實時熒光定量PCR在兒童肺炎支原體感染中的臨床價值分析

范 新

（遼寧省丹東市第一醫院檢驗科，遼寧 丹東118000）

兒童肺炎是兒科常見的疾病，是導致3歲以內嬰幼兒死亡的常見原因[1]，支原體感染肺炎是肺炎的常見類型，占全部肺炎的20%[2]。本研究采用實時熒光定量PCR檢測兒童肺炎支原體DNA，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2013年4月至2016年6月期間我院收治的382例肺炎患兒，按《諸福棠實用兒科學進行診斷，其中男201例，女181例；0～4歲77例，4～7歲121例，7～10歲占107例，10～13歲占77例；血清標本144份，支氣管灌洗液標本95份，痰液標本74份，胸腔積液標本69份。

1.2 方法：采用實時熒光定量PCR檢測肺炎支原體DNA，儀器為BI-7500型全自動熒光定量PCR儀及配套試劑。向DNA擴增反應管中加入樣本上清液2 μL，離心處理后置于樣品槽中進行擴增，擴增條件：50℃預熱2 min，94℃ 12 s預變性 1個循環，將此作為熒光本底信號，然后94℃ 5 s變性，60℃ 30 s退火及延伸，40個循環后，于55℃采集熒光。PCR的結果用Ct值表示，繪制曲線圖，當Ct值＜30，且增長曲線呈S型判為陽性，否則為陰性。

1.3 統計學方法：采用SPSS19.0統計學軟件進行統計分析，進行t或卡方檢驗，檢驗水準α=0.05，P＜0.05具有統計學差異。

2 結 果

382例患兒肺炎支原體DNA陽性為179例（46.9%），其中男患兒占96例（53.6%），女患兒占83例（46.4%），差異無顯著性（P＞0.05）；0～4歲占28例（15.6%），4～7歲占58例（32.4%），7～10歲占57例（31.8%），10～13歲占66例（36.9%），差異具有顯著性（P＜0.05）。

血清標本肺炎支原體DNA陽性21份（14.6%），支氣管灌洗液標本肺炎支原體DNA陽性90份（94.7%），痰液標本肺炎支原體DNA陽性51份（68.9%），胸腔積液標本肺炎支原體DNA陽性17份（24.6%），差異具有顯著性（P＜0.05）。

3 討 論

肺炎是兒科常見呼吸道疾病，尤以2歲以下的嬰幼兒最為多見，該病易反復發作以及引起一些并發癥，嚴重影響小兒的身體健康及生長發育，據了解，小兒肺炎是導致3歲以內小兒死亡的重要原因。肺炎支原體感染是肺炎的常見病因，資料顯示，在全部兒童社區獲得性肺炎中，由肺炎支原體感染導致的肺炎超過40%[3]。多見于兒童和青少年，除了會引起發熱、咳嗽、氣喘等癥狀，還可能引起肺壞死及一系列肺外并發癥，如心肌炎、腦膜炎等。

肺炎支原體是一種無細胞壁的超濾過性病原微生物，屬于原核細胞中最小的微生物，常常引起性呼吸道感染和原發性非典型肺炎。資料顯示，每隔3～5年，在兒童和青少年中就會流行一次肺炎支原體感染[4]。本研究結果顯示，382例患兒中有179例檢出肺炎支原體DNA陽性，占到46.9%，其中男患兒占53.6%，女患兒46.4%，男女無明顯差異，這與其他報道相符[5]。肺炎支原體感染可發生各個年齡階段的兒童，本研究結果顯示，0～4歲的陽性率為5.6%，4～7歲的陽性率為32.4%，7～10歲的陽性率為31.8%，10～13歲的陽性率為36.9%，發現4歲及以上的兒童陽性率明顯高于4歲內的兒童，可能與4歲以上的兒童開始進行學校學習，社交活動增加，易感染性增加，加之身體素質低下，所以容易發生肺炎支原體感染。在所有標本中，血清標本肺炎支原體DNA陽性率最低，為14.6%，支氣管灌洗液標本的陽性率最高，為94.7%，而痰液標本的陽性率為68.9%，胸腔積液標本的陽性率為24.6%。提示用支氣管灌洗液標本進行肺炎支原體的檢測最為可靠。

綜上所述，采用實時熒光定量PCR檢測兒童肺炎支原體感染實用、可行，其中4歲及以上患兒肺炎支原體DNA陽性的檢出率較高，采用支氣管灌洗液標本最為可靠，血清標本的檢出率最低。