國產牛磺酸滴眼液中抑菌劑使用狀況分析

肖 璜，戴 ，楊美琴，馬仕洪

（中國食品藥品檢定研究院，北京 100050）

根據給藥頻次，滴眼液可分為單劑量制劑和多劑量制劑，國內常用滴眼液以多劑量制劑為主，為保證其在連續(xù)使用過程中不發(fā)生微生物污染，需添加適宜的抑菌劑。滴眼液中所使用的抑菌劑種類和添加量對產品的質量與臨床安全性有直接影響。本研究中通過對國內13家企業(yè)的牛磺酸滴眼液[1－2]中抑菌劑的種類和含量進行分析，結合抑菌效力，探討其抑菌劑使用的必要性和合理性，分析國產滴眼液中抑菌劑的應用現狀，為提高國產滴眼液制劑質量和加強監(jiān)管提供有效的技術支持。

1 材料與方法

1.1 試劑耗材

對照品：苯扎溴銨（Sigma－Aldrich公司）；羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯（中國食品藥品檢定研究院）。

樣品：牛磺酸滴眼液，來自13家企業(yè)的75批樣品，均為2015年全國評價性抽驗樣品。

色譜柱：Agilent Zorbax Eclipse XBD－C18柱（序列號USNH033839，250 mm × 4.6 mm，5 μm）。

測試菌株：金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）CMCC（B）26003、銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）CMCC（B）10104、大腸埃希菌（Escherichia coli）CMCC（B）44102、白色念珠菌（Candida albicans）CMCC（F）98001 黑曲霉（Aspergillus niger）CMCC（F）98003（以下簡稱金葡菌、銅綠菌、大腸菌、白念菌、黑曲霉，中國食品藥品檢定研究院醫(yī)學菌種保藏中心，均選第3代菌種）。

培養(yǎng)基：沙氏葡萄糖瓊脂（SDA）無菌平皿培養(yǎng)基，胰酪大豆胨瓊脂（TSA）無菌平皿培養(yǎng)基（上海諾狄生物科技有限公司）。

1.2 分析方法

抑菌劑含量按2010年版《中國藥典·第二增補版》中收載的阿昔洛韋滴眼液中“羥苯乙酯、苯扎溴銨與硫柳汞”項下方法測定；抑菌劑效力按2010年版《中國藥典（二部）》附錄ⅪⅩN“抑菌劑效力檢查法指導原則”要求，測定13家企業(yè)產品是否滿足藥典標準。控制標準見表1。

2 結果

2.1 處方分析

13家企業(yè)的樣品共有14個處方，其中有1個因單劑量品種未添加抑菌劑（7.14%），有2個使用季銨鹽抑菌劑（14.29%），其余均使用尼泊金酯類抑菌劑（78.57%）。詳見表 2。可見，國產牛磺酸滴眼液中抑菌劑使用較單一，主要使用尼泊金酯類和季銨鹽類抑菌劑，且處方質量濃度差別不大。

表1 眼用制劑抑菌效力評價標準

表2 國產牛磺酸滴眼液中抑菌劑處方情況

2.2 抑菌劑含量分析

按照檢測方法，對所有含抑菌劑的產品進行含量測定，結果見圖1。5家企業(yè)產品不足5批，不利于綜合分析。箱式分布圖僅代表本次試驗測定數據。由圖1可知，部分企業(yè)（編號為 02，05，07，11）部分批次的樣品中抑菌劑含量低于80%。

圖1 牛磺酸滴眼液中抑菌劑實測含量及相對含量

2.3 抑菌效力分析

不同菌株供試液在不同計數法下的回收率見表3。其中牛磺酸滴眼液原液經直接接種法后回收率不足70%。可見，原液具有一定的抑菌活性，用直接接種法無法保證足夠的回收率，需要薄膜過濾法去除抑菌活力。為了獲得更真實的微生物數據及便于操作，設定方法如下：在供試品原液級計數時，取供試液1 mL，溶解于100 mL 0.9%無菌氯化鈉注射液中，全部通過薄膜過濾器，濾干后，貼于相應的瓊脂培養(yǎng)基表面，倒置培養(yǎng)后計數。每家企業(yè)的產品進行3次評價，取均值代表產品的抑菌效力。結果國產牛磺酸滴眼液各品種中，苯扎溴銨類抑菌劑的抑菌效力更優(yōu)，符合2010年版《中國藥典(一部)》對抑菌效力的相關要求。而應用較多的尼泊金酯類抑菌劑的抑菌效力未能達到藥典要求。主要表現在細菌組，尤其是大腸埃希菌。詳見圖2。

表3 計數方法考察結果

3 討論

3.1 抑菌劑含量

2010年版《中國藥典》在牛磺酸滴眼液品種項下并未收載抑菌劑含量測定方法。本試驗中采用了阿昔洛韋滴眼液品種項下方法，因其分離類別多，基本能用于檢驗添加類別不同的情況，且為2015年版《中國藥典》收載。在本實驗室開展的專項研究中，該方法對尼泊金酯類（甲酯、乙酯和丙酯）、季銨鹽類（苯扎溴銨）、汞類（硫柳汞）均能達到良好分離（數據暫未發(fā)表）。

抑菌劑含量通常應控制在處方量的80%～120%。在本試驗中，02，05，07，11號企業(yè)的部分批次產品中抑菌劑含量不足其處方量的80%，排除試驗誤差問題，通過回溯實驗數據分析，可能存在以下問題：部分企業(yè)含量分布情況不一，制劑穩(wěn)定性差（05企業(yè)和11企業(yè)）；部分企業(yè)低限投料（02企業(yè)和07企業(yè)，不同來源同一批次產品在80%上下浮動）。

2010年版《中國藥典》收錄了10個滴眼液品種的抑菌劑測定方法，但其測定方法并不統(tǒng)一。目前，在2015年版《中國藥典》中，收錄項下抑菌劑含量測定的滴眼液品種略有增加（11個），然而并未全面覆蓋所有滴眼液品種（共43個）。同時，各類抑菌劑在不同滴眼液品種中的測定方法也不相同。在文獻收集過程中，發(fā)現各藥檢單位嘗試對滴眼液品種項下不同抑菌劑含量測定進行統(tǒng)一，但各單位間并未達成一致[3－7]。方法不統(tǒng)一可能會造成檢測人員操作煩瑣，工作量大，而且廠家出廠放行和監(jiān)管部門裁定認可的標準還存在差異。因此，需要進一步開展標準統(tǒng)一的協(xié)調工作，以保證各級產品認可部門最終試驗數據的可重復性和認可標準的規(guī)范性。2018年3月28日，國家藥典委員會于官網發(fā)布了《滴眼劑中抑菌劑含量測定法（征求意見稿）》，并提請相關單位按所附方法進行自檢，于6月30日前返回檢測數據及修訂意見。統(tǒng)一規(guī)范、靈敏度高、專屬性好的滴眼劑中抑菌劑的通用檢測方法，將為企業(yè)自查提供技術支持，為監(jiān)管部門有效執(zhí)法提供有力武器，最終保障臨床安全、有效使用滴眼劑[8]。

圖2 13個含抑菌劑處方產品抑菌效力測試結果

3.2 抑菌效力

2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅩⅤD[9]中的《抑菌劑效力檢查法指導原則》在2015年版[10]中被修訂為《抑菌效力檢查法》。名稱的改變，不僅在于執(zhí)行力度上的加強，同時，代表對于產品抑菌能力的認知被進一步推進。抑菌效力已不僅僅被認知為由抑菌劑產生，而是更進一步被認定為由產品整體協(xié)同產生。

由表2、圖1和圖2可見，在使用尼泊金酯類抑菌劑的企業(yè)產品評價中，抑菌效力和抑菌劑質量濃度并未呈現簡單的正相關關系。以尼泊金乙酯處方含量最高（0.5 g／L）的企業(yè)為例，雖然08企業(yè)滴眼液中的抑菌劑實測含量明顯高于01企業(yè)，但01企業(yè)的滴眼液抑菌效力更優(yōu)。回溯處方，01企業(yè)在產品中添加了依地酸二鈉。據報道，依地酸二鈉與抑菌劑聯用，可起到更好的抑菌作用[11]。尼泊金乙酯處方含量最低（0.25 g ／L）的 04企業(yè)，其產品抑菌效力在真菌方面表現優(yōu)異。回溯處方，04企業(yè)添加了較其他企業(yè)處方量更大的硼類化合物。硼類化合物對抑菌效力亦有貢獻，主要體現在對真菌組的抑制。此結果與同期探索試驗結果可以相互佐證[12]。

在所有含抑菌劑的產品評估中，僅含苯扎溴銨類產品抑菌效力滿足2010年版《中國藥典》要求，而廣泛使用的尼泊金酯類產品抑菌效力全線不滿足要求。這一現象也應引起業(yè)內人士的重視和思考。牛磺酸類品種屬于非抗生素類品種，此次試驗中發(fā)現其抑菌劑使用種類單一，大部分產品不滿足標準。相關試驗顯示，既往抗生素類品種中抑菌劑使用種類和量差異較大[13－15]，說明過去研發(fā)階段的抑菌效力問題未引起生產企業(yè)重視。要解決老舊處方中的此類問題，需要得到監(jiān)管、生產和使用三方的進一步重視。

目前已上市品種的評價參照2010年版《中國藥典》要求，而申報品種的評價均參照更嚴格的2015年版《中國藥典》要求。藥典對相關內容的改版，通過提高檢測標準來良性引導企業(yè)在處方設計階段加強對產品性能的整體關注，使其關注點不僅僅局限于主藥和雜質成分含量，而是擴大到產品的安全性、穩(wěn)定性和有效性。

3.3 制劑展望

此次抽驗中發(fā)現，市場流通領域存在單劑量包裝產品。由于2015年版《中國藥典》效力檢查標準的提高，可能造成企業(yè)選用更強效能的抑菌劑或增大抑菌劑投料量，從而增加不良反應發(fā)生風險。但單劑量包裝產品通過減少使用過程中微生物污染的風險而降低對抑菌劑的依賴，無疑是品種研發(fā)的另一方向。