卵巢上皮性癌中RBM3及CD146的表達與臨床意義

曾丹 華金仁 安云婷

【摘要】 目的：分析總結卵巢上皮性癌中CD146、RNA結合基序蛋白3（RBM3）的表達與臨床意義。方法：選取2018年1-12月50例卵巢上皮性癌組織標本、25例卵巢上皮良性腫瘤組織標本、同期因其他手術治療切除25例正常卵巢組織標本，經免疫組織化學法對所有標本的RBM3及CD146表達水平進行分析。結果：卵巢上皮性癌組織中CD146與RBM3陽性表達率均高于卵巢上皮良性腫瘤與正常卵巢組織（P<0.05）;卵巢上皮性癌FIGO Ⅲ、Ⅳ期RBM3與CD146表達陽性率均高于Ⅰ、Ⅱ期，中低分化卵巢上皮性癌RBM3與CD146表達陽性率均高于高分化，但差異均無統計學意義（P>0.05）。結論：RBM3及CD146參與卵巢上皮性癌的形成，臨床診斷工作中應引起足夠的重視。

【關鍵詞】 卵巢上皮性癌 RBM3 CD146 卵巢上皮良性腫瘤

[Abstract] Objective： To analyze the expression and clinical significance of CD146 and RNA-binding motif protein 3 （RBM3） in epithelial ovarian cancer. Method： From January to December 2018， 50 cases of ovarian epithelial carcinoma tissues， 25 cases of ovarian epithelial benign tumor tissues， and 25 cases of normal ovarian tissues removed due to other surgical treatments during the same period were selected. The expression levels of RBM3 and CD146 in all samples were analyzed by immunohistochemistry. Result： The positive expression rates of CD146 and RBM3 in ovarian epithelial carcinoma tissues were higher than those in ovarian epithelial benign tumors and normal ovarian tissues （P<0.05）. The positive expression rates of CD146 and RBM3 in ovarian epithelial carcinoma tissues FIGO Ⅲ， Ⅳ stage were higher than those in Ⅰ， Ⅱ stage， and the positive expression rates of RBM3 and CD146 in middle and low differentiated ovarian epithelial carcinoma were higher than those in high differentiated， but the differences were not statistically significant （P>0.05）. Conclusion： RBM3 and CD146 are involved in the formation of epithelial ovarian cancer， and should be paid enough attention in clinical diagnosis.

[Key words] Epithelial ovarian cancer RBM3 CD146 Ovarian epithelial benign tumor

First-authors address： Jiangxi Maternal and Child Health Hospital， Nanchang 330006， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.30.037

卵巢癌為一種常見危及女性生命健康的惡性腫瘤，據統計，其發生率逐年升高，其中卵巢上皮性癌最為常見。因卵巢所處位置隱匿，早期確診難度大，多數患者病情確診已處于晚期，導致患者5年存活率僅為30%～40%，威脅著女性生命健康[1]。關于該疾病的診斷方法多樣，但儀器檢測均為侵入性操作，會給患者造成不可避免的應激損傷，而隨著臨床診斷技術發展，臨床提出可采用分子診斷[2]。近些年研究提出，CD146分子、RNA結合基序蛋白3（RBM3）的特異表達與惡性黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌等在內的癌癥疾病發生密切相關，但關于CD146、RBM3表達在卵巢上皮性癌的研究較少[3]。本次研究中，積極分析CD146、RBM3在卵巢癌組織中的陽性表達，用于指導臨床診治。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1-12月本院住院患者50例卵巢上皮性癌組織標本、25例卵巢上皮良性腫瘤組織標本、同期因子宮脫垂手術切除的25例正常卵巢組織標本。納入標準：所有標本經HE染色后，需由兩名經驗豐富的病理醫生共同閱片檢查，符合卵巢上皮良性腫瘤或卵巢上皮性癌診斷標準。排除標準：合并肝腎功能異常、心肺功能異常等嚴重內外科疾病者;嚴重精神疾病、不能配合治療者;術前未接受內分泌、化療、放療治療者。該研究對象知情同意，且經醫學倫理委員會批準同意。

1.2 方法 對各組織上的RBM3與CD146表達，經免疫組化技術定位、定性檢測，主要免疫組化技術實驗步驟：（1）篩選蠟塊。登記每個病例的玻片號，在玻片庫中，找到具體病例玻片，于顯微鏡下篩選最佳適合實施免疫組化玻片，并將所選擇的玻片登記具體的信息。根據登記玻片信息，從蠟塊庫中挑選對應蠟塊，制作組織切片。（2）高壓抗炎修復操作：常規組織切片經二甲苯進行脫蠟處理以及梯度酒精水化處理后，浸泡在蒸餾水中，留作待用。取pH值6.0檸檬酸鹽緩沖液（800～1 500 mL）放入壓力鍋中，大火加熱處理，直至沸騰，脫蠟水化后，組織切片放入耐高溫或不銹鋼切片架上，加入已經沸騰緩沖液中。蓋上鍋蓋，扣上壓力閥，繼續加熱直至噴氣。自開始噴氣計時，1～2 min后，拿開壓力鍋，冷卻到室溫下，將玻片取出，經蒸餾水沖洗2次，用PBS沖洗2次，沖洗時間3 min/次。（3）免疫組化染色步驟：切片脫蠟處理后進行沖洗，安裝固定好塑料欄，并用蒸餾水沖洗。將檸檬酸液加入塑料欄中，之后放入微波爐中進行抗原修復。之后取出冷卻15 min，倒掉檸檬酸液，再次經蒸餾水沖洗，玻片放入到試劑盒畫圈，畫圈后經PBS沖洗。沖洗后，加入過氧化氫，于室溫下進行孵育，孵育時間10 min。PBS至少沖洗3遍后，去掉PBS，將一抗分別加入到增強劑中，于室溫下孵育至少20 min。PBS沖洗3遍后，加入二抗，于室溫下孵育30 min。PBS沖洗3遍后，甩去PBS液，將新調配好的DAB液體加入到每張切片上，PBS沖洗3次，沖洗時間3 min/次。采用自來水或蒸餾水沖洗，利用蘇木素進行復染，采用0.1%鹽酸分化，并用自來水沖洗，PBS沖洗變藍。自來水沖洗，切片經梯度酒精進行脫水干燥處理后，采用中性樹膠進行封片操作。

1.3 觀察指標與判定標準 （1）比較不同卵巢組織中CD146、RBM3的表達。（2）比較卵巢上皮性癌不同FIGO分期中CD146、RBM3的表達。（3）比較卵巢上皮性癌不同病理分級CD146、RBM3的表達。由資深病理醫生采用雙盲法記錄試驗結果，CD146的陽性表現為細胞質或細胞膜顯示為棕黃色顆粒，RBM3染色顯示細胞核出現棕黃色顆粒而判定為陽性細胞。分別對腫瘤細胞染色強度、陽性范圍評分進行評價。染色強度評分：0分無色，1分淺黃色，2分黃色，3分棕褐色[4-5]。陽性細胞染色范圍：于高倍鏡下顯示每張切片隨機選5個視野，染色范圍<25%則0分（-），染色范圍25%～50%則為1分（+），染色強且染色范圍超過75%為3分（+++），（+）～（+++）為2分。染色強度與染色范圍兩種評分相乘之積≥1則為陽性表達。

1.4 統計學處理 采用SPSS 20.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗;計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般資料 50例卵巢上皮性癌標本，黏液性囊腺癌20例、漿液性囊腺癌30例;年齡36～79歲，平均（57.0±6.2）歲;病理分級：高分化15例，中低分化35例;根據國際婦科聯盟（FIGO）標準分期：Ⅰ、Ⅱ期38例，Ⅲ、Ⅳ期12例。25例卵巢上皮良性腫瘤組織標本黏液性囊腺瘤12例、漿液性囊腺瘤13例，年齡27～62歲，平均（56.8±6.0）歲。25例正常卵巢組織標本，年齡35～77歲，平均（56.5±5.7）歲。

2.2 不同卵巢組織中CD146、RBM3的表達 卵巢上皮性癌CD146、RBM3陽性表達率均高于卵巢上皮良性腫瘤與正常卵巢組織，差異均有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.3 卵巢上皮性癌不同FIGO分期中CD146、RBM3的表達 Ⅲ、Ⅳ期的RBM3、CD146表達陽性率均高于Ⅰ、Ⅱ期，但差異均無統計學意義（P>0.05），見表2。

2.4 卵巢上皮性癌不同病理分級CD146、RBM3的表達 卵巢上皮性癌中低分化RBM3、CD1467陽性表達率均高于高分化，但差異均無統計學意義（P>0.05），見表3。

3 討論

卵巢癌為女性生殖系統常見多發的惡性腫瘤，根據其組織來源不同，可分為轉移性腫瘤、生殖細胞腫瘤、性索間質腫瘤、卵巢上皮性腫瘤，其發生率在婦科惡性腫瘤中高居首位，備受臨床重視[6-7]。但因卵巢位置處于盆腔中，再加上其發病過程中相對隱匿，患者病情早期無明顯癥狀，增加早期診斷難度，再加上當前臨床并無特異性強、敏感性高的篩查方法，診斷難度大，多數卵巢癌患者病情確診已經為FIGO Ⅲ、Ⅳ期，而且卵巢癌具有病情早期轉移、化療耐藥以及復發的特點，臨床診治難度大[8-9]。因當前臨床對卵巢上皮性癌的發生機制、轉移機制尚未明確，臨床并無確切有效的疾病篩查方法，為提高疾病的診斷率，臨床需要高特異性、敏感性的生物標記物指導臨床診斷、治療以及預后[10-11]。

CD146是16個外顯子共同組成單拷貝基因，編碼為單鏈跨膜性糖基化蛋白。CD146可通過增強細胞與細胞間、細胞與細胞外基質之間相互作用，促細胞局部聚集、骨架重構，維持細胞形態、侵襲轉移、調節細胞游走等發揮顯著作用[12-14]。而且其還可參與多種病理生理過程，增強細胞間聯系、維持組織形態、細胞間通訊等作用。臨床研究發現，在黑色素瘤、子宮內膜間質肉瘤、子宮內膜癌、尿路上皮癌等多種惡性組織中，CD146均表現為高表達，且與臨床分期高低、病理分級、組織學分化程度等病理特征密切相關，這表明CD146水平與腫瘤發生發展、復發轉移以及轉歸等密切相關[15-17]。這些均表明CD146可以作為卵巢上皮性癌的診斷、靶向治療以及預后的重要評估分子。

RBM3可通過改變細胞中微小RNA水平，而控制蛋白質表達，影響腫瘤病情的發展。而且臨床認為RBM3為潛在原癌基因，分析原因：RBM3表達水平與腫瘤分期相關，這表明RBM3水平影響著腫瘤發生;RBM3沉默會增加G2/M期細胞數量，導致細胞最終凋亡;RBM3可提高血管內皮生長因子mRNA、IL-8、環氧化酶的穩定、翻譯[18-20]。其中mRNA翻譯水平變化在腫瘤發生、細胞轉化中發揮著重要作用，RBM3可與mRNA直接結合，而改變mRNA二級結構，影響核糖體亞基與起始因子的訪問，并調節激酶潛在活性。

本次研究中，針對卵巢上皮性癌檢測CD146、RBM3這兩項分子指標，結果表明，CD146、RBM3指標在卵巢上皮癌組織中陽性表達均明顯高于卵巢上皮良性腫瘤、正常卵巢組織（P<0.05），而且FIGO Ⅲ、Ⅳ期的RBM3、CD146表達陽性率均高于Ⅰ、Ⅱ期，中低分化RBM3、CD146表達陽性率均高于高分化，但差異均無統計學意義（P>0.05）。可能與本研究樣本量較少有關，但這表明RBM3、CD146分子參與卵巢癌發生發展，與上述理論研究內容基本相符，臨床可根據這兩項分子指標對卵巢上皮性癌進行診治，臨床在今后的診治工作中，應對這兩項指標引起足夠的重視。

綜上所述，CD146、RBM3的高表達與卵巢上皮性癌的發生發展密切相關，可用于指導臨床診治的重要參考指標，應用價值顯著。

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（收稿日期：2019-07-01） （本文編輯：田婧）