沙棘油對鼠H22肝癌影響的研究

劉雪梅，張亞婷

（赤峰學院 醫學院，內蒙古 赤峰 024000）

世界上有很多古老的植物，沙棘油就是是其中之一，它起源于我國的青藏高原地區，著名的藏族醫生玉妥·元丹貢布的《四部醫典》記錄了沙棘有化痰、清肺、祛濕、滋陰壯陽的功效，其中數十處還講述了它在脾胃處發揮的作用，而且對燒傷的治療效果也十分明顯.還有記載說沙棘的種子中含有極少量的油質，能夠使人體血液得到相應的補充.沙棘于20世紀70年代被正式列入到中國藥典中，從此成為受中華人民共和國法律保護的藥材，也明確了它成為既能入藥又能保健的寶貴資源.從自然植物沙棘的果實中經過細心挑選、精心提煉得到的沙棘油.其中包括有不飽和脂肪酸、黃酮、各種微量元素、生育酚及5-羥色胺等成分，而且生育酚具有保護皮膚的功效，而且還有能夠促進癌細胞退化的生物活性物質，例如花青素、苦木素、香豆素、5-羥色胺等，這些物質使可能導致癌癥發生發展的某些客觀條件不能發揮作用，從而抑制腫瘤的生長，前蘇聯的研究學者對沙棘的各種成分以及它生物醫學價值做了更多的調查分析，研究表明其活性成份能夠達到200多種，在人類已經發現的植物物種中極為稀有，由此沙棘被人們稱作是神奇的果實、隨之開展了前瞻性的研究，在醫藥方面做出了貢獻，前蘇聯國家政府對此給予大力支持，投入了大量的人力、物力，對此展開了許多臨床相關方面的探討，研究表明沙棘的確具有一定的醫學藥用價值.沙棘油抗腫瘤研究已有成果，如果沙棘油能作為抗腫瘤藥物在臨床廣泛應用，沙棘屬于天然植物，副作用小，成本低，會給廣大患者帶來福利，本實驗通過建立H22細胞瘤小鼠模型探討沙棘油的抗腫瘤作用及機制從而為沙棘開發創造良好的經濟前景提供依據.

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 細胞株:H22腫瘤細胞采購于中科院上海細胞庫.

1.1.2 動物：KM小鼠SPF級.由斯貝福（北京）實驗動物科技有限公司提供并飼養.動物使用許可證：SCXK（京）2011-0004，實驗動物生產許可證：SCXK（京）2011-0004

1.1.3 沙棘油：購于沙漠之花，敖漢沙漠之花飲料有限責任公司位于在赤峰市敖漢旗，在2002年，由聯合國授予敖漢旗“全球環境500佳”的稱號，是全國沙棘生態建設示范縣，有“中國沙棘之都”之美稱.該公司是主要致力于沙棘的一系列產品研發，經過不斷探索，迄今為止擁有了以沙棘汁、沙棘油、沙棘養生茶為主的一套商業體系.在2005年，沙棘系列的部分產品通過過了國家食品質量安全認證（QS150406014519），正式進入銷售市場.而且“沙漠之花”品牌飲品憑借綠色、天然等產品優勢通過十三運組委會層層審查與嚴格篩選，成為內蒙古自治區十三運飲料唯一指定品牌.

1.1.4 注射用生理鹽水

1.2 動物及分組

1.2.1 12只健康昆明雄性小鼠被隨機分成兩組，即生理鹽水小組和治療小組.

1.3 實驗方法

1.3.1 小鼠模型建立：取體重18g左右雄性昆明小鼠12只，將購買的腫瘤細胞3000r離心10分鐘，棄上層培養基，重復離心提純后用生理鹽水將其稀釋至2ml，每只小鼠腋下注射0.2ml1×106的H22肝腫瘤細胞.

1.3.2 將小鼠隨機分成兩大實驗組，即治療小組和生理鹽水小組，每組6只，在相同的環境中，分別給予治療組經過沙棘油浸泡的鼠糧和飲用水，生理鹽水組未經處理過的鼠糧和飲用水.

1.3.3 實驗第21天，將小鼠處死后，取出腋下的腫瘤組織稱其重量，對比其外觀大小，電子表格下進行統計學分析.

1.3.4 交專業病理科室并做切片檢查，顯微鏡下比較瘤組織中血管分布的差異.

2 結果

2.1 瘤體外觀

2.2 腫瘤組織病理切片對比

2.3 統計學分析

表1 統計學分析

3 討論

在很久以前腫瘤這一類疾病已經得到人們的關注.我國的首部字書《說文解字》解釋“瘤”這字的時候說:瘤，腫也.”與此同時“腫瘤是血液聚集形成的”這種說法在當時也備受推崇.而大量的研究表明，血管生成因子是新生血管的關鍵因素，而炎細胞即巨噬細胞為主要的腫瘤細胞其能產生血管生成因子誘導新生血管的產生.因此通過控制腫瘤血管的形成被看作為腫瘤治療的新方向.而腫瘤細胞的惡性生物學行為主要表現在無限性的生長和向周邊組織浸潤和轉移[4]，腫瘤新生血管的形成是腫瘤細胞生長、浸潤、轉移的必要前提.所以說抗腫瘤的基礎是通過抑制腫瘤新生血管的形成.本實驗表明在經過沙棘油浸泡過的鼠糧喂養的小鼠中腫瘤的生長明顯受到抑制，而在喂食沒經過處理的鼠糧的小鼠中腫瘤的生長情況相反，在治療組中對腫瘤新生血管的抑制效果顯著，所以推斷沙棘油阻礙腫瘤的生長的原理是通過抑制腫瘤新生血管的形成發揮作用的.早在20世紀70年代Folkman教授就提出腫瘤的生長和轉移與血管新生過程密切相關[3].戚瑋琳等人在紅景天抑制乳腺癌血管新生的研究中得到結論表明，紅景天提取物是通過抑制癌細胞VEGA（促血管生成因子）表達，從而抑制血管新生[6].與此同時張海英等人也在桑黃靈芝UE-1對腫瘤生長及血管新生的抑制作用的研究中表明桑黃靈芝UE-1具有明顯的抗腫瘤作用，黃靈芝UE-1的抗腫瘤作用很有可能是通過抑制腫瘤血管新生達成的[5].內蒙古赤峰市敖漢旗盛產沙棘，已經有報道沙棘油富含槲皮素等黃酮類物質及維生素C，有抗腫瘤作用.目前臨床上采用的抗腫瘤藥物主要是細胞毒性藥物，這類藥物在殺傷腫瘤細胞的同時具有選擇性差，不良反應大及易產生耐藥的弊端.天然藥物抗腫瘤研究之所以成為新的研究熱點就是因為它在抑制或消滅癌細胞的同時，與細胞毒性藥物相比這些不良反應會大大減少.陳世虎等人在抗腫瘤實驗的調查研究中，分析得出結論，表明沙棘油靜脈聯合乳對CTX抗移植瘤具有增效減毒的作用[1].藥食同源，可以為腫瘤患者減少病痛.本實驗可以為沙棘油的開發與研究提供依據.而韓春卉等人通過大量的實驗研究，結果顯示沙棘油能夠增強小鼠NK細胞的活性，并且可以大大的提高小鼠巨噬細胞的吞噬作用從而發揮抗腫瘤的功效[2].本實驗通過觀察瘤重級病理切片證明沙棘油有一定抑制腫瘤新生血管的形成，即抗腫瘤作用，其詳細的機制究竟是通過影響VEGA從而抑制血管的新生，還是直接作用于癌細胞，或者是通過調節免疫系統間接發揮抗腫瘤的作用尚需要進一步研究.