七葉通脈膠囊對大鼠腦缺血再灌注模型的影響

鄭曉嬌，丁 濤，劉 博，王 鑫，溫富春，宋俐霏，徐惠波*

（1.吉林省中醫藥科學院，長春 130012；2.吉林大學，長春 130012）

七葉通脈膠囊是用于治療缺血性腦中風瘀血阻絡證的原中藥五類新藥，已獲得臨床研究批號。研究表明，七葉通脈膠囊能顯著地預防大鼠局灶性中動脈腦缺血的發生，減小缺血面積，降低缺血程度；降低不完全性腦缺血大鼠腦指數、腦水腫程度及腦血管通透性，保護腦組織；同時對血瘀大鼠具有明顯的活血化瘀作用，改善血液粘度，延長出凝血時間等。為了更好的指導臨床用藥，本文考察七葉通脈膠囊對大鼠腦缺血再灌注模型體外血栓、血小板聚集、血液流變性的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物及飼養環境 SD大鼠，體質量約300～320 g，雄性；動物來源：北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證號SCXK（京）2012-0001；飼養環境：屏障系統，室溫（22±2）℃，濕度（55±5）%。

1.1.2 試驗藥物 七葉通脈膠囊，批號：20150625，吉林省中醫藥科學院提供。血塞通片，批號：150328，由云南維和藥業股份有限公司提供。

1.1.3 試劑 水合氯醛（批號：13622），天津市光復精細化工研究所提供；枸櫞酸鈉（批號：20121116），北京化工廠提供；二磷酸腺苷（ADP）（批號：091M70002V），大連美侖生物技術有限公司；肝素注射液（批號：150625），常州千紅生化制藥股份有限公司生產。

1.1.4 儀器及備品 MCAO栓線（型號：2838-A5），北京西濃科技有限公司生產；全自動血流變快測儀）型號：FASCO-3010），重慶大學維多生物工程研究所生產；血液凝聚儀（型號：LBY-NJ2），北京普利生儀器有限公司生產；體外血栓形成儀（型號：GX-964），北京醫療設備廠生產。

1.2 方法

1.2.1 分組給藥 實驗前取240只大鼠置于動物室中適應2 d，按體重隨機分為6組，分別為：假手術組，腦缺血再灌注（MCAO）模型組（簡稱模型組），血塞通（42 mg/kg）組（簡稱血塞通組），七葉通脈膠囊高劑量（42 mg/kg）組（簡稱高劑量組），中劑量（21 mg/kg）組（簡稱中劑量組），低劑量（10.5 mg/kg）組（簡稱低劑量組）。動物按上述劑量分別灌胃給藥，1次/d，連續7 d，假手術組和模型組同時給予同體積蒸餾水（10 mg/kg）。

1.2.2 大鼠腦缺血再灌注模型制備 末次給藥30 min后，動物按體重（10 mg/kg）腹腔注射3%水合氯醛麻醉，將麻醉后的大鼠仰臥位固定，頸部備皮，皮膚消毒。在大鼠頸部正中切開皮膚，分離皮下組織，暴露出右側頸總動脈（CCA）、頸外動脈（ECA）和頸內動脈（ICA）。用微動脈夾暫時夾閉右側頸總動脈和頸內動脈，在右頸外動脈距離分叉處2～3 mm處結扎。用眼科剪將右側頸外動脈近心端剪一小口，輕輕拉動右側頸外動脈，使其與右側頸內動脈成一直線，調整栓線角度，插入栓線，移去右側頸內動脈的微動脈夾，緩慢推動栓線，將栓線送入右側頸內動脈有阻力處（約18～20 mm），阻斷大腦中動脈（MCA）的岔口處，在右側頸外動脈剪口處結扎，移去右側頸總動脈夾閉的微動脈夾，并開始計時[1]。術后消毒，縫合皮膚，于計時開始后2 h緩慢抽出栓線進行再灌注22 h。假手術組只進行剝離右側頸總動脈（CCA）、頸外動脈（ECA）和頸內動脈（ICA），不進行栓塞。大鼠術后均正常飼養。

1.3 測定指標

1.3.1 對腦缺血再灌注損傷大鼠體外血栓形成的測定 在缺血2 h再灌注22 h后，每組隨機取10只大鼠，腹主動脈取血1.8 mL，注入硅化塑膠管中，將塑膠管兩端接緊密閉，置于體外血栓形成儀中，37℃恒溫勻速旋轉15 min，取出，傾出塑膠管中血液，置于濾紙上，吸凈血栓表面血跡，測量血栓長度，稱量濕重；然后將血栓置于坩堝內，于 80℃的烤箱中干燥至恒重后，稱干重。

1.3.2 對腦缺血再灌注損傷大鼠血小板聚集率的測定 在缺血2 h再灌注22 h后，每組隨機取10只大鼠，腹主動脈取血3.6 mL，用3.8%枸櫞酸鈉抗凝，1 000 r/min離心5 min，分離出富血小板血漿，再以3 000 r/min離心10 min，取上清液得到貧血小板血漿。取富血小板血漿0.2 mL于比濁管內，以貧血小板血漿調透光度，二磷酸腺苷（ADP）作誘導劑，用血液凝聚儀檢測富血小板血漿中血小板在1 min、3 min、5 min的聚集率及5 min內最大聚集程度。

1.3.3 對腦缺血再灌注損傷大鼠血液流變性的測定 在缺血2 h再灌注22 h后，每組隨機取10只大鼠，將大鼠腹主動脈取血4.5 mL，加肝素 0.5 mL抗凝，采用全自動血液流變儀進行全血黏度（高、中、低切），測試完畢后的血樣，置于離心機中3 000 r/min離心10 min，抽取血漿，再在全自動血液流變儀上測定血漿黏度。

2 結果

2.1 七葉通脈膠囊對腦缺血再灌注損傷大鼠體外血栓形成的影響 見表1。

2.2 七葉通脈膠囊對腦缺血再灌注損傷大鼠血小板聚集率的影響 見表2。

2.3 七葉通脈膠囊對腦缺血再灌注損傷大鼠血液流變性的影響 見表3。

表1 七葉通脈膠囊對腦缺血再灌注損傷大鼠血栓形成的影響（± s ，n = 10）

表1 七葉通脈膠囊對腦缺血再灌注損傷大鼠血栓形成的影響（± s ，n = 10）

注：與模型組比較，# P＜0.05，## P＜0.01

組 別 劑量/（mg/kg） 血栓濕重/g 血栓干重/g 血栓長度/cm假手術組 - 0.10±0.011## 0.011±0.014## 1.23±0.33##模型組 - 0.14±0.032 0.045±0.020 1.73±0.29高劑量組 42 0.10±0.031# 0.011±0.011## 1.24±0.31##中劑量組 21 0.11±0.022# 0.022±0.016# 1.36±0.29#低劑量組 10.5 0.12±0.030 0.018±0.014## 1.40±0.27#血塞通組 42 0.11±0.012# 0.011±0.006## 1.23±0.22##

表2 七葉通脈膠囊對腦缺血再灌注損傷大鼠血小板聚集率的影響（± s ，n = 10） %

表2 七葉通脈膠囊對腦缺血再灌注損傷大鼠血小板聚集率的影響（± s ，n = 10） %

注：與模型組比較：# P＜0.05，## P＜0.01

組 別 劑量/（mg/kg） PAG1 PAG3 PAG5 MPAG假手術組 - 21.83±7.24## 22.28±10.27## 19.93±14.39## 30.48±12.17##模型組 - 54.56±2.31 74.30±19.37 77.31±22.91 75.67±15.53高劑量組 42 35.00±7.43## 42.86±10.85## 38.67±13.23## 48.23±14.22##中劑量組 21 33.03±7.38## 40.38±14.42## 39.19±20.20## 45.73±12.03##低劑量組 10.5 37.80±9.77# 52.04±16.80# 49.94±19.16## 55.09±17.95##血塞通組 42 30.79±6.20## 40.45±9.55## 36.77±16.66## 40.60±12.77##

表3 七葉通脈膠囊對腦缺血再灌注損傷大鼠血液流變性的影響（± s ，n = 10） mPa.s

表3 七葉通脈膠囊對腦缺血再灌注損傷大鼠血液流變性的影響（± s ，n = 10） mPa.s

注：與模型組比較：# P＜0.05，## P＜0.01

組 別 劑量/（mg/kg） 高切全血粘度 中切全血粘度 低切全血粘度 血漿粘度假手術組 - 4.72±0.74## 5.45±0.82## 10.81±1.66## 1.44±0.13##模型組 - 5.72±0.57 6.80±0.71 13.69±1.37 1.58±0.10高劑量組 42 5.27±0.29# 6.23±0.36# 12.53±0.72# 1.55±0.12中劑量組 21 5.23±0.66 6.18±0.82 12.40±1.59 1.46±0.14#低劑量組 10.5 5.25±0.47# 6.20±0.59# 12.40±1.21# 1.48±0.11#血塞通組 42 5.20±0.46# 6.15±0.58# 12.37±1.25# 1.60±0.11

3 討論

七葉通脈膠囊生產工藝獨特（獲得1項發明專利），由大孔吸附樹脂技術集成創新提取有效部位，該有效部位既保留了總皂苷，同時還含有黃酮類化合物。

缺血性腦中風又稱腦梗死，主要是由于血液粘滯阻塞等多種原因引起的腦組織局部動脈的血流灌注減少或中斷、導致腦組織缺血、缺氧而軟化、壞死。依據局部腦組織發生缺血壞死的機制可將腦梗死分為3種主要病理生理學類型，腦血栓形成，腦梗塞和血流動力學機制所致的腦梗死，其臨床表現及病機多樣性，使得其治法復雜多樣，多年來，普遍認為活血化瘀是中醫學的治療大法之一，清代血瘀證理論和活血化瘀法應用也得到了廣泛的認識，并將其應用到了中風癥的治療[2-4]。局灶性腦缺血模型比較接近人類腦梗塞發病或腦缺血以及缺血再灌注過程的病理生理變化、發病機制，線栓法制備MCAO模型以不開顱、損傷小、效果肯定，被廣泛引用。本次試驗則是制備大鼠腦中動脈缺血再灌注模型，通過體外血栓、血小板聚集和血液流變性來考察七葉通脈膠囊對缺血再灌注損傷模型的治療作用。結果可見，七葉通脈膠囊三給劑量組均使腦缺血再灌注模型大鼠的血栓濕重、干重、血栓長度顯著減小；降低1 min、3 min、5 min時血小板聚集率和最大聚集率；也能不同程度地降低高、中、低切的全血粘度和血漿粘度。

前期結果表明，七葉通脈膠囊能改善血瘀模型大鼠模型血液流變性、抑制血栓形成、抑制正常大鼠血小板聚集，起到一定地活血化瘀作用。結合本文的研究可見，活血化瘀作用可能也是七葉通脈膠囊治療腦缺血的作用機制之一。