地蜂子免疫作用的藥理研究

陸麗 曹紅九

地蜂子為薔薇科委陵菜屬植物三葉委陵菜及其變種中華三葉委陵菜的干燥根莖，性狀根莖呈紡錘形、圓柱形或啞鈴形，微彎曲，表面灰褐色或黃褐色，粗糙，有皺紋和突起的根痕及須根，頂端有葉柄殘基，被柔毛。質堅硬，不易折斷，斷面顆粒狀，深棕色或黑褐色，中央色探，在放大鏡下可見白色細小結晶。因外形酷似蜜蜂，故名地蜂子[1]，其味甘、澀， 性涼， 具有清熱、解毒、止痛、止血等功效， 主治腰痛、胃痛、痢疾、腸炎、牙痛、毒蛇咬傷、燒燙傷、跌打損傷等[2]，療效確切。主要分布于湖北、江西、安徽、江蘇等地，資源極為豐富，有很大的藥用開發應用價值[3]，有關地蜂子免疫作用的實驗研究文獻報道稀少， 筆者對湖北恩施山叢林中的地蜂子進行了免疫作用的實驗研究，現將研究結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 清潔級昆明種小鼠40只，體質量（20.0±2.2）g，雌雄兼用，由華中科技大學同濟醫學院提供。

1.1.2 地蜂子提取液的制備 購自恩施藥材公司地蜂子。水提煎液：用水煎煮3次，過濾濃縮成1 g/ml的溶液即得水提煎液；醇提液：取地蜂子粉碎后用10倍量80%乙醇浸漉回流提取3次，經壓縮除去乙醇制成1 g/ml的醇提取液。

1.1.3 試劑 醋酸潑尼松（Prednisone Acetate，三九同達藥業有限公司產品）

1.1.4 儀器 TG328A型電子分析天平（上海上平儀器公司生產）；島津UV-754型紫外可見分光光度計；RE-52型旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠產品）；F6/10 超細勻漿機（上海流體機械制造有限公司產品）。

1.2 實驗方法

1.2.1 小鼠碳粒廓清實驗[4-5]清潔級昆明小鼠40只（雌雄各半），小鼠用藥等效劑量按成人臨床日用量與體質量折算系數比，隨機分為水提液低劑組（25 g/kg）、醇提液高劑組（50 g/kg），生理鹽水空白對照組，醋酸潑尼松陽性藥物組（20 mg/kg），每組各10只，共四組。灌胃給藥，各組實驗動物均按0.15 ml/10 g體質量每日灌胃1次，連續給藥7 d。末次給藥1 h后，給每只小鼠尾靜脈注射一得閣墨汁0.5 ml/100 g，并于1 min和5 min分別從眼眶靜脈叢中用肝素濕潤過的尖嘴吸管吸取血液20 μl，加入2 ml的0.1%Na2CO3溶液中，采用754型紫外分光光度計在650 nm波長處比色測定t1、t5的吸光度值，校正零點后計算廓清指數K值。然后采用頸椎脫臼法解剖取出其脾、肝和胸腺，用電子天平精密秤稱其濕重計算各組小鼠的吞噬指數、胸腺指數、脾指數以及廓清指數。公式：

（1）吞噬指數α=體質量/（肝重+脾重+胸腺重）×k1/3。

（2）廓清指數 K=（logOD1-logOD5）/（t5-t1）。

（3）胸腺（脾）指數=胸腺（脾）重（mg）/體質量（g）。

1.2.2 DNCB致小鼠遲發型超敏反應實驗[6]本實驗清潔級昆明種小鼠40只（雌雄各半），分組方法同小鼠碳粒廓清實驗。同日在各鼠頸背部用7%DNCB的丙酮溶液20 μl致敏，以同一溶液50 μl涂于右耳廓兩面進行攻擊，左耳廓留作對照，連續給藥10天后。24 h后，剪下兩耳，用直徑6 mm打孔器取耳片稱重， 以其差值作為遲發型超敏反應的強度，計算抑制率：抑制率=（1-給藥組兩耳重量差/空白組兩耳重量差）×100%。

1.3 統計學方法

采用SPSS 10.0 統計分析軟件進行數據分析，計量資料以（均數±標準差）表示，兩個樣本均數比較采用t檢驗，多于兩組樣本均數的比較，采用方差分析（ANOVA）；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 地蜂子對小鼠免疫器官的影響

地蜂子水提液低劑組、醇提液高劑組脾臟和胸腺的重量均高于空白對照組，差異具有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 地蜂子對小鼠免疫器官的影響（±s，mg/g）

表1 地蜂子對小鼠免疫器官的影響（±s，mg/g）

注：與空白對照組比較，※P＜0.05

空白對照組 10 5.772±0.885 3.006±0.747水提液低劑組 10 6.055±1.271※ 4.242±0.494※醇提液高劑組 10 6.968±1.773※ 4.240±0.879※醋酸潑尼松組 10 6.646±1.856※ 4.432±0.677※F值 - 3.581 2.764 P值 - ＜0.05 ＜0.05

2.2 地蜂子對小鼠非特異性免疫功能的影響

地蜂子對小鼠非特異性免疫功能的影響，小鼠碳粒廓清實驗，結果見表2。地蜂子水提液低劑組、醇提液高劑組的小鼠的碳粒廓清指數K和吞噬指數α高于空白對照組，差異具有統計學意義（P＜0.05）。

2.3 DNCB致小鼠遲發型超敏反應實驗結果見表3

地蜂子水提液、醇提液均能明顯抑制DNCB引起的小鼠遲發型超敏反應，差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

3 討論

表2 地蜂子對小鼠巨噬細胞吞噬功能（±s）

表2 地蜂子對小鼠巨噬細胞吞噬功能（±s）

注：與空白對照組比較，※P＜0.05

空白對照組 10 0.035 5±0.006 2 5.386 6±0.576 5水提液低劑組 10 0.039 4±0.008 1※ 5.745 2±0.713 3※醇提液高劑組 10 0.045 3±0.007 5※ 6.424 3±0.589 4※醋酸潑尼松組 10 0.038 2±0.005 3 5.593 8±0.683 5※F值 - 2.228 3.169 P值 - ＜0.05 ＜0.05

脾臟是機體最大的免疫器官，占全身淋巴組織總量的25%，含有大量的淋巴細胞和巨噬細胞，是機體細胞免疫和體液免疫的中心[7]。脾臟有三大功能[8]：（1）人體的“血庫”；（2）血液“過濾器”；（3）制造免疫球蛋白、補體等免疫物質，發揮免疫作用。胸腺位于胸腔上縱隔前部。為機體的重要淋巴器官，與免疫緊密相關，是T細胞分化、發育、成熟的場所。可以分泌胸腺激素及激素類物質，其主要功能[9]：產生T淋巴細胞、產生和分泌胸腺素和激素類物質。

表3 各組小鼠遲發型超敏反應比較（±s）

表3 各組小鼠遲發型超敏反應比較（±s）

注：與空白對照組比較，※P＜0.05

空白對照組 10 16.26±5.11 -水提液低劑組 10 10.75±3.94※ 33.6±10.45醇提液高劑組 10 10.43±3.93※ 35.5±11.44醋酸潑尼松組 10 11.27±3.72※ 29.5±12.43 F值 4.144 22.93 P值 ＜0.05 ＜0.05

人之生命雖源于腎精， 但脾臟、胸腺作為“后天之本”， 是人體主要的免疫系統[10]，內傷脾胃，必暗傷壽數[11]。若脾臟、胸腺功能下降，則血氣不足， 免疫力下降[12]，若再外感六淫之邪，病變乃生。有研究表明地蜂子分離中得到的化合物黃酮、三萜及甾體類化合物中具有抗炎、鎮痛、抗病毒、抗氧化等功效[1]，其抗炎鎮痛作用尤為明顯，對急性炎癥和亞急性炎癥均有明顯地抑制作用[2]。本實驗結果中地蜂子水提液、醇提液脾臟和胸腺的重量均高于空白對照組，差異具有統計學意義（P＜0.05），表明地蜂子可增加免疫器官的重量。蜂子水提液、醇提液可提高小鼠碳粒廓清K值及α值，小鼠的碳粒廓清指數K和吞噬指數α均高于空白對照組，差異具有統計學意義（P＜0.05），表明地蜂子具有增強單核巨噬細胞吞噬功能的作用，可增強小鼠的非特異性免疫功能。地蜂子水提液、醇提液均能明顯抑制DNCB引起的小鼠遲發型超敏反應，差異具有統計學意義（P＜0.05），這可能與T淋巴細胞增殖成致敏淋巴細胞被抑制有關。

綜上所述，地蜂子能顯著增強單核巨噬細胞的吞噬功能，能明顯抑制遲發型超敏反應，從而增強其免疫功能的作用，有效促進機體的免疫功能，增強體質，預防疾病發生。地蜂子資源極為豐富，藥用廣泛，價值有待進一步深入研究與開發。