TGF-β1在卵巢漿液性腺癌中的表達及其臨床意義

屈曉輝，鄧穎輝

(江西省婦幼保健院病理科，南昌 330006)

卵巢癌為婦科常見惡性腫瘤之一，其死亡率位于婦科惡性腫瘤之首[1]，隨著年齡的增長，發病率明顯增高，嚴重威脅婦女健康，卵巢癌的預后同臨床分期緊密聯系，由于各種因素影響，至今缺乏有效的診斷方法，發現的卵巢癌多數已經處于晚期[2]，存活率仍較低，卵巢癌及早診治能明顯提高患者的生存率，因此早期診斷卵巢癌對于患者預后的改善得尤為重要。

轉化生長因子 β（transforming growth factor β，TGF-β）是細胞生長抑制因子，可促進細胞外基質形成，促進新生血管形成[2]，調節細胞增殖與分化，在腫瘤的發生發展中起重要作用。TGF-β1是一種分子質量為25KD的多肽，是TGF-β在人體內的主要存在形式。我們從病理學的角度，對TGF-β1進行檢測分析，探討TGF-β1在卵巢漿液性腺癌中的表達及其臨床意義，為卵巢癌臨床診斷及治療提供重要參考價值。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 選擇江西省婦幼保健院2010年至2018年間130例各級卵巢漿液性腫瘤手術標本蠟塊（包含卵巢漿液性囊腺瘤40例、卵巢交界性漿液性囊腺瘤40例及卵巢漿液性腺癌50例），以同期卵巢漿液性囊腺瘤標本作為對照，所選病例手術前期未進行任何放化療，相關臨床病理資料完善，病理診斷均明確，排除其他組織學類型。

1.2 試劑 一抗TGF-β1、二抗試劑盒及DAB顯色液均購自福建邁新生物有限公司。

1.3 方法

1.3.1 制作組織芯片 設計7×11點陣的芯片，共77個位點，其中7個點做空白定位（如圖1、圖2）；根據設計將受體蠟塊進行打孔，孔徑大小與供體組織鉆取孔徑大小一致；對供體組織HE切片作形態學觀察并在供體蠟塊上準確標記所需要的靶點；利用打孔儀鉆取靶點組織，每個病例同時鉆取兩塊腫瘤組織，并分別轉移至兩個受體蠟塊相應的孔位上，制成所需的陣列蠟塊；將制成的陣列蠟塊面朝下放入金屬包埋盒中，灌蠟并輕壓蠟塊使組織芯排平，待冷卻后放入65℃烤箱內維持45min；最后將蠟塊從烤箱內拿出，待其冷卻。

1.3.2 免疫組織化學 組織芯片4μm厚切片，采用免疫組化SP法，按產品說明書操作（圖3）。

1.3.3 組織學分級 依據2014版WHO分類系統，將卵巢漿液性腺癌分為高級別漿液性腺癌和低級別漿液性腺癌兩種。

1.3.4 評估標準 鏡下觀察TGF-β1的表達情況，計數細胞漿內有黃色或棕黃色顆粒狀物的陽性染色細胞數，對TGF-β1蛋白表達進行分析，染色強度根據陽性細胞百分比進行半定量分級：陽性細胞率=0為 0級，＜10%為 1級，10%～50%為 2級，50%～80%為3級，＞80%為4級；結果判斷：陽性細胞百分比＜10%為陰性，10%～100%為陽性。

圖1

圖2

圖3

1.4 統計學分析 采用SPSS 19.0統計軟件進行分析處理，組間差異性比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TGF-β1在各級卵巢漿液性腫瘤中的表達TGF-β1在卵巢各級漿液性腫瘤中均有表達，在卵巢漿液性腺癌組表達陽性率為86.0%，顯著高于卵巢交界性漿液性囊腺瘤組（45.0%）和卵巢漿液性囊腺瘤組(17.5%)，差異具有統計學意義（均 P＜0.05)；且卵巢交界性漿液性囊腺瘤組TGF-β1陽性率明顯高于卵巢漿液性囊腺瘤組，差異具有統計學意義(P＜0.05)（圖 4 及表 1）。

2.2 TGF-β1的表達水平與卵巢漿液性腺癌臨床病理參數之間的關系 卵巢漿液性腺癌中，Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ期患者腫瘤TGF-β1的表達陽性率為93.2%，顯著高于Ⅰ期患者TGF-β1的表達陽性率33.3%，差異具有統計學意義(P＜0.05)；伴有腫瘤種植/轉移患者TGF-β1的表達陽性率為93.0%，顯著高于不伴有腫瘤種植/轉移患者TGF-β1的表達陽性率42.9%，差異具有統計學意義(P＜0.05)；不同年齡分布和不同組織學分級的患者TGF-β1的表達水平差異無統計學意義。（表2）

3 討論

腫瘤是在多種因素共同作用下形成的，其發生發展是多種因素影響的復雜過程。卵巢癌以上皮性癌居多，其中卵巢漿液性腺癌是上皮性癌中最常見的病理類型。晚期卵巢癌的治療原則是以手術為主的綜合治療，即術中盡可能切凈腫瘤，為術后化療打下基礎，但對于位于一些重要臟器的轉移灶和一些小轉移灶，術中處理往往比較棘手。因此，為尋求有效的診斷和治療方案，卵巢癌發生、發展及轉移的機制一直是婦科腫瘤基礎與臨床研究探索的重點。

表1 TGF-β1在各級卵巢漿液性腫瘤中的表達

圖4 TGF-β1在各級卵巢漿液性腫瘤中的表達，SP法：A.卵巢漿液性囊腺瘤；B.卵巢交界性漿液性囊腺瘤；C.卵巢漿液性腺癌

表2 卵巢漿液性腺癌中TGF-β1的表達與臨床病理參數的關系

TGF-β(transforming growth factor beta，轉化生長因子β)是一種多功能的多肽類細胞因子，哺乳動物組織中存在3種TGF-β亞型：TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3，其中TGF-β1最為重要。幾乎體內的所有細胞都能產生TGF-β并存在其受體，參與細胞的分化、增殖、轉移、形態的改變以及凋亡等，在機體的免疫調節、細胞生長和分化、腫瘤免疫等發面均起到了重要的作用。人類TGF-β1基因定位于染色體19q3，含有7個外顯子，其5ˊ端序列含有5個調控區：1個類增強子活性區，2個負調控區和2個啟動子區。

通常TGF-β1對正常上皮細胞發揮生長抑制作用，在惡性腫瘤發展過程中，TGF-β1起著雙向調節作用。在腫瘤發生早期，TGF-β1發揮負向調節因子作用抑制腫瘤形成。隨著腫瘤的進展，TGF-β1可通過誘導腫瘤周圍基質環境改變，促進新生血管生成，促進腫瘤細胞浸潤與轉移，抑制宿主免疫系統殺傷腫瘤細胞等方式發揮免疫耐受和免疫逃逸，加劇腫瘤生長與形成[8-12]。

本研究結果顯示TGF-β1在卵巢漿液性囊腺瘤、卵巢交界性漿液性囊腺瘤及卵巢漿液性腺癌中均有表達，且在卵巢漿液性腺癌中呈高表達；與卵巢交界性漿液性囊腺瘤及卵巢漿液性囊腺瘤相比，TGF-β1在卵巢漿液性腺癌組織中的表達水平顯著升高；與卵巢漿液性囊腺瘤相比，TGF-β1在卵巢交界性漿液性囊腺瘤組織中的表達水平亦顯著升高，提示TGF-β1的過表達在卵巢癌的發生發展中起重要作用。

近年較多文獻[3-5]報道TGF-β表達水平的測定對了解乳腺癌、胃癌、肝癌、肺癌等惡性腫瘤進展、判斷淋巴結轉移狀況、術后監測轉移或復發及評估預后等諸方面均有較重要意義[15，16]。

上皮間質轉化（EMT）是惡性腫瘤轉移的先決條件，目前TGF-β1被認為是誘導上皮間質轉化的最重要的生長因子。

在本研究中，我們進一步對卵巢漿液性腺癌患者TGF-β1表達水平與卵巢癌的FIGO分期和癌組織的種植/轉移的關系進行了分析。結果顯示Ⅱ-Ⅳ期卵巢癌患者腫瘤組織中TGF-β1表達水平均高于I期，且卵巢癌組織中TGF-β1的表達水平與腫瘤的種植/轉移密切相關，差異有統計學意義；而卵巢癌組織中TGF-β1的表達水平與病人的年齡分布及腫瘤組織學分級無關，提示TGF-β1的顯著增加發生在卵巢癌晚期，可能是晚期卵巢癌增加的TGF-β1可誘導腫瘤血管生成，從而促進卵巢癌的發展。

TGF-β1表達水平與腫瘤不同臨床分期、腫瘤是否種植/轉移相關，表明TGF-β1表達指數對臨床分期有一定價值，臨床上結合TGF-β1水平的檢測，一定程度上可以對卵巢腫瘤的生物學行為進行評估，并判定其危害性，評估腫瘤的預后情況，反映腫瘤細胞目前的活性狀態。

此外，在一些實體惡性腫瘤研究[6，7]中發現TGF-β的表達有助于誘導腫瘤細胞發展和耐藥性的產生。

綜上所述，卵巢癌患者呈現免疫耐受狀態，TGF-β1表達水平與卵巢癌的發生、發展及種植/轉移密切相關，TGF-β1水平可為卵巢癌的臨床診斷、病情監提供重要的參考價值，檢測TGF-β表達水平對指導臨床治療可能有重要臨床應用價值，并有可能成為卵巢癌控制轉移的靶點。