強直性脊柱炎髖關節韌帶組織培養模型的建立及腺病毒轉染的實驗研究*

李虎 李儒軍 曹宸喜 王白成,2 林劍浩 陶可,3**

（1.北京大學人民醫院骨關節科關節炎診療中心，北京100044；2.北京大學醫學部，北京100191；3.德國洪堡醫學院實驗骨科研究所，薩爾D-66424）

強直性脊柱炎（ankylosing spondylitis,AS）是一種與炎癥緊密相關的慢性進行性結締組織疾病，以往研究證實，肌腱附著點異常骨化是其病變基礎，成纖維細胞在致炎性因子作用下的成骨轉化在AS病理性骨化病程中起重要作用[1-4]。

已有研究顯示，成纖維細胞經過連續的二維傳代培養后，細胞間由于缺乏有效的信息聯絡、缺乏細胞外基質的力學刺激和空間支撐及細胞生長的常規培養瓶硬度明顯高于細胞外基質等原因而導致細胞出現明顯“去分化”現象，細胞形態及細胞功能發生明顯變化，可觀察到細胞極性顯著增多、細胞增殖與分泌等能力降低。因而，傳統的二維培養條件不能滿足重現細胞在體的真實生存環境[5-11]。為了解決以上問題，本研究擬通過構建和比較AS韌帶組織體外原位（in situ）、AS韌帶成纖維細胞二維體外（in vitro）及三維水凝膠體外（in vitro）培養模型，并用腺病毒轉染修飾以上3種模型，旨在探索更適合的模擬AS韌帶組織體內生存狀態的體外培養模型，為AS發病機制及基因治療的深入研究提供最佳的模型選擇。

1 材料與方法

1.1 主要材料

DMEM培養液、Opti-MEM?、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA、PBS等試劑均購于Gibco公司，人胚胎腎293T細胞、重組5型腺病毒-半乳糖苷酶基因（rAd5-lacZ）等為本實驗室保有，Ⅱ型膠原酶、HEPES（Sigma公司），限制性內切酶Xba1、PacⅠ、BamH1和EcoRⅠ等（Rothe公司），X-gal染色試劑盒（Rothe公司），IL-6和TNF-α的ELISA試……