多成分藥物序貫代謝方法用于川芎水煎液多成分不同階段吸收代謝分析

閆秀國

山東省東營市東營區六戶鎮衛生院，山東東營 257083

多成分藥物代謝主要由并發代謝、序貫代謝以及多重代謝等三個部分組成，其中序貫代謝是中藥多成分代謝研究的主要內容[1]。中藥生物藥劑學分類系統主要以多成分為整體，并且注重每個成分與其他成分之間的關系和影響，在實驗中加大對成分吸收、代謝的研究[2]。川穹是傳統的中藥材料，對川穹的多個成分的序貫過程進行了研究，該次研究在該院于2017年8月應用了液質聯用技術聯合封閉腸環法對川穹的多個成分進行了研究，報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

美國賽默飛世爾科技公司生產的Theremo液質聯用系統，主要包括自動進樣器，高效液相色譜儀，柱溫箱，DAD檢測器，質譜儀，二元泵等進行數據處理和分析；北京中興偉業儀器有限公司生產的電熱恒溫水浴鍋[3]；德國Sigma公司生產的1-15PK離心機；其林貝爾儀器制造公司生產的QL-901漩渦混合機；北京賽多利斯儀器有限公司生產的電子分析天平；昆山超聲儀器有限公司生產的超聲波清洗器；保定蘭格恒流泵有限公司生產的蠕動泵。川穹的干燥根莖，對照品：成都普菲德生物技術有限公司生產的藁苯內酯、阿魏酸、洋川芎內酯I、洋川芎內酯A以及正丁基笨酞，北京百靈威有限公司生產的1-氨基苯并三唑，Fisher公司生產的甲醇，杭州娃哈哈集團有限公司生產的娃哈哈純凈水[3]。SD大鼠，體重300 g，雄性，由北京實驗技術有限公司提供，將大鼠飼養于北京中醫藥大學動物實驗室，將大鼠喂養至1周以上，大鼠自由進食和飲水。

1.2 方法

1.2.1 溶液配制 ①K-R營養液配制：取7.8 g氯化鈉，0.37 g氯化鈣，0.32 g磷酸二氫鈉，1.4 g葡萄糖，0.35 g氯化鉀，1.37 g碳酸氫鈉，0.02 g氯化鎂，在其中加入蒸餾水定容至1 000 mL，調節至pH 7.4[4]。②川穹水煎液制備：取出100 g川穹飲片，將其置于圓底燒瓶中，加入去離子水（總量：1 000 mL），充分浸泡1 h后，應用冷凝回流裝置提取1.5 h，隨后過濾。向圓底燒瓶中加入100mL去離子水，回流1h，過濾提取液[5]。將提出液合并，經水過濾后使用K-R溶液進行定容得100 mL，將定容液制成灌腸溶液，取蒸餾水+適量水提取液制成濃度為10 g/L的溶液，使用濾膜過濾，將最后得到的液體進行液質分析處理。

③對照品配制：取適量藁本內酯、阿魏酸、正丁基苯酞、洋川芎內酯I樣品放置于10 h量瓶中，使用甲醇溶液稀釋至濃度為10 mg/L的溶液，隨后進行液質分析處理[6]。

1.2.2 實驗方法 ①腸道菌代謝研究：選取10只SD大鼠，在12 h內禁食，并且自由飲水，將大鼠分為兩組，其中實驗組2只，供血組8只，在大鼠腹腔內麻醉藥物進行麻醉處理，于實驗組大鼠腹部取動脈血，將血液放置于肝素離心管中，進行保溫處理，將藥液注入大鼠腸腔，當藥物到達腸道末端后，進行結扎處理，同時結扎靜脈，收集腸道內藥液。無腸道菌實驗手術與有腸道菌實驗方法相同，實驗過程持續2 h，將收集到的血液放置于離心管中，離心10 min(4 000 r/min），在甲醇中加入上清液，過濾膜，最后進行液相分析處理[7]。

②腸壁酶代謝研究：應用無腸均實驗手術，在多成分藥液中加入1-氨基苯并三唑以及CYP450酶抑制劑，隨后將藥液注入腸道循環，1 h后在腸系膜中收集靜脈血，處理方法同上[8]。

③肝代謝研究：肝代謝后藥液中的多個成分進入血液系統中，肝代謝實驗應用了封閉腸環法，將川芎藥液封閉于結腸內，不需要結扎靜脈和供血，在1 h后取10 mL靜脈血，樣品處理同上[9]。

2 結果

在前期實驗中，結果已經證實了川穹的多個成分穩定存在于人工腸液和胃液中，因此應用液質聯用技術能夠研究川穹多個成分在腸道菌群、腸壁、肝臟等部位的序貫的代謝、吸收情況，見表一。

表1 血漿樣品中川穹成分的存在情況

3 討論

中藥學中藥劑的分類較為廣泛，且中藥中有較多成分，并且每種成分均會受到其他成分的影響，因此在中藥代謝發展中應該逐漸加大對代謝、吸收的研究，將生物藥劑學的分類系統作為腸滲透的主要指標。中藥在人體中吸收之前，需要先進行消化酶、消化液、腸道細菌酶、自由基反應，隨后進行生物轉化，中藥在經過胃腸道膜時，也有可能被上皮細胞中的藥物代謝酶進行轉化，在中藥生物藥劑分類中哪些因素因素是引起腸滲透反應的重要機制，需要進行重點研究，該次研究中采用多成分藥物代謝序貫法進行研究，主要闡述了重要生物藥劑分類系統中的腸滲透評價。多成分藥物面對多個靶點產生作用后，多成分藥物開始發揮其藥效，這些藥物成分在達到相應的靶點，完成代謝過程后，即開始產生療效，因此臨床上已經將多成分藥物的代謝過程作為一個研究重點。目前臨床上對單一藥物成分代謝的研究已經較為成熟，也取得了一定的成果，但是臨床上針對兩種成分以上的代謝作用的研究較為少見，且該次研究主要堅持多種成分藥物測定研究的原則，按照口服藥物的消化過程，從而開展多成分藥物代謝的主要途徑。消化酶代謝以及消化液代謝是分別在人工腸液以及人工胃液的酸堿性環境下，觀察多成分藥物是否發生轉化和代謝。在腸道菌群的代謝情況下，需要對比腸道壁細胞代謝情況下的多成分藥物代謝情況，在肝代謝作用下，研究需要對比腹主動脈血以及肝門靜脈血的成分差異，從而合理闡述肝代謝情況，在上述肝代謝、腸壁代謝、腸道菌群代謝以及消化酶、液代謝的四個過程中，應該在時間、空間上保持連續性，因此將此種研究命名為“序貫代謝”。

在多種成分藥物代謝中，主要由并發代謝、序貫代謝以及多重代謝組成，川穹是一種傳統的中藥，在應用高效液相色譜法對川穹的多個成分進行研究中，川穹多成分的代謝轉化種類較少，而原型吸收種類較多。在本研究基礎上還應用了液質技術，將定性成分進行分類，主要闡述了各種代謝的序貫過程，并且選出了以吸收為主的成分作為中藥生物藥劑中評價腸滲透的主要成分。

通過實驗可知，3-羥基丁基苯肽、洋川芎內酯G、洋川芎內酯F、洋川芎內酯I、洋川芎內酯J、阿魏酸等成分能夠由血液吸收，并在序貫代謝的各個階段停止代謝，因此可在中藥生物藥劑系統合理的評價腸滲透性質[10]。洋川芎內酯Q、洋川芎內酯A、新蛇床內酯、Z-藁本內酯、E-藁本內酯、正丁基笨酞等成分不存在于肝門靜脈中，因此不能夠作為評價腸滲透性質[11]。洋川芎內酯H可以以原型吸收，并在肝部位發生代謝，因此可評價腸滲透性質，此成分在吸收原型化合物以及肝代謝轉化中較為復雜，只能夠作為評價腸滲透的次選方案[12]。洋川芎內酯M能夠在腸道菌群中發生代謝反應，此成分吸收情況較為混亂，難以找到有效的實驗方法，因此不適合作為中藥生物藥劑分類中評估腸滲透性質的主要成分[13]。

通過研究川芎多個成分的序貫代謝過程，能夠系統性、完整性的評估多個成分的代謝、吸收情況，多成分代謝、吸收在臨床上是中藥用藥的關鍵。隨著近些年來腸道代謝受到了越來越多人的關注，多成分藥物在腸道、肝部吸收代謝也顯得越來越重要。因此在研究過程中，應該堅持實驗原則，并且注重過程的連續性和整體性，讓實驗結果更具科學性。