基酸組成，分子量220～250kDa，在維持肌動蛋白的結構、調控腫瘤細胞的增殖侵襲和轉移、血管生成、創傷修復及細胞自噬等方面發揮重要作用。研究顯示[3]，Girdin在乳腺癌、結腸癌等多種惡性腫瘤組織中均高表達。本研究顯示，Girdin在正常宮頸組織中不表達，在宮頸癌中高表達，提示Girdin與宮頸癌的發生發展密切相關。表皮生長因子受體信號被激活時，Akt可直接激活Girdin[4]，活化的Girdin在細胞內重新分布，募集肌動蛋白、促進片狀偽足形成，最終促進細胞移行。Girdin和Akt可相互激活，因此，宮頸癌的發生發展過程中很可能存在這一信號通路的活化，從而促進癌細胞的存活和發展。但Girdin在宮頸癌中的具體作用機制尚不清楚，有待于進一步探索。

（二）宮頸癌中 Girdin表達與血管生成的關系

本研究結果顯示，宮頸癌中CD34表達明顯高于正常宮頸組織，說明宮頸癌中新生血管豐富，其發生發展與微血管密度之間可能存在某種關系，提示宮頸癌的新生血管生成可以為癌細胞提供充足的營養和血供，從而促進宮頸癌的惡性生物學行為。我們同時發現，宮頸癌中Girdin表達與MVD呈正相關，提示Girdin高表達可促進宮頸癌新生血管的形成，從而促進癌細胞的增殖、侵襲及轉移。內皮細胞移行是組織血管再生最主要的一環。Girdin廣泛分布于內皮細胞和血管平滑肌細胞中，是出生后血管形成不可或缺的蛋白，在細胞遷徙和重組肌動蛋白骨架中起著關鍵作用，提示Girdin可能與血管生成相關。

綜上所述，Girdin與宮頸癌血管生成之間具有較好的相關性，提示Girdin在宮頸癌的血管生成中起重要作用，但其具體的作用機制，尚需深入探究，以期為宮頸癌的抗血管生成治療提供新的認識。