新橙皮苷對破骨細胞分化影響的實驗研究▲

譚 楨 張 丹 程建文 李曉峰

(1 廣西醫科大學第二附屬醫院骨科，南寧市 530007；2 廣西醫科大學第一附屬醫院麻醉科，南寧市 530021；3 廣西醫科大學第一附屬醫院創傷骨科手外科，南寧市 530021)

骨重建包括骨形成和骨吸收兩種相互平衡的過程，分別由成骨細胞和破骨細胞調控[1]。破骨細胞的過度作用導致骨吸收增多，打破骨形成和骨吸收的平衡，將引起如骨質疏松癥等疾病，破骨細胞在這類疾病中的作用非常關鍵[2]。

骨保護素/核因子-κB受體活化因子配體/核因子-κB受體活化因子(OPG/RANKL/RANK)通路與破骨細胞的形成和分化密切相關[3]，通過RANKL/RANK信號的刺激，促進破骨細胞分化[4]。有研究表明，柚皮苷具有抑制破骨細胞分化及抗骨質疏松的作用[5]。新橙皮苷是一種枳實提取物，與柚皮苷均為黃酮類化合物[6]，具有保護心血管系統、抗腫瘤及抗炎等作用[7]。但有關新橙皮苷對破骨細胞作用的研究仍較少。我們通過體外實驗發現，不同濃度的新橙皮苷對破骨細胞的凋亡率及活力無影響，但是能抑制破骨細胞的分化，且具有時間依賴性。現將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 α-MEM液和胎牛血清購自澳大利亞TRACE公司，GST-rRANKL購自澳大利亞西澳大學分子生物學實驗室，新橙皮苷(純度>98%)購自成都曼思特生物科技有限公司。

1.2 破骨細胞凋亡實驗 將RAW264.7細胞種植至含有胞分化培養基的6孔培養板內，細胞培養過夜。第二天更換培養基，將不同濃度的新橙皮苷加入培養孔中，濃度分別為0 μM、1 μM、2.5 μM、5 μM、10 μM和20 μM，孵育細胞24 h。用PBS洗滌兩次后收集細胞，用0.5 mL Annexin V Binding緩沖液重懸細胞以及Annexin V-PE液染色細胞懸浮液。在……