化痰通脈飲干預多囊卵巢綜合征大鼠脂質代謝紊亂的機制研究

廣西中醫藥大學第一附屬醫院，廣西 南寧 530023

多囊卵巢綜合征(Polycystic Ovary Syndrome，PCOS)是一種發病多因性，臨床表現多態性(閉經或月經稀少、卵巢多囊改變、不孕、多毛、肥胖及黑棘皮征)的綜合征，其內分泌學特征包括高雄激素、高黃體生成激素、高胰島素及胰島素，其發病率約占育齡婦女的6.6%～6.8%，其中約有50%～60%的PCOS患者伴有胰島素抵抗(insulinresistance，IR)，而胰島素抵抗在普通人群中IR的發病率僅為10%～25%，說明PCOS和 IR的發病具有極大的關聯性[1-2]。同時，與IR相關的脂質代謝紊亂會增加PCOS患者動脈粥樣硬化、冠心病的風險并誘導其他遠期并發癥的出現。中醫認為，痰濕阻滯會導致PCOS患者發生肥胖、痤瘡和不孕，同時痰濕阻滯氣血運行不暢則會引起血瘀，則導至閉經、月經稀發、月經過少、不孕等癥[3]。

化痰通脈飲為本課題組臨床治療PCOS的經驗方，由半夏、蒼術、白術、茯苓、雞血藤、當歸、丹參、桃仁、澤蘭、瓦楞子、陳皮、川芎和香附組成，具有燥濕化痰，活血化瘀，理氣調經之功效[4]。根據臨床觀察及初步臨床研究表明該方具有改善PCOS臨床癥狀、胰島素抵抗調整脂質代謝紊亂的作用。然而，截至目前，化痰通脈飲改善脂質代謝紊亂的作用機制研究還未見報道，基于此，本研究通過制作PCOS大鼠模型，分析化痰通脈飲對模型大鼠的胰島素抵抗及脂質代謝紊亂的治療作用，佐證化痰祛瘀同治法的治療作用，為臨床治療多囊卵巢綜合征提供科學的證據。

1 材料與儀器

1.1 動物 選用8周齡SPF級雌性SD大鼠共48只(180～220 g)，均購置于廣西醫科大學實驗動物中心(許可證號：SCXK-20140002)。飼養期間給予充足的食物和濃度為5 %的葡萄糖飲水，室溫22±3℃，濕度為(50±15)%，每天給予 12 h(06:00～18:00)的周期性光照。

1.2 藥材和試劑 化痰通脈飲所用藥材：陳皮、茯苓、香附、蒼術、瓦楞子、當歸、雞血藤、丹參、澤蘭、川芎、桃仁和法半夏購置于南寧生源中藥飲片有限公司。經廣西農業科學院莫長明副研究員鑒定，半夏為天南星科植物半夏Pinelliaternata的干燥塊莖；蒼術為菊科植物茅蒼術Atractylodeslancea的干燥根莖；白術為菊科植物白術AtractylodesmacrocephalaKoid.的干燥根莖；茯苓為多孔菌科真菌茯苓Poriacocos的干燥菌核；雞血藤為豆科植物密花豆SpatholobussuberectusDunn的干燥藤莖；當歸為傘形科植物當歸Angelicasinensis的干燥根；丹參為唇形科植物丹參Salviamiltiorrhiza的干燥根；桃仁為薔薇科植物桃Prunuspersica的干燥成熟種子；澤蘭為唇形科植物毛葉地瓜兒苗LycopiHerba的干燥地上部分；瓦楞子為蚶科動物毛蚶ArcasubcrenataLischke的貝殼；陳皮為蕓香科植物橘CitrusreticulataBlanco及其栽培變種的干燥成熟果皮；川芎為傘形科植物川芎LigusticumchuanxiongHort的干燥根；香附為莎草科植物莎草CyperusrotundusL.的干燥根莖。鹽酸二甲雙胍片(批號：1207097，中美上海施貴寶制藥有限公司)；注射用絨促性素(批號：1504012，馬鞍山豐源制藥公司)；精蛋白生物合成人胰島素注射液(批號：150541，丹麥諾和諾德公司)；大鼠胰島素(INS)試劑盒(批號：20160331，南京建成生物工程研究所)。

2 方法

2.1 藥材的提取 提取方法參考廣西中醫藥大學第一附屬醫院中藥房已經在臨床上取得療效的提取工藝，半夏15 g,蒼術15 g,白術15 g,茯苓20 g,雞血藤20 g,當歸10 g,丹參15 g,桃仁10 g,澤蘭15 g,瓦楞子10 g,陳皮6 g,川芎10 g,香附15 g。上藥加6倍水浸泡2 h，回流提取1 h濾過，所得藥渣以同法再提取1次，合并濾液，濃縮至4.8 g/mL的生藥提取液，4 ℃保存備用。

2.2 動物分組及造模方法 所有大鼠適應性飼養1周后被隨機分為對照組、模型組、陽性對照組和化痰通脈飲低(L-HTY)、中(M-HTY)、高劑量(H-HTY)組，每組8只。除對照組外，其余5組采用“胰島素(INS)聯合HCG誘導大鼠PCOS模型”[5]的造模方案，給予高脂飼料、葡萄糖水(50 g/L)飲用，第1～10天每晚腹部皮下注射精蛋白鋅重組人胰島素注射液，劑量由0.5 IU起始并逐漸遞增(每日增加0.5 IU)至5.0 IU，第11～22天每晚腹部皮下注射精蛋白鋅重組人胰島素注射液 6.0 IU，同時給予HCG 3.0 IU(溶于0.2 mL生理鹽水)股內側皮下注射，每天早晚各1次。對照組給予普通飼料和飲用水，第1～10天每晚腹部皮下注射0.2 mL生理鹽水，第11～22天，每天早晚各增加注射1次0.2 mL生理鹽水。第22天后，各組均停止注射；模型組停止給予50 g/L葡萄糖水，改為普通飲用水。模型成功標志為：與正常組比較，PCOS模型組大鼠卵巢表面較蒼白，體積增大。鏡下見卵泡擴張，卵母細胞或放射冠消失，顆粒細胞層數減少至2～3層，部分卵泡閉鎖，無或僅見少量黃體形成鑒定為造模成功。造模成功后，HTY各個劑量組(低中高劑量組分別為8、16和24 g/kg/d)連續灌胃21 d，停用1天，再用藥21 d。陽性對照組給予灌胃二甲雙胍(156.25 g/kg/d)，模型組和對照組給予蒸餾水，同法灌胃。

2.3 觀察指標及方法

2.3.1 大鼠體重測量 分別于造模前和造模結束后，用電子天平測量大鼠體重。

2.3.2 大鼠血清HDL-C、LDL-C、TG和INS生化指標的檢測 末次給藥后，各組大鼠治療前禁食12 h，腹主動脈取血，3 000 r/min 離心10 min分離血清，存儲于-80 ℃備用。ELISA 檢測血清胰島素(INS)，生化檢測高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和甘油三酯(TG)。

3 結果

3.1 化痰通脈飲對PCOS大鼠體重的影響 造模前各組大鼠體重相當，各組大鼠間體重沒有顯著差異，造模過程中，PCOS大鼠發胖，體重明顯增加，模型組與空白組比較具有高度顯著差異(P<0.01)；化痰通脈飲中、高劑量組均能從不同程度上減少PCOS大鼠的體重增加(P<0.01、P<0.05)。結果見表1。

組別劑量體重/g給藥前給藥后Control0217.17±10.80239.99±12.63**Model0217.04±13.79264.21±15.60Positive156.25mg·kg-1·d-1223.14±11.07252.57±14.14L-HTY8g·kg-1·d-1217.34±11.11261.25±24.24M-HTY16g·kg-1·d-1219.92±14.02246.37±15.09*H-HTY24g·kg-1·d-1216.90±14.18248.28±10.51*

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3.2 化痰通脈飲對大鼠血清HDL-C、LDL-C、TG和INS生化指標的影響 結果表明，與對照組相比，PCOS大鼠血液中LDC-C、TG和INS水平顯著上升(P<0.01～0.05)；HDL-C顯著下降(P<0.01)。二甲雙胍和化痰通脈飲各個劑量組均能不同程度的改善PCOS大鼠HDL-C和TG水平的紊亂，且化痰通脈飲高劑量組能降低PCOS大鼠的胰島素水平。結果見表2。

組別HDL-CLDL-CTGINSControl1.52±0.14**0.12±0.05*0.41±0.21*17.67±1.25*Mondel1.14±0.130.21±0.050.62±0.0519.25±1.44Postive1.39±0.17*0.24±0.060.53±0.06*17.16±2.80L-HTY1.14±0.140.26±0.140.47±0.05**17.98±0.28M-HTY1.49±0.09**0.23±0.080.46±0.06**18.35±0.72H-HTY1.35±0.20*0.21±0.050.62±0.2015.60±1.63*

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

4 討論

多囊卵巢綜合征常于青春期后發病，表現為卵泡膜細胞良性增生引起的雄激素生成過多造成月經紊亂、持續排卵障礙、卵巢多囊樣變及高雄激素血癥等。然而PCOS的病理生理機制復雜，至今仍未清楚[6]。目前，大量實驗證實胰島素抵抗(IR)與PCOS的發病機制關系最為密切，胰島素水平上升導致卵巢分泌過多的雄激素，并使其轉化為二氫睪酮，進一步引起卵泡刺激素(FSH)-顆粒細胞軸功能低下，導致大量卵泡發育而無優勢卵泡形成。此外，高雄激素血癥還會導致PCOS患者體內脂質代謝紊亂，是導致動脈粥樣硬化和高血壓等心血管疾病的危險因素[7- 8]。因此，治療胰島素抵抗并調節脂質代謝紊亂可以調節多囊卵巢綜合癥并預防后續心血管并發癥的發生。

祖國醫學沒有與多囊卵巢綜合征相應的病名，常將其歸于“月經后期”、“月經過少”、“ 閉經”、“ 癥瘕”、“不孕” 等范疇。本課題組前期研究表明，痰濕阻滯是多囊卵巢綜合征患者的重要病理基礎，會導致肥胖，痤瘡，不孕的發生[9]。臨床研究表明，痰濕阻滯證型患者存在糖脂代謝紊亂，胰島素敏感指數下降，表明糖脂代謝紊亂、胰島素抵抗是臨床痰證患者重要的病理生理學基礎[3, 10]。化痰通脈飲方中半夏燥濕化痰，為治痰濕之要藥，能治經絡四肢、皮里膜外之痰；白術健脾燥濕，中焦運化；蒼術醒脾助運，開郁寬中，疏化水濕；蒼術、白術相須為用，健脾燥濕，改善痰證患者體質。茯苓健脾利濕；當歸、雞血藤養血活血；丹參活血調經；桃仁活血祛瘀；澤蘭既能活血化瘀，又能行水；瓦楞子消痰化瘀，軟堅散結；陳皮理氣燥濕；川芎活血祛瘀，行氣開郁；香附理氣解郁調經。諸藥相和，共奏健脾化痰、活血調經之功效。

肥胖是多囊卵巢綜合征的常見的四大癥之一，肥胖主要表現為機體脂肪組織的堆積，其不僅會降低性激素結合球蛋白水平，還會促進雄激素與胰島素的分泌，加劇IR[11]，而高濃度的雄激素、胰島素水平又會進一步導致脂肪分布異常。因此，控制肥胖和腰臀比對于PCOS患者具有積極的意義，其不但能減輕月經紊亂、多毛和痤瘡等癥狀，還能誘發排卵并改善妊娠結果，同時能減少其遠期疾病如糖尿病、高血壓和冠心病的發生[12]。本研究中，PCOS模型大鼠的體重明顯高于對照組，而化痰通脈飲中、高劑量均能在不同程度上顯著降低模型大鼠體重。

血脂代謝異常是 PCOS 患者的臨床表現之一，主要表現為外周血中 TG 及 LDL 水平的上升，HDL的下降，相關分析表明，提示 IR、高胰島素血癥是PCOS血脂異常的重要原因[13]。HDL-C含量與動脈管腔狹窄程度呈顯著的負相關，對血管起保護作用，其能清除血管脂質, 是血管保護因子。LDL-C是動脈粥樣硬化脂蛋白(AS)，容易沉淀于AS的斑塊中。高濃度的甘油三酯水平可增加 PCOS 患者患動脈粥樣硬化和冠心病的風險。本研究結果顯示，化痰通脈飲高劑量可以顯著降低PCOS模型大鼠INS水平，同時，各個劑量組均能調節TG和HDL-C水平的紊亂。說明了化痰通脈飲可以改善PCOS發病過程中胰島素抵抗，并提高脂質代謝能力，同時降低PCOS患者遠期心血管病的危險性。

本研究通過建立PCOS大鼠模型，分析了化痰通脈飲對模型大鼠的胰島素抵抗及脂質代謝紊亂的治療作用，佐證化痰祛瘀同治法的治療作用，為多囊卵巢綜合征的臨床治療提供科學的依據。