頭孢地嗪鈉含量和有關物質的測定方法分析

張 爽 蔡迪鳴

（葫蘆島市食品藥品檢驗檢測中心，遼寧 葫蘆島 125000）

頭孢地嗪鈉是常見第三代頭孢菌素之一，其具有較強的免疫功能。據有關資料顯示[1]，頭孢地嗪鈉可使巨噬細胞被激活，促進殺菌率及吞噬活性的提高。該藥物具有抵抗革蘭陰性菌與革蘭陽性菌作用，而且有助于穩定β-內酰胺酶、青霉素酶及頭孢菌素酶等[2]。中國藥典（ChP）及日本藥典（JP）中均記錄了頭孢地嗪鈉[3]。通過JP方法對頭孢地嗪鈉雜質進行分析的過程中，可知頭孢地嗪鈉具有較低的雜質水平，但是雜質數量較多，JP要想采用高效液相-質譜系統（HPLCMS）分析雜志，則需要轉換磷酸鹽緩沖體系，使其以可發揮性的流動相體系呈現出來[4]。本次研究主要針對頭孢地嗪鈉含量與有關物質測定方面進行分析，報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 實驗儀器：Milli-Q超純水系統；WatersAlliance2695 高效液相色譜儀；Platisil 18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱；AT260分析天平；MettlerToledo320pH計。

1.2 試藥：樣品，乙腈，頭孢地嗪鈉對照品（含量90.9%），醋酸銨，甲酸，雜質對照組[頭孢噻肟內脂（L）、7-氨基頭孢烷酸（7-ACA）、頭孢噻肟、頭孢地嗪母核（3-MTA）、去乙酰氧頭孢噻肟（DSF）、頭孢地嗪側鏈酸（MMTA）及去乙酰頭孢噻肟（DF）]。

2 方法與結果

2.1 色譜條件：色譜柱選擇P118（250 mm×4 mm，5 μm），流動相A與流動相B分別是醋酸銨溶液（甲酸調整至pH 3.2，2000 mL水溶解，醋酸銨1.9 g）與乙腈，流速設置為每分鐘1.0 mL，檢測波長及柱溫分別為254 nm和35 ℃；進樣量設置為20 μL。流動相與洗脫程序如下：0～17 min，流動相A與流動相B分別是81%和19%；17～27 min，流動相A與流動相B分別為81%→60%和19%→40%；27～28 min，流動相A與流動相B分別是60%→80%和40%→19%；28～35 min，流動相A與流動相B分別是81%和19%[5]。

2.2 制備溶液

2.2.1 頭孢地嗪鈉供試品溶液：選取適量本品，精密稱量，添加乙腈-水混合溶液，比例為19:81，由此進行溶解，制成0.5 μg/mL溶液，振搖均勻，獲得供試品溶液。

2.2.2 頭孢地嗪鈉對照品溶液：選取適量頭孢地平對照品，精密稱量，添加乙腈-水混合溶液，比例為19∶81，制定0.5 μg/mL溶液，振搖均勻，獲得成品。

2.2.3 測定含量：供試品溶液及對照品溶液進樣量20 μL，分別注入液相色譜儀，將色譜圖記錄，根據外標法對樣品中頭孢地嗪（C20H20N6O7S4）含量進行計算。

2.2.4 檢測有關物質：于100 mL量瓶中置入經過精密量取的1 mL對照品溶液，采用稀釋液進行稀釋直至刻度，稀釋液為乙腈-水（19∶81），振搖均勻，制取溶液為對照溶液；于液相色譜儀中注入20 μL對照溶液，對檢測儀器靈敏度進行調節，確保主成分色譜峰的峰高最低為滿量程的10%，后于液相色譜儀中注入20 μL供試品溶液，將色譜圖記錄下來，頭孢地嗪峰及相鄰雜質峰分離度應與要求相符。如果供試品溶液存在雜質峰，則根據1%自身對照法準確計算。

2.3 方法驗證分析

2.3.1 考察專屬性：為了對本方法能夠對儲存期間即生產期間產生的雜質進行有效檢測，以貯存條件、結構特點及合成工藝等為依據開展分離度考察實驗、強制降解實驗。①強制降解實驗：高溫破壞樣品粉末，溫度設置為60 ℃，紫外光照破壞（10 d，UV254 nm），強酸（10 min，1 mol/L鹽酸溶液），強氧化（15 min，35%過氧化氫溶液），強堿（5 min，0.1 mol/L氫氧化鉀溶液），在上述環境中破壞。結果提示：于氧化條件及堿性條件中，頭孢地嗪降解度提高，于光照環境中，顯著增加了異構體2和MMTA；堿性環境中，極易形成異構體4、異構體3及異構體1；處于酸性環境中，顯著增加了雜質L。強制降解形成的雜質可完全分離主成分。②考察分離度：混合溶解各雜質與頭孢地嗪鈉制成的對照品，溶解后，考察分離度，根據考察本方法的可行性，對生產工藝中形成的雜質進行監測。頭孢地嗪鈉與雜質混合液及頭孢地嗪鈉供試品溶液實驗結果提示，可有效分離各雜質。根據以上實驗結果可知，該方法專屬性較強，可用于檢測頭孢地嗪鈉保存及生產期間有關物質。

2.3.2 測定定量限與檢出限：精密稱量適量頭孢地嗪鈉，通過乙腈-水混合溶液進行稀釋，形成包括0.044，0.13 μg/mL的頭孢地嗪鈉溶液，重復進行33次實驗。計算公式為S/N=3，計算結果如下：0.056 μg/mL為頭孢地嗪鈉檢測限；根據S/N=10對頭孢地嗪鈉定量限進行計算，結果為0.22 μg/mL。

2.3.3 考察線性關系：對頭孢地嗪鈉對照作品進行準確稱量，通過乙腈-水混合溶液進行稀釋，形成包含頭孢地嗪鈉不同濃度的對照品溶液，分別是0.1479、619.7、0.4929、599.4、4.929、505.4、9.858、411.1、24.64、388.2、49.29、306.9、98.58、218.7，橫坐標為濃度C（μg/mL），縱坐標為峰面積A，根據上述二者做回歸直線，回歸方程為A=34352843.7C+9506.5，線性范圍為0.1479～769.2 mg/mL，r=1.0000。

2.3.4 準確度實驗：共稱取9份頭孢地嗪鈉對照品，通過乙腈-水混合溶液分別制取50%、100%和120%溶液。根據2.2.3方法對樣品含量進行檢測。

2.3.5 重復性試驗即精密度實驗：準確稱量50.0 mg頭孢地嗪鈉對照品，將其分為6分，溶劑為乙腈-水混合液，形成0.5 mg/mL溶液，均勻搖晃。將樣品注入至液相色譜儀中，將峰面積記錄，并對頭孢地嗪鈉相應因子進行計算，獲取結果為RSD是0.13%，其中一份進行連續6次計算，將峰面積記錄下來。頭孢地嗪鈉峰面積RSD計算結果是0.2%，結果提示，該方法具有較高的精密度。

2.3.6 溶液穩定性試驗：分別采用流動相溶解頭孢地嗪鈉，將其置于20 ℃環境中檢測，時間分別是80、160、240、320、360、420 min，對每種雜質改變狀況進行考察。結果提示，通過流動相溶解的樣品溶液穩定性較差，其中存在諸多雜質，從整個方面來看，雜質提高大約3.2%。通過乙腈-水及水溶解的樣品溶液穩定性較強，總雜質量改變在0.1%以下。處于流動相中的樣品降解速度明顯，而通過乙腈-水溶解的樣品溶液盡管具有較強的穩定性，但是由于空白峰值的作用，所以需要通過乙腈-水對樣品進行溶解。

2.3.7 耐用性實驗：實驗工具為Gemini18（5 μm，250 mm×4.6 mm）色譜柱，確保每種雜質的分離及保留狀況與Platisil柱相符。

3 討 論

根據本次實驗結果分析，通過高效液相色譜法檢測頭孢地嗪鈉成分具有較高的可行性，而且具有良好的溶液穩定性、耐用性、準確度、精密度、線性及適應性，符合檢測限及定量限檢測要求。