牛奶中四環素類獸藥殘留的快速檢測關鍵技術應用研究

從上世紀70年代起，養殖戶就開始對動物使用促進生長和催情的獸藥，并且隨著市場需求的不斷增長，獸藥的使用數量也持續不斷地攀升，這就在無意識的情況下加劇了各產品上的藥物殘留危害。VA、VB的含量在牛乳中占有的比例比較大，在一定程度上這二者可以促進人的骨骼生長，乳制品被廣泛應用到人們的日常生活中。而像四環素等獸藥會傷害人體健康。所以為了保障人類的健康安全，需要對人們日常生活需要的食品進行更為全面的監管，通過快速檢測方法，以實現其食品的安全使用。

國內外乳制品快速檢測方法

目前國內外就乳制品的抗生素快速檢測方法最常用的是色譜法、免疫法以及微生物法。[1]

色譜法。色譜法是牛奶中抗生素檢測方面應用最廣泛的一種方法，主要是用各組在兩相中的不同分配系數，讓各組的混合物進行分離的。

現在色譜根據流動相與色譜柱的不同，又可分為以下三種：（1）氣相色譜法：可以分離復雜的多組混合物，主要優點在于分析速度快、靈敏度高、應用范圍廣泛。主要應用在農藥殘留、獸藥殘留和成分的分析等方面。（2）高效液相色譜：氣相色譜法雖然應用廣泛，但是不適宜于揮發性差和發熱不穩定的化合物，而高效液相色譜法，就是能高效自動的色對譜進行分離。（3）色譜-質譜聯用：這是當前最重要的分離分析方法之一，聯合作用各取所長，能對復雜基質的多殘留進行快速篩選，靈敏度高、適用范圍寬廣。

微生物學檢測法：一般可分為三種：（1）微生物抑制法：主要原理是通過使用抗生素從而發揮對微生物的生長抑制作用，進而可以計算出樣品中的抗生素殘留量。（2）微生物受體法：主要包括CHARMI和CHARMII，它可以應用在不同基質中的抗生素檢測。（3）酶比色法：主要檢測對象是牛奶中的β-內酰胺類抗生素。

免疫分析法：就是以抗原-抗體為基礎，將抗體作為生物化學檢測器對化合物、酶等進行定性或者定量分析的技術。比較常見的免疫分析主要包括放射免疫、熒光免疫分析以及酶聯免疫吸附試驗等等。放射免疫主要是把放射性物質作為標記物，它的突出優點在于靈敏度高，但是其突出劣勢就在于對環境的損害，從而影響了其應用范圍。[2][3]

本文中牛奶的四環素類獸藥殘留的快速檢測關鍵性技術

本文根據牛奶中四環素農藥殘留的關鍵技術進行分析，采用靈敏度最高、精密度最高和比較快速及應用最為廣泛的液相色譜-質譜法進行快速研究，通過對牛乳中的土霉素、四環素、金霉素、強力霉素4種抗生素進行檢測，為牛乳中四環素類抗生素的獸藥殘留分析提供參考。

試驗材料及試驗方式

試驗儀器：H66MC超聲波發生器：上海醫療企業集團；旋轉儀蒸發儀：日本EYELA公司；固相萃取柱：賽默飛世爾科技有限公司。

試驗試劑：試驗試劑主要是純度均超過95%的甲醇、四環素、土霉素、金霉素、強力霉素標準品等。

標準儲備液和標準工作溶液的制備：標準儲備溶液：準確稱取四環素、土霉素、金霉素和強力霉素各10mg，純度要求100%。稱取完成后，使用一定量的甲醇與之融合，定容至100ml。然后將儲備液放到-18℃以下的棕色瓶內進行存儲，存儲的時間能超過一年。

試樣的制備：從樣品中取出500g并進行充分的攪拌，然后將其放入容器之中并進行密封，做好標記后放入-18℃的環境內進行封存。再稱取5g混合試樣用HLB固相萃取柱對其相應的處理，等混合試樣全部從柱內流出后，分別進行5ml水和5ml甲醛水的順序進行淋洗。將壓強持續控制在2.0kPa內，再進行減壓，然后再使用容量為10ml的甲醇乙酸乙酯洗脫。[4]

液質條件：（1）色譜柱：選取Inertsil C8-3，5μm，150mm×2.1mm(內徑)。（2）流動相：甲醇乙酸乙酯洗脫。（3）流速：300μL/min。（4）柱溫：30℃。（5）進樣量：30μL。（6）質譜條件：質譜掃描模式為多反應監測(MRM)，單位分辨率，霧化氣(NEB)為6.00L/min(氮氣)，氣簾氣(CUR)為10.00L/min(氮氣)，噴霧電壓(IS)為4500V，去溶劑溫度(TEM)為500℃，去溶劑氣流為7.00L/min(氮氣)，碰撞氣(CAD)為 6.00 mL/min(氮氣)。

結果分析

定性測定：樣品中混合的化合物色譜峰值殘留的時間與標準溶液相比較而言波動的范圍在2.5%左右。

定量測定：通過分析實驗中樣品液體中被測定的四環素含量的整體情況，選取定峰高相接近的標準工作溶液（標準工作溶液中的標準重構離子能在5.07min時達到100。）

結束語

乳制品中四環素類藥品殘留的快速檢測方法有很多種，本文選取了最為普遍的液相色譜—質譜法進行快速檢測，用試驗檢測的方法分析四環素類抗生素中的獸藥殘留，實現其定性檢測的高效性和定量檢測的準確性。今后還要實現對轉基因食品、畜牧類等與人類健康息息相關的食品和產品進行快速檢測，在推動檢測技術深入開展的同時保障食品的安全問題。