豬流行性腹瀉綜合防治技術的研究

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(1.溫州科技職業學院，浙江 溫州 325006； 2.仙居縣農業局)

豬流行性腹瀉(Porcine Epidemic Diarrhea，PED)是由豬流行性腹瀉病毒(PDEV)引起的以嚴重腹瀉、嘔吐、脫水為主要臨床特征的一種高度接觸性腸道傳染病[1]。首先于1978 年報道于英國，確定其是由一種冠狀病毒引起的疾病。目前該病在世界范圍內廣泛流行，給養豬業造成巨大損失。斷奶豬和成年豬經常發生一過性的腹瀉，而哺乳仔豬，尤其7日齡以內的哺乳仔豬發生腹瀉并死亡，發病率高達100%，病死率平均為50%，最高病死率接近100%，且多數疫情主要發生在中小規模養豬場[3]。

1 材料與方法

1.1發病仔豬 選取出生7日齡以內且腹瀉在12-36 h內的活仔豬，確診為流行性腹瀉感染的仔豬，且實驗室檢測排除豬瘟、高致病性藍耳病毒等其他病原體，病死豬不可用。

1.2健康肉豬 180日齡臨床健康肉豬2頭。

1.3發病仔豬腸組織返飼材料制備 選擇符合1.1條件的發病仔豬。集中統一放血致死，不要將污染面擴大，剖開腹腔，取出仔豬的胃、小腸和大腸，放入干凈的盆中，盆中放入冰塊保持低溫，在盆中選取需要的組織，在此過程中不能使用任何消毒劑。先剪碎選取小腸和大腸,一頭仔豬的內臟加入250 mL預冷藏的蒸餾奶，不含糖奶。用勻漿機將加過蒸餾奶的剪碎樣品制成勻漿，注意時間不要超過0.5 min，以免機器過熱導致病毒死亡。將勻漿乳狀返飼材料分裝，每袋盛裝100 mL，用橡皮筋扎口封嚴，每袋可喂10～50頭母豬，立即飼喂或-20℃下凍存。每袋盡量一次用完，不能反復凍融，以免病毒死亡。

1.4發病仔豬腸組織滅活苗制備 選擇符合1.1條件的發病仔豬。集中統一放血致死，剖開腹腔，采取整個大小腸段，立即-20 ℃反復冷凍一次。趁病料未完全解凍前，將其剪碎成1 cm3小塊，注意腸內容物的保留。按照1∶3比例，加入冷藏的生理鹽水，制成勻漿。勻漿液用40目濾篩初濾和60目的濾篩二濾。按最終甲醛溶度為0.3%～0.5%劑量，添加甲醛滅活，嚴格混勻，分裝。37 ℃溫箱滅活48 h，期間每2 h搖勻一次組織滅活苗。細菌學檢測：將做好的滅活組織苗無菌操作接種到血平板培養基上，37 ℃生物培養箱培養36 h，觀察有無菌落長出。仔豬安全性檢測：選擇健康的斷奶仔豬2頭，每頭分兩點注射接種滅活組織苗10 mL，連續觀察7 d，查看有無發病，同時設立對照組。

1.5返飼材料與腸組織滅活苗的使用 用制備好的返飼材料飼喂懷孕母豬(孕齡80 d以內)、后備母豬、斷奶母豬，每頭母豬喂5-10 mL，隔日連喂2-3次；切忌不可喂產房哺乳母豬和孕齡80 d以上的母豬。返飼當天全場按順序消毒，尤其母豬定位欄，杜絕返飼材料污染哺乳豬舍等其它場所。

返飼結束的母豬在間隔開1周、2周、2周分別肌肉注射一次腸組織滅活苗；后備母豬(千萬不能漏打后備母豬和公豬)配種前完成三次免疫：第一次喂返飼材料，第二次和第三次分別肌肉注射發病仔豬腸組織滅活苗，分別間隔2周。

1.6豬流行性腹瀉高免血清的制備 對180日齡的2頭肉豬進行飼喂制備好的返飼材料，每頭10 mL，各間隔1 d，連續飼喂3次；7 d后肌肉注射發病仔豬腸組織滅活苗5 mL，各間隔14 d，連續注射3次。免疫期間，給予自由采食和飲水，并在飲水中添加適量的電解多維，減低應激和提高免疫應答。

在最后一次肌注組織滅活苗后10 d，經頸動脈放血無菌采集肉豬全身血液，玻璃珠等物理方法抗凝血。將收集的抗凝血以3000 r·min-1轉速離心無菌分離血清，分裝，再置入56 ℃水浴中滅活補體30 min，按10 IU/mL劑量分別添加青鏈霉素4 ℃作用12 h，-20 ℃凍存備用。

2 結果

2.1返飼效果觀察 通過飼喂返飼材料和肌注滅活苗，以此來逐步的擴大母豬的保護面，以致最后消除PED病毒的威脅[4-5]。母豬在返飼后1周左右可產生抗體，成功的人工感染大約有8%-30%的母豬拉稀，有些母豬不拉稀但精神沉郁，1-2餐不吃食。哺乳仔豬吃到母源抗體后獲得被動免疫，起到保護作用。

2.2高免血清效果觀察 使用制備的PED高免血清對早中期的發病仔豬進行肌肉注射，每公斤體重注射5 mL，連續使用3 d；加以配合口服葡萄糖鹽水、慶大霉素和電解多維，能使病死率降低到20%左右。

3 小結與討論

3.1返飼注意事項 返飼材料取自的發病仔豬實驗室檢測排除混合感染豬瘟，藍耳病等疫病，制作過程一定要低溫操作，時間不宜過長，從取樣到分裝持續時間控制在1 h以內，防止操作過程中的外來污染以及消毒劑或其他化學物質對返飼材料的干擾。一般情況下，定位欄母豬飼喂完返飼材料后，及時對定位欄持續消毒10 d。

3.2仔豬初乳管理 新生仔豬盡早吃到初乳，以免被外界野毒感染。最好轉出哺乳能力差的母豬或有乳房炎的母豬并做好治療工作，仔豬最好淘汰或轉給剛斷奶的母豬寄養。加強初乳管理，尤其是夜間出生的，初乳攝入量要達到40 mL/頭，以提高仔豬的被動抵抗力。

3.3隔離發病母仔 把產房的發病母豬及嘔吐、腹瀉仔豬迅速轉出產房，進行隔離飼養，防止病毒傳播而導致腹瀉所造成的高死亡率。

3.4干燥消毒空欄 對腹瀉母豬的產床及相鄰產床進行嚴格的清理干燥消毒，用消毒藥粉灑在污染物上作用一定時間后沖洗。再實施消毒和空欄，空欄的時間要足夠，可長達3-5 d，消毒以火焰消毒效果更佳。