國產地氯雷他定片的溶出曲線考察

陳承貴，李美芳，龐發根，李玉蘭，王鐵杰

（廣東省深圳市藥品檢驗研究院·深圳市藥品質量標準研究重點實驗室，廣東 深圳 518057）

地氯雷他定（desloratadine）是美國先靈葆雅公司在1988年開發的強力長效三環類抗組胺藥，是氯雷他定主要活性代謝物（去乙氧羧基氯雷他定），對H1受體具有強效和高選擇性的阻斷作用，還具有不依賴于組胺H1受體獨特的抗炎活性和作用機制，主要用于治療過敏性鼻炎和慢性特發性蕁麻疹［1-2］。地氯雷他定是2016年國家藥品評價性抽驗選定品種，劑型包括片劑、分散片、膠囊、干混懸劑和糖漿劑。溶出度是固體制劑的重點評價項目，目前國內外均將該指標作為仿制藥與原研產品比較的重要評價項目。根據其質量標準［3-7］，國內不同標準中溶出度檢查均為小杯法，溶出介質和轉速等條件不盡相同，很難區分國產藥品之間及國產藥品與原研藥品之間的質量差異。依據《國家藥品安全“十二五”規劃》要求，本研究中針對地氯雷他定片開展仿制藥一致性評價，為全面提高仿制藥的質量提供參考。通過研究國產制劑與原研制劑溶出曲線一致性，使各企業對產品自身質量有較全面的了解，為企業提高產品質量提供改進方向與參考。

1 儀器與試藥

儀器：AT 7smart型溶出儀（瑞士 Sotax公司）；XS205DU型電子天平（瑞士梅特勒公司）；ZKT-18F型真空脫氣機（天津市天大天發科技有限公司）；Alliance 2695-2998型高效液相色譜儀（美國沃特世公司）。

試藥：磷酸二氫鉀、無水磷酸氫二鈉、氯化鈉、醋酸、醋酸鈉、鹽酸（分析純，廣州化學試劑廠）；甲醇（色譜純，德國默克公司）；三氟乙酸、三乙胺（色譜純，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；水（實驗室自制）；地氯雷他定對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為100919-200902，純度為 99.7%）；地氯雷他定片（原研片劑，默沙東公司，批號為M021462，規格為每片5 mg）；地氯雷他定片（廠家1，批號為150825，規格為每片5 mg；廠家2，批號為AG20150802，規格為每片5 mg；廠家3，批號為1606030，規格為每片 5 mg；廠家 4，批號為 150501，規格為每片 5 mg；廠家 5，批號 150201，規格為每片 2.5 mg）。

2 方法與結果

2.1 溶出試驗方法

2.1.1 溶出介質

根據《普通口服固體制劑溶出度試驗技術指導原則》及參考日本“藥品品質再評價”工程，采用不同pH的4種溶出介質［8-9］，分別為 pH 1.2鹽酸溶液（取氯化鈉2.0 g，加水適量使溶解，加鹽酸7 mL，再加水稀釋至1 000 mL，即得），pH 4.0 醋酸鹽緩沖液［0.05 mol／L 醋酸溶液 -0.05 mol／L 醋酸鈉溶液（16.4 ∶3.6，V／V）比例混合，即得］，pH 6.8磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀3.4 g和無水磷酸氫二鈉3.55 g，加水適量使溶解，定容至1 000 mL，再稀釋1倍，即得），水；同時增加國內現行標準 2種溶出介質，分別為0.01 mol／L鹽酸溶液和0.1 mol／L 鹽酸溶液，溶出介質均為 500 mL［10］。

2.1.2 溶出條件

依據2016年國家評價性抽驗“地氯雷他定”品種的探索性研究［11］，參照美國藥典 （USP 40-NF 35）中地氯雷他定片各論項下的溶出度項目規定，設置地氯雷他定片原研片劑溶出度條件為槳法，轉速為 50 r／min［10］。

2.1.3 取樣時間

溶出介質pH 6.8磷酸鹽緩沖液和水取樣時間點為5，10，15，20，30，45，60，90，120，150 min，其余 4 種溶出介質下的取樣時間點為 5，10，15，20，30，45，60 min。

2.2 溶出量測定

2.2.1 溶液制備

取樣品6片，按擬訂條件試驗，分別取溶液5 mL，取液，補加同溫度同體積相同溶出介質，取續濾液作為供試品溶液。另取地氯雷他定對照品適量，精密稱定，用溶出介質溶解并稀釋至每1 mL約含10 μg（規格為2.5 mg的每 1 mL約含 5 μg）的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 色譜條件［11］

色譜柱：ZorbaxEclipseXDB-C8柱（150mm ×4.6mm，5 μm），用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：0.5%三氟醋酸溶液（用三乙胺調 pH至6.3）-甲醇（45 ∶55）；檢測波長：240 nm；流速：1.0 mL ／min；柱溫：30℃；進樣量：20 μL。精密量取供試品溶液和對照品溶液20 μL，分別注入色譜儀，記錄色譜圖，見圖1。按外標法以峰面積計算每片的溶出量。

2.2.3 方法學考察

線性關系考察：取地氯雷他定對照品適量，精密稱定，分別加入擬訂的6種溶出介質，溶解并稀釋至每1 mL含0.5mg的溶液，作為貯備液，分別精密量取1.00，2.50，5.00，10.00，25.00，50.00，100.00，200.00 mL，置500 mL容量瓶中，分別加入上述6種溶出介質稀釋至刻度，搖勻，按擬訂色譜條件測定，以對照品溶液質量濃度（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y1=22 745X1-24 003，r=1.000 0（n=8）；Y2=44 373X2-92 808，r=0.999 9（n=8）；Y3=43423X3-83039，r=0.9999（n=8）；Y4=45790X4-19 847，r=1.000 0（n=8）；Y5=44 007X5-30 212，r=0.999 9（n=8）；Y6=44 927X6+2 881.3，r=1.000 0（n=8）。結果表明，6種溶出介質中地氯雷他定質量濃度在1.02～204.20μg／mL范圍內與峰面積線性關系良好。

圖1 高效液相色譜圖

重復性試驗：取地氯雷他定對照品適量，精密稱定，分別用上述6種溶出介質溶解并稀釋至每1 mL含10 μg的溶液，依法測定，重復進樣6次。結果的RSD均小于1.0%（n=6），表明方法重復性良好。

穩定性試驗：取地氯雷他定對照品適量，精密稱定，分別用上述6種溶出介質溶解并稀釋至每1 mL含10 μg的溶液，分別于 0，2，4，6，8，10，18，20 h 時依法進行測定。結果的RSD均小于1.0%（n=8），表明供試品溶液在20 h內穩定性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品分別溶解于上述6種溶出介質，加入相當供試品溶液含量80%，100%，120%的對照品溶液（各3份）考察。結果地氯雷他定在上述6種溶出介質的加樣回收率分別為98.49%，99.81% ，99.50% ，98.82% ，100.18% ，100.52% ，RSD分別為 0.30%，0.50%，0.90%，1.00%，0.80%，0.30%（n=9），表明回收率較好。

2.3 濾膜過濾影響試驗

考察地氯雷他定在6種溶出介質下濾膜對主成分是否吸附，以地氯雷他定對照品分別溶解于上述6種溶出介質，考察濾膜過濾樣品溶液 5，10，15，20，30，35 mL等不同體積的影響。結果在上述6種溶出介質下，濾膜過濾不同體積的樣品溶液均無影響，地氯雷他定峰面積的RSD均小于1.0% （n=6）。

2.4 溶出儀自動取樣系統影響試驗

考察在6種溶出介質下溶出儀自動取樣系統及管路對地氯雷他定主成分是否有吸附或損失，以地氯雷他定對照品分別溶解于上述6種溶出介質考察，徹底清洗AT 7smart型溶出儀，排空所有管路，然后將各種溶出介質溶解的對照品溶液獨自置于AT 7smart型溶出儀溶出杯中，一一考察，中間溶出介質交替時，也需徹底清洗溶出儀整個系統。結果在上述6種溶出介質下，溶出儀自動取樣系統及管路均無影響，地氯雷他定峰面積的RSD均小于 1.0% （n=6）。

2.5 體外溶出評價方法

采用美國食品藥物管理局（FDA）推薦的f2因子法［9］，根據實際情況判斷溶出曲線的相似性。f2相似因子法是非模型依賴性比較法中最具代表性的評價方法，計算簡單，結果可靠，廣泛運用于評價藥物制劑體內釋藥行為的相似性。根據公式（1）計算f2。其中，n為預測的點數，Ri與Ti分別為在t時間點參比制劑與受試制劑的平均累積溶出百分率。f2表示參比制劑與受試制劑體外釋藥行為的相似性，因此稱為相似因子。一般認為，當f2≥50，即可認為受試制劑與參比制劑的體外釋藥行為無顯著性差異；或者仿制制劑與參比制劑在15 min的平均溶出量不低于85%時，也可認為溶出曲線相似。

2.6 溶出曲線研究

原研片劑溶出試驗：初步了解在6種溶出介質下的溶出行為，在溶出介質水和pH 6.8磷酸鹽緩沖液條件下溶出量在60 min內均未達到85%以上，增加溶出時間至150 min，滿足連續兩點溶出量均達到85%以上，且差值在5%以內，以此作為這2種溶出度截止時間點的依據；其余溶出介質基本能在60 min內滿足連續兩點溶出量均達到85%以上，且差值在5%以內，以此作為這4種溶出介質下溶出度截止時間點的依據。詳見圖2 A。

pH 1.2鹽酸溶液下溶出行為：原研片劑在30 min內溶出量呈合理遞增趨勢，其他廠家片劑在15 min溶出較快，拐點明顯，原研片劑在15 min內未達到85%，采用f2相似因子法對其進行評價，結果廠家3的f2=51.1≥50，說明兩者在pH 1.2鹽酸溶液中溶出行為相似。詳見圖2 B。

pH 4.0醋酸鹽緩沖液下溶出行為：原研片劑與受試片劑在15 min內溶出量均未達到85%，采用f2相似因子法對其進行評價，結果廠家4的f2=57.6≥50，說明兩者在pH 4.0醋酸鹽緩沖液中溶出行為相似。詳見圖2 C。

圖2 平均溶出曲線

pH 6.8磷酸鹽緩沖液下溶出行為：原研片劑與受試片劑溶出行為差異性更為明顯，不同廠家的處方、生產工藝、原輔料控制、質量控制等不同，溶出行為顯然會有很大差異，根據FDA研究歸納的BCS分類，地氯雷他定為BCS分類Ⅰ類藥物，即高溶解性且高滲透性藥物，pH的改變影響溶出行為，因此該溶出介質下溶出行為的差異為不同廠家的藥品提供區分。采用f2相似因子法進行評價，顯示廠家3和廠家4溶出行為較相似。詳見圖2 D。

水下溶出行為：溶出行為分歧性較大，區分性明顯，呈現3種情況：第1種溶出過程急劇增加，出現明顯拐點（如廠家2和廠家5）；第2種溶出過程相當緩慢，溶出量較低（如廠家1）；第3種溶出行為和原研片劑較相似，逐步緩量溶出，符合人體吸收要求。詳見圖2 E。

0.01 mol／L鹽酸溶液下溶出行為：觀察溶出曲線，溶出拐點最明顯的是廠家2，原研片劑在15 min內未達到85%，采用f2相似因子法對其進行評價，結果廠家3和廠家 4的f2≥50，說明兩者在 0.01 mol／L鹽酸溶液中溶出行為相似。詳見圖2 F。

0.1 mol／L鹽酸溶液下溶出行為：原研片劑與受試片劑在15 min內均達到85%以上的溶出量，根據《普通口服固體制劑溶出度試驗技術指導原則》中要求，當受試制劑和參比制劑在15 min內的溶出量≥85%時，可以認為兩者溶出行為相似，無須進行f2的比較，詳見圖2 G。

3 討論

3.1 溶出介質選擇

國產地氯雷他定片各規格現行標準中溶出度均采用第三法，各廠家執行標準選定的溶出介質和轉速等條件不盡相同，不能很好地評價各廠家產品質量的優劣。本研究中對溶出方法、溶出條件和檢測方法進行了系統研究，考察了原研片劑和國內5個廠家的片劑在6種溶出介質下的溶出曲線，對抽驗地氯雷他定片的體外溶出了行為做出較為全面的分析和評價［11-14］。

3.2 溶出條件選擇

曾考察小杯法、轉速50 r／min與 75 r／min、不同溶出介質、溶出介質體積250 mL，槳法、轉速50 r／min、不同溶出介質、溶出介質體積500 mL，結果顯示，小杯法雖然提高了溶出藥物的濃度，但與普通杯的槳法相比，其攪拌時產生的剪切應力及一些物理參數有較大的差異，其攪拌程度要比普通杯槳法更劇烈，考慮小杯法通用性不強；同時，參照美國藥典片劑與口崩片、片劑進口標準的規定和地氯雷他定藥代動力學研究結果（地氯雷他定口服后30 min可測得其血漿濃度），對國產地氯雷他定片溶出曲線研究方法選為槳法、溶出介質體積 500 mL、轉速 50 r／min［11-13］。

3.3 溶出樣品檢測方法選擇

前期研究中用紫外分光光度法和高效液相色譜法進行了大量的試驗，結果表明，紫外分光光度法檢測干擾因素較多且難以保證原始數據的完整性，而高效液相色譜法檢測不僅可保證原始數據的完整性，且更合理、準確、高效，可進行大范圍溶出行為的考察［11］。

3.4 f2相似因子法的評估分析

地氯雷他定水溶性差，在水和pH 6.8磷酸鹽緩沖液溶出介質下，更能好反映不同廠家與原研片劑的溶出行為，特別是廠家1的產品差異性最明顯，在相應取樣時間點，其溶出量明顯偏低，提示廠家1產品的處方工藝有待進一步研究。由圖2和f2相似因子法評估結果可知，廠家3與廠家4產品的體外溶出行為與原研片劑完全一致，其余廠家產品與原研片劑在溶出行為上仍有差異，本研究中采用多條溶出曲線來評價地氯雷他定片的內在質量更合理。

綜上所述，體外溶出度試驗是評價口服固體制劑內在質量的一種重要方法，尤其是多種pH溶出介質中的溶出行為，不僅可反映仿制制劑內在品質是否一致，還可提高藥物生物等效性試驗的成功率［12-16］。