地中海貧血產前基因診斷回顧性分析

朱麗秀 賴曉蘭 林燁 湯一榕 陳琦 陳仁利 宋一凡 唐寶佳

【關鍵字】地中海貧血；產前；基因診斷；回顧性分析；突變；并發癥

地中海貧血是一種南方常見的單基因遺傳疾病，可以分為α型和β型地中海貧血這兩種類型[1]。據統計，廣東省攜帶α地中海基因的概率為8.53% ，而β型地中海貧血基因攜帶概率為2.54%[2]。對于重型α地中海貧血的患者也被稱為是水腫胎，大多會在妊娠晚期死于子宮中，即便能夠妊娠到十月也會出現短時間內死亡，而且妊娠婦女會合并多種并發癥，包括產后大出血，高血壓疾病，胎盤早剝等。因此，有必要進行產前診斷，能夠有效預防重型地中海貧血患者的出生，是當前減輕疾病負擔的主要方法。在本研究中通過對某醫院進行產前診斷的1 500例α型地中海貧血患者以及650例β型地中海貧血患者的胎兒進行產前基因診斷，具體情況如下所示。

1 研究資料和方法

1.1 一般資料

在本研究中，我們通過對2016年1月—2019年1月在本院產前基因診斷進行地中海產前基因診斷的產婦，在產前基因診斷前需要明確夫妻雙方的基因型，其α型地中海貧血產前診斷患者共計1 500例，β型地中海貧血產前基因診斷共650例。基因前診斷可以選妊娠中，不同于14周行絨毛穿刺活檢，16周之后可以進行羊水穿刺，在產前診斷中穿刺手術能夠排除母體組織污染，同時需要抽取母親的2 mL外周血。

1.2 研究方法

采用DNA提取試劑盒，按照試劑盒的說明書完成DNA提取，采用復合熒光標記排除絨毛，羊水，組織污染。排除母體污染后完成相應的基因檢測。在進行α型地中海貧血經檢測過程中采用單管四PCR反應檢測三種α珠蛋白基因，常見基因缺失性為--SEA，-α3、7，-α42。對于父母一方和雙方存在突變的患者，可以采用裂隙PCR結合點雜交的方式，完成點突變檢測。對于β型地中海貧血經檢測過程中可以采用PCR和點雜交的方法檢測人體中常見的17種β型地中海貧血，基因突變對于罕見突變可以采用DNA測序的方式完成基因診斷[3]。

2 研究結果

鑒定母體污染可以利用復合熒光標記以及血紅蛋白電泳的方式[4]，對采集的產前基因診斷樣本中，發現有3例絨毛標本存在中到重度母體組織污染的問題，不能進行產前基因診斷，最終符合標準的有2 150例標本，能夠排除母體組織的污染，被列入本次研究范圍中。

在1 500例α型地中海貧血基因診斷胎兒中，診斷重型胎兒水腫共計800例，312例靜止型、164例輕型、224例中間型。所有的胎兒為水腫胎的妊娠，且在診斷后1周內完成終止妊娠。針對β型地中海貧血基因檢測結果來看，在對650例β型地中海產前基因診斷，其中患兒診斷中重型β地中海貧血患兒共計174例，輕型為176例，中間型為300例，其中有3對夫婦一方β型地中海基因為罕見突變，因此在產前診斷過程中還需要完成DNA測序，測序結果檢測中表明有2例突變IVS-II-2以及1例突變CD6，其余為常見突變基因型IVS-II-654/βA，所有的胎兒為重型β地中海貧血的妊娠在診斷1周后停止妊娠。通過基因檢測，能夠為產前診斷做準備。

針對中孕期（17～22周）進行羊水穿刺以獲取胎兒細胞，通過基因檢測明確胎兒是否存在α/β珠蛋白基因的缺失或者突變及類型，進而有效防止重型地中海貧血癥或畸形患兒的出生。

3 討論

在重型地中海貧血產前基因診斷過程中取材需要通過母體，因此可能會從一定程度上導致母體組織出現污染，進一步會影響產前基因診斷的準確性[7]。在本研究中，可以通過利用復合熒光標記STR技術來完成母體污染鑒定，該方法具有一定的可靠性和準確性。由于對于我國南方來說，很多地區為地中海貧血高發期，其中α型地中海貧血其主要是由于大片段基因缺失導致的，其中常見的三種基因缺失類型為大部分的分患者可以采用PCR的方式進行診斷，然而不能忽視出現點突變的[8]。α型地中海貧血癥狀，由于點突變引發的血紅蛋白H病貧血癥狀相比缺失導致的血紅蛋白病變程度更為嚴重，因此在產前基因診斷中需要明確夫妻雙方的基因型，避免點突變α型地中海患者被漏診[9]。當夫婦雙方存在點突變時，需要結合PCR，PDR等多種方法進行共同分析。對于β型地中海貧血來說，主要是由于部分核苷酸缺失或者插入導致突變的。目前研究發現，β型地中海基因突變已超過兩百多種，我國很多人β型地中海基因突變有34種，然而不同的地區人群有各自基因突變類型，利用披PCR和DNA測序方法，可以一次檢測17種人體常見基因突變，而且該方法在國內遺傳實驗室中已經被實現廣泛應用[10]。對于一些罕見疾病來說，應當同時結合PCR，PDR，基因測序的方法進行共同分析診斷，防止出現重型β地貧地中海貧血患者的漏診問題，進一步說明在產前檢查過程中對于地中海貧血篩查應當高度重視，是否存在β型地中海貧血，而采用常規的PCR方法無法檢測到突變者，因此需要進行DNA的測序分析，防止出現罕見突變β型地中海貧血患者漏診。在本研究中通過測序檢出兩種突變類型，分別是1例突變IVS-II-2以及1例突變CD6，其改變的是第六位密碼子，將谷氨酸轉變為甘氨酸，形成突變的血紅蛋白，這種突變主要發生在黑色人種身上。而另一種突變目前相關報道較少。

羊水或者臍血穿刺，穿刺后得到標本中都是直接的胎兒的遺傳物質，根據這個去做胎兒的染色體分析或者基因檢測，這個準確性是目前最高的，是“金標準”[11]。但是它的劣勢在于，都需要用細針穿過子宮肌層取得胎兒的遺傳物質，穿刺的過程都存在一定的對胎兒損傷的風險。

通過地中海貧血產前診斷能夠從一定程度上減少重型地中海貧血患兒的出生，以及減少水腫胎患兒出生，進一步對于指導優生優育，減少圍生期過程中并發癥的產生具有十分重要的作用[12]。在本研究中，通過分析地中海基因檢測的經驗，能夠為進行基因遺傳咨詢和產前診斷起到重要的指導意義。