急性腦梗死患者血清白細(xì)胞介素—9、抗心磷脂抗體和同型半胱氨酸水平測(cè)定及臨床價(jià)值探討

李傳利

[摘要] 目的 探討和分析血清白細(xì)胞介素-9（IL-9）、抗心磷脂抗體（ACA）及同型半胱氨酸（Hcy）在急性腦梗死患者臨床治療中的價(jià)值。 方法 選擇2016年9月～2017年4月在我院就診的急性腦梗死患者115例作為研究對(duì)象，另選取我院健康體檢者103例作為對(duì)照組。采用ELISA法檢測(cè)急性腦梗死組與健康對(duì)照組的血清IL-9、ACA水平，采用循環(huán)酶法檢測(cè)血清Hcy水平。比較急性腦梗死組與健康對(duì)照組IL-9、ACA和Hcy的水平差異，并分析IL-9和Hcy水平與患者的神經(jīng)功能缺損NIHSS評(píng)分的相關(guān)性。 結(jié)果 急性腦梗死組IL-9水平為（0.94±0.28）pg/mL，較健康對(duì)照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。急性腦梗死組ACA陽(yáng)性率為46.1%，高于健康對(duì)照組的7.8%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；急性腦梗死組Hcy的水平為（18.15±13.29）μmol/L，顯著高于健康對(duì)照組（P<0.01）。Pearson相關(guān)分析表明，IL-9水平與患者的神經(jīng)功能缺損NIHSS評(píng)分呈正相關(guān)（P<0.01），而Hcy與其相應(yīng)的NIHSS評(píng)分不相關(guān)。 結(jié)論 急性腦梗死患者血清IL-9、ACA及Hcy的水平升高，且IL-9與神經(jīng)功能缺損有相關(guān)性。該三個(gè)指標(biāo)與急性腦梗死的發(fā)生密切相關(guān)，該三個(gè)指標(biāo)的檢測(cè)對(duì)急性腦梗死的預(yù)防、早期診斷與治療具有重要的臨床意義。

[關(guān)鍵詞] 急性腦梗死；白細(xì)胞介素-9；抗心磷脂抗體；同型半胱氨酸

[中圖分類號(hào)] R743.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2018）27-0124-04

[Abstract] Objective To investigate and analyze the clinical value of serum interleukin-9（IL-9）， anticardiolipin antibody（ACA） and homocysteine（Hcy） in the clinical treatment of patients with acute cerebral infarction. Methods A total of 115 patients with acute cerebral infarction who were admitted in our hospital from September 2016 to April 2017 were enrolled. A total of 103 healthy subjects from our hospital were selected as the control group. Serum IL-9 and ACA levels were measured by ELISA in acute cerebral infarction group and healthy control group. Serum Hcy level was detected by circulating enzyme method. The differences in IL-9， ACA and Hcy between the acute cerebral infarction group and the healthy control group were compared. And the correlation between IL-9， Hcy level and the NIHSS score of the neurological deficit was analyzed. Results The level of IL-9 in the acute cerebral infarction group was（0.94±0.28） pg/mL， which was higher than that in the healthy control group， and the difference was statistically significant（P<0.01）. The positive rate of ACA in acute cerebral infarction was 46.1%， which was higher than that in healthy control group（7.8%）. The difference was statistically significant（P<0.01）. The level of Hcy in acute cerebral infarction group（18.15±13.29） μmol/L， was significantly higher than that of the healthy control group（P<0.01）. Pearson correlation analysis showed that IL-9 level was positively correlated with NIHSS scores in patients with neurological deficits（P<0.001）， whereas Hcy was not correlated with the corresponding NIHSS scores. Conclusion The levels of serum IL-9， ACA and Hcy are elevated in patients with acute cerebral infarction， and IL-9 is associated with neurological deficits. These three indicators are closely related to the occurrence of acute cerebral infarction. The detection of these three indicators has important clinical significance for the prevention， early diagnosis and treatment of acute cerebral infarction.

[Key words] Acute cerebral infarction； Interleukin-9； Anticardiolipin antibody； Homocysteine

急性腦梗死（acute cerebral infarction，ACI）是一種嚴(yán)重的引起腦部組織缺血性、缺氧性損害甚至壞死的腦血管疾病，其主要病因?yàn)槟X部供血?jiǎng)用}粥樣硬化及血栓形成而引發(fā)的腦血流阻斷[1]。ACI在臨床具有較高的致死率和致殘率，嚴(yán)重威脅患者健康和生命安全，因此ACI的早期診斷及預(yù)防性干預(yù)，對(duì)降低急性腦梗死發(fā)生率、控制患者病情及改善預(yù)后具有重要意義[2]。IL-9是一種炎性介質(zhì)，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)IL-9介入腦動(dòng)脈的炎癥過(guò)程，進(jìn)而促進(jìn)腦部動(dòng)脈粥樣硬化和血栓的發(fā)生發(fā)展[3]。抗心磷脂抗體（anticardiolipin antibody，ACA）是一種自身抗體，其與許多免疫介導(dǎo)的血栓性疾病密切相關(guān)；同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）是引起并促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程的重要危險(xiǎn)因素。本研究對(duì)急性腦梗死患者臨床資料進(jìn)行研究分析，探討急性腦梗死與IL-9、ACA 及Hcy水平的關(guān)系，為急性腦梗死的早期預(yù)防、早期診斷及治療提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2016年9月～2017年4月我院神經(jīng)內(nèi)科收治的急性腦梗死患者115例納入急性腦梗死組（ACI組），其中男74例，女41例，年齡43～89（47.6±11.7）歲。健康對(duì)照組（HC組）：選擇年齡匹配，同期來(lái)我院體檢的無(wú)心腦血管疾病、無(wú)感染、肝臟疾病、自身免疫性疾病、腎臟及內(nèi)分泌等疾病的健康者103例，其中男65例，女38例，年齡46～79（48.1±12.5）歲。所有受試者近1個(gè)月內(nèi)未服用任何藥物。兩組實(shí)驗(yàn)對(duì)象的性別和年齡比例比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，對(duì)于參加本研究項(xiàng)目知情，且均簽署知情同意書。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：急性腦梗死組所有患者均于發(fā)病24 h內(nèi)就診，符合第4屆腦血管病會(huì)議制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且均經(jīng)頭顱CT和（或）MRI證實(shí)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）其他原因引起的腦梗死；（2）出血性腦血管疾病；（3）有嚴(yán)重血液系統(tǒng)、肝臟、自身免疫系統(tǒng)疾病、腎臟及惡性腫瘤等；（4）既往有神經(jīng)系統(tǒng)方面的疾病且有嚴(yán)重后遺癥者或其他原因引起的嚴(yán)重軀體疾病不能配合完成正常檢查者；（5）妊娠或哺乳期者。

1.3 標(biāo)本采集

所有受試者均于入院次日早晨空腹抽取靜脈血，促凝劑真空采血管釆血2～4 mL，1 h內(nèi)3500 r/min離心10 min，分離血清，2 h內(nèi)完成Hcy檢測(cè)。分裝剩余血清至EP管中，每管120 μL，-80℃凍存，用于IL-9、ACA檢測(cè)。

1.4 儀器和試劑

IL-9檢測(cè)試劑盒購(gòu)自R&D;；ACA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自德國(guó)歐蒙醫(yī)學(xué)診斷有限公司；酶標(biāo)儀為美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司生產(chǎn)；Hcy檢測(cè)試劑盒購(gòu)自寧波瑞源生物科技有限公司，檢測(cè)儀器為日本日立公司生產(chǎn)的7600-110全自動(dòng)生化分析儀。

1.5 方法

IL-9、ACA的水平采用ELISA法檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書執(zhí)行，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線孔、陰性對(duì)照孔和空白孔，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度，ACA≥12 RU/mL判為陽(yáng)性，ACA<12 RU/mL判為陰性。Hcy采用循環(huán)酶法檢測(cè)，其正常參考范圍為4.0～15.4 μmol/L 。

1.6 神經(jīng)功能缺損評(píng)分

根據(jù)美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院卒中量表（NIH stroke scale，NIHSS）對(duì)ACI組患者發(fā)病期內(nèi)的神經(jīng)功能缺損進(jìn)行評(píng)定。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料用%表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)系數(shù)分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ACI組與健康對(duì)照組血清ACA陽(yáng)性率比較

ACI 組 ACA 陽(yáng)性53例（46.1%），對(duì)照組陽(yáng)性8例（7.8%），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=39.59，P<0.01）。見(jiàn)表1。

2.2 ACI組與健康對(duì)照組IL-9和Hcy水平比較

ACI組IL-9的血清學(xué)水平顯著高于健康對(duì)照組（P<0.01）；而Hcy的血清學(xué)水平，ACI組顯著高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見(jiàn)表2。

2.3 腦梗死相關(guān)因素的Pearson相關(guān)性分析

ACI組患者血清中的IL-9水平與其相應(yīng)的NIHSS評(píng)分具有Pearson相關(guān)關(guān)系，其r=0.66，說(shuō)明二者的水平呈正相關(guān)關(guān)系，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。而Hcy與其相應(yīng)的NIHSS評(píng)分不具有相關(guān)性。見(jiàn)表3。

3討論

急性腦梗死是一種嚴(yán)重致死致殘的疾病，目前靜脈溶栓是唯一有效的治療方法，但一方面很大程度被時(shí)間窗限制，另一方面只有約1/3的患者能夠避免殘疾[4]。因此，建立有效的血清學(xué)檢測(cè)指標(biāo)，早期預(yù)防、早期診斷，對(duì)急性腦梗死患者的意義尤為重要。

近年來(lái)，IL-9是目前新被發(fā)現(xiàn)參與急性腦梗死的細(xì)胞因子，可由淋巴細(xì)胞、上皮細(xì)胞、NK細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞分泌產(chǎn)生，其在體內(nèi)的生物學(xué)作用具有多效性，但在急性腦梗死中的作用尚不明確。

目前，已有研究表明急性缺血性腦卒中患者的血清IL-9水平要顯著高于健康對(duì)照組[5]，在大鼠的腦卒中動(dòng)物模型中也得出過(guò)相同結(jié)論[6]，與本研究結(jié)果一致。然而，IL-9在急性腦梗死中發(fā)揮的生物學(xué)作用和具體機(jī)制并不明確，相關(guān)研究在國(guó)外尚屬起步階段，國(guó)內(nèi)研究更是有限。在動(dòng)物模型中，使用IL-9預(yù)處理，會(huì)加重腦內(nèi)注射門冬氨酸受體拮抗劑引發(fā)的白質(zhì)損傷[7]。這表明IL-9作為一種炎癥介質(zhì)，可能通過(guò)引發(fā)其他的炎癥細(xì)胞和炎癥因子的參與，加重腦損傷部位的炎癥反應(yīng)，從而使急性缺血性腦損傷的病變加重。

在急性腦梗死的起始和發(fā)展階段，多種免疫細(xì)胞和炎癥因子參與的免疫應(yīng)答和炎癥過(guò)程最終將導(dǎo)致嚴(yán)重的腦損傷和神經(jīng)功能缺損[8]。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥性疾病中，IL-9發(fā)揮著重要的中介作用。IL-9通過(guò)結(jié)合星形膠質(zhì)細(xì)胞的IL-9R，促進(jìn)其CCL-20的表達(dá)，從而促進(jìn)Th17細(xì)胞遷移入中樞神經(jīng)系統(tǒng)[9]。Th17細(xì)胞產(chǎn)生釋放的IL-17，會(huì)直接或間接殺傷破壞神經(jīng)元和神經(jīng)組織，形成或加重急性腦梗死的腦組織損傷和神經(jīng)功能缺損[10]。

NIHSS評(píng)分是ACI后神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損的評(píng)價(jià)體系，本研究中我們發(fā)現(xiàn)患者的NIHSS評(píng)分與其血清IL-9的水平具有相關(guān)性，提示IL-9的水平可能與ACI的嚴(yán)重程度相關(guān)。目前，有研究也得出過(guò)類似結(jié)論，發(fā)現(xiàn)缺血性腦梗死患者血清IL-9水平及IL-9分泌型T細(xì)胞水平均較健康對(duì)照組升高，且CD3+CD4+IL-9+和CD3+CD8+IL-9+細(xì)胞數(shù)量的升高與疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[11]。該研究還表明，IL-9對(duì)腦組織的損傷，很有可能是通過(guò)激活損傷性的STAT信號(hào)通路、封閉保護(hù)性[12]的PI3K/AKT信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)的[11]。然而也有學(xué)者認(rèn)為，其他類型的細(xì)胞比例更具有指導(dǎo)意義，如最近的研究發(fā)現(xiàn)外周血中CD4+CD28-細(xì)胞的比例對(duì)于急性腦梗死患者的分型和治療有著重要意義[13]。

然而，關(guān)于IL-9在急性腦梗死中的作用還有諸多不確定性。一方面，在ACI的不同時(shí)相細(xì)胞因子的水平也會(huì)有不同變化。已有研究證實(shí)，在急性缺血性腦卒中后12個(gè)月IL-9處于低水平，且這種低水平的IL-9與患者的卒中后疲勞現(xiàn)象存在相關(guān)關(guān)系[14]。另一方面，IL-9/IL-9R系統(tǒng)可能參與大腦皮質(zhì)層神經(jīng)元的一種新的內(nèi)源性抗凋亡機(jī)制，從而對(duì)腦細(xì)胞有一定的保護(hù)作用，且能一定程度的抵抗壓力引起的神經(jīng)損傷[15]。因此，要確定IL-9急性腦梗死中的作用，還需要更多堅(jiān)實(shí)的研究和有力的證據(jù)。

一直以來(lái)，ACA被認(rèn)為是急性腦梗死的誘因之一，但其與急性腦梗死的關(guān)系并未引起廣泛研究。本研究中我們采用ELISA法，檢測(cè)到急性腦梗死組患者的抗心磷脂抗體陽(yáng)性率較健康對(duì)照組高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與目前抗心磷脂抗體的研究現(xiàn)狀是一致的。近年來(lái)，隨著溶栓治療和腦卒中中心的開(kāi)展普及，抗心磷脂抗體作為一種血栓促進(jìn)性因子，在急性腦梗死中的作用和角色逐漸受到了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。尤其是國(guó)內(nèi)許多學(xué)者在腦梗死患者的外周血中均檢測(cè)到高水平的抗心磷脂抗體[16]。國(guó)外許多相關(guān)研究表明腦梗死的發(fā)生和抗心磷脂抗體相關(guān)，有研究顯示，在沒(méi)有其他的凝血功能紊亂誘發(fā)因素的腦梗死患者中，有6%～25%的個(gè)體檢測(cè)到抗心磷脂抗體的存在，主要包括狼瘡抗凝物、抗心磷脂抗體、抗-β2糖蛋白I抗體[17]。抗心磷脂抗體陽(yáng)性患者的頸動(dòng)脈超聲檢查顯示，頸動(dòng)脈有較厚的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊存在[18]，是目前較為直觀的證據(jù)。除了ACA已知的引發(fā)動(dòng)脈粥樣斑塊形成的作用，還有研究發(fā)現(xiàn)，ACA陽(yáng)性患者若合并有丙型肝炎病毒感染，會(huì)增加急性腦梗死的意外風(fēng)險(xiǎn)[19]。

目前已有大量文獻(xiàn)證實(shí)，Hcy在急性腦梗死患者中的血清水平升高，Hcy水平的升高與腦梗死的形成、腦梗死的復(fù)發(fā)、梗死后軀體功能障礙的預(yù)判，尤其與腦梗死患者大血管動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成，均具有顯著的相關(guān)性。此外，Hcy在人體的血管調(diào)節(jié)異常和認(rèn)知功能損傷中均發(fā)揮一定的作用。有研究表明，高水平的Hcy會(huì)增加心腦血管意外的風(fēng)險(xiǎn)，且預(yù)后差。Hcy水平的升高還可以預(yù)測(cè)評(píng)估癡呆的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，而這種風(fēng)險(xiǎn)是獨(dú)立于腦部小血管病變和其他血管風(fēng)險(xiǎn)因子之外的[20]。最新研究發(fā)現(xiàn)，高水平的Hcy在急性腦梗死中并非獨(dú)立致死因素，但卻與女性腦卒中患者5年死亡高風(fēng)險(xiǎn)有相關(guān)性[21]，提示臨床加強(qiáng)女性腦卒中后的血清Hcy檢測(cè)，為預(yù)后提供依據(jù)。

本研究中我們將急性腦梗死患者的Hcy水平與其相應(yīng)的NIHSS評(píng)分進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析，我們并沒(méi)有得到預(yù)期中二者的相關(guān)關(guān)系。近幾年國(guó)內(nèi)也有研究得出過(guò)與我們結(jié)論不相符的結(jié)果，經(jīng)過(guò)分析，腦梗死患者的Hcy水平與其相應(yīng)的NIHSS評(píng)分是呈顯著相關(guān)關(guān)系的。我們認(rèn)為可能的原因主要有以下幾方面：一方面，本研究中納入研究的對(duì)象為急性腦梗死患者，在患者入院診治的第一時(shí)間內(nèi)抽取外周靜脈血，在疾病發(fā)生的早期時(shí)相，Hcy水平可能并沒(méi)有達(dá)到預(yù)期，但是其水平與健康對(duì)照組相比還是有顯著性差異的。另一方面，不同實(shí)驗(yàn)室采用的Hcy檢測(cè)試劑的廠家不同，得到的Hcy數(shù)值也不盡相同。總之，關(guān)于Hcy在急性腦梗死中的作用，還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究確證。

綜上所述，IL-9為急性腦梗死的檢測(cè)治療提供新方向，聯(lián)合ACA和Hcy監(jiān)測(cè)，可為不同人群提供個(gè)體化治療意見(jiàn)，最大限度降低急性腦梗死對(duì)患者的生命安全和生命質(zhì)量的威脅。

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（收稿日期：2018-06-05）