長沙縣地區地中海貧血篩查與基因診斷結果分析

楊牡丹 賀丹

410100長沙縣婦幼保健醫院，湖南 長沙

地中海貧血(TM)是一種較為嚴重的遺傳病，主要是由于珠蛋白基因的缺失或點突變，抑制蛋白鏈的合成所致。雖然輕型TM 不會影響正常發育和日常生活，但會引起遺傳性危害，而中間型及重型TM不僅會給家庭帶來重大的經濟和精神負擔，也會明顯影響患兒生長發育。產前診斷是阻止重癥患兒的有效手段[1]，產前篩查及基因診斷是目前控制TM的有效措施。而開展產前診斷是了解和掌握管轄范圍內出現TM的概率和相應的基因類型。對2016年12月-2018年11月在我院進行產前篩查及基因診斷的資料進行回顧性分析，旨在掌握我縣TM發病情況。

資料與方法

2016年12-2018年11月在我院進行地中海貧血篩查及基因診斷標本18 500例，年齡20～38歲，平均32歲。

方法：①篩查：嚴格按照采血規范，抽取2 mL EDTA K2血常規管，采用全自動高壓液相毛細管電泳儀進行檢測，相關指標作為地中海貧血的初步篩查依據。②基因檢測：對于初步檢測為陽性的孕婦，收集夫婦血樣或孕婦孕期在B 超引導下抽取羊水或臍血，7 d 內送至上級醫院或華大基因研究公司地貧基因診斷。高通量測序(NGS)采用Magen 核酸提取試劑盒進行DNA 提取，利用質量值和深度對SNP和InDel進行過濾得到變異結果。

基因檢測指標：①α-地中海貧血基因采用缺口PCR，即gap-PCR 方法診斷，主要檢測SEA、3.7 和4.2 三種缺失型突變。②β-地中海貧血基因采用PCR結合反向點雜交作為診斷依據，主要檢測常見17種點突變。

結 果

初步篩查陽性率：18 500 例孕婦共檢出地中海貧血表型陽性1 427例，陽性率為7.71%。

基因診斷：對地中海貧血表型陽性進一步經基因篩查，陽性517 例，攜帶率為2.79%，其中α型251 例(48.55%)。基因類型：①--SEA/α α 94 例(37.45%，標注型)；②--SEA/-α3.7 10例(3.98%，中型)；③--SEA/-α4.2 58 例(23.11%，標注型)；④αα/-α3.7 51 例(20.32%，靜止型)；⑤αα/-α4.2 38 例(15.14% ，靜止型)。β型 266 例(51.45%)，基因類型：①CD41-42 109 例(40.98%)；②IVS-Int654 95 例(35.71%)；③CD17 40 例(15.04%)；④CD43 22 例(8.27%)。

討 論

我國地中海貧血發病集中在長江以南，以廣東、廣西、貴州、四川、湖北、湖南等省為高發地帶[2]。本病以α地中海貧血及β地中海貧血最為常見。輕型地中海貧血臨床癥狀不明顯，容易漏診、誤診，而重型患者貧血嚴重，往往需輸血維持生命，患兒生命脆弱。由于危害重大，對其研究從未止步。了解發病機制才能從本質上加以認知，從而制定有效預控措施。①珠蛋白基因缺失和突變：珠蛋白基因分為α珠蛋白基因簇及β珠蛋白基因簇，其在紅系發育過程中具有較高的紅系組織特異性和發育階段特異性，若此兩類基因發生缺失或突變，便會導致相應貧血疾病的發生。縱觀國內外近年來的研究，對地中海貧血發生的機制主要集中在珠蛋白基因上，并發現α地中海貧血基因突變類型有約46種點突變和35種缺失突變，而β地中海貧血基因有約186 種突變類型，主要是點突變[3-4]。②表觀遺傳：表觀遺傳可提供時間、地址、方式三種信息的遺傳指令，其遺傳可不改變DNA 序列下進行。國內外諸多研究表明，多種遺傳性疾病與表觀遺傳有關。③DNA 甲基化：研究發現，DNA 甲基化也是導致基因失活的主要機制。動物實驗表明，DNA 甲基化修飾與類珠蛋白基因表達調控有關[5]。

本研究中，18 500 例孕婦中共檢出地中海貧血表型陽性1 427例，陽性率為7.71%，再次經基因診斷地貧攜帶517例，攜帶率為2.79%，低于文獻報道的廣東(8.3%)、廣西(15.2%)[6-7]，說明地中海貧血存在地域差異。雖然本研究攜帶率低于鄰近省，但對于一個人口大省的湖南來說，攜帶總數仍是個大數目，不可小覷，產前診斷及干預措施仍不可懈怠。本研究中α地貧及β地貧所占比例無明顯差異，說明我地區地貧類型未出現明顯改變，今后預防措施依舊以這兩類為主。α地中海貧血中標準型最為常見(60.56%)，以--SEA/αα為主。中型10 例(3.98%)，未出現嚴重型，說明我地區地貧尚可控，這與切實有效的產前篩查工作密不可分。266例β型中常見基因類型為CD41-42，與以往報道一致[8]。

地中海貧血為常染色體單基因隱性遺傳病，與性別無關。通過我院多年統計數據分析，父母為攜帶者，子代地貧攜帶陽性率大于理論值，若父母均為攜帶者，且容易出現中型。復合型地貧(曾出現一孕婦連續兩次懷孕均為中型α地貧胎兒)，考慮缺陷基因具有遺傳規律和遺傳傾向，更容易遺傳給子代。特別是兩個β地貧攜帶者婚配，可能會出現嚴重型β地貧患兒，此類患兒只能通過輸血維持生命，且容易出現相關并發癥，一般壽命不長。因此，通過血液學表型篩查和產前基因診斷，可避免中型和重型地貧患兒的出生，提高出生人口素質。