微波消解-ICP-MS測定鹽酸黃酮哌酯片中重金屬含量

劉 晟，袁 莉

（1. 重慶市食品藥品檢驗檢測研究院，重慶 401121；2. 重慶市化學藥品質量控制與評價協同創新中心，重慶401121；3. 重慶華邦制藥股份有限公司，重慶 401121）

鹽酸黃酮哌酯是泌尿道解痙藥，目前國內上市有片劑和膠囊劑（規格均為0.1 g和0.2 g），片劑有10家生產企業，膠囊劑（目前廠家均未生產）有2家生產企業。近年，重金屬殘留造成的藥品不良反應的報道逐漸增多，2012年藥用膠囊鉻超標事件更是造成了重大影響，引起了監管部門的重視。2015年版中國藥典雖尚未對西藥制劑進行重金屬元素控制，藥品生產廠家可能分別對原輔料的重金屬進行控制，但由于實際生產中不按照申報工藝及SOP標準操作進行生產及生產設備、管道維護不力導致老化等，都可能引入重金屬，而制劑成品的出廠檢驗標準中往往未對重金屬進行檢測，因此有必要對西藥制劑中的重金屬進行檢測。為此，我們對鹽酸黃酮哌酯片劑中的As、Cd、Pb、Hg、Ni元素進行了分析。電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）[1]由于檢出靈敏、快速、準確，在藥品重金屬分析中越來越多地受到人們的重視。本文利用微波消解-ICP-MS測定了該藥中的As、Cd、Pb、Hg、Ni含量，本方法前處理簡單、快速、靈敏度高、重復性好，能實現多個有毒金屬元素的同步檢測，為該藥中有毒金屬元素的控制提供了有用的數據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 7700X電感耦合等離子體質譜儀（美國安捷倫公司）；CEM Mars 6-classic微波消解儀（美國CEM公司）；BHW-090-20趕酸器（上海博通公司）；Milli-Q超純水處理系統（美國密理博公司）。

1.2 試藥

鹽酸黃酮哌酯片劑（共107批，購自深圳海王藥業等6家公司）；多元素（As、Cd、Pb、Ni）混合標準液（100 mg/L，批號151034），Hg標準溶液（1000 mg/L，批號159020-2），購自國家有色金屬及電子材料分析測試中心；Ge、In、Bi混合內標溶液（100 mg/L，批號5188-6525），Li、Mg、Y、Ce、TI、Co混合調諧標準溶液（1 μg/L，批號5185-5959），購自美國Agilent公司；硝酸為優級純（Avantor公司，批號142235）；水為超純水。

2 方法與結果

2.1 ICP-MS儀器條件

等離子氣流量15.0 L/min；蠕動泵轉速0.10 r/s；霧化室溫度2 ℃；輔助氣體和載氣流量均為0.8 L/min；He氣流量5 ml/min；射頻功率1550 W；數據采樣模式：跳峰采集模式；采樣深度8 mm；重復次數：3次；掃描次數100次。

2.2 溶液的配制

2.2.1 內標溶液 取Ge、In、Bi混合內標溶液適量，1%硝酸制成500 μg/L混合內標溶液。

2.2.2 標準曲線溶液 精密量取多元素混合標準液適量，1%硝酸制成0，1，5，10，20，50，100 μg/L混合標準曲線溶液。再精密量取Hg單元素標準溶液適量，1%硝酸制成0，0.2，0.5，1.0，1.5，2.0，4.0 μg/L Hg標準曲線溶液。

2.2.3 供試品溶液 稱取樣品約0.5 g，精密稱定，置于四氟乙烯消解罐內，加硝酸7 ml，旋緊消解罐蓋，室溫下放置2 h，再微波消解1 h（參數見表1）；冷卻，轉移至25 ml量瓶中，用1%硝酸定容至刻度，搖勻。同法制備試劑空白。

表1 微波消解參數

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系與范圍 按2.1項條件將標準曲線溶液和內標溶液同時注入ICP-MS質譜儀，測定并繪制標準曲線（X為溶液質量濃度，Y為元素與內標響應值比值），結果見表2。由表2可見，各元素線性關系良好[2]。

表2 各元素的線性關系、檢出限和定量限

2.3.2 檢出限和定量限 按2.1項條件連續測定1%硝酸11次，計算各元素的標準偏差，分別以3倍和10倍標準偏差除以對應元素標準曲線的斜率，計算其儀器檢出限和定量限，結果見表2。

2.3.3 加樣回收率試驗 稱取樣品（深圳海王藥業，批號：20151001）約0.5 g，精密稱定，分別精密加入低、中、高質量濃度的混合標準溶液（Ni等4種元素分別為125，250，375 ng，Hg分別為12.5，25，37.5 ng），按2.2.3項方法消解，定容至25 ml，每個質量濃度平行測定3份，計算回收率，結果見表3，符合相關規定[2]。各元素回收率的RSD均小于5.0%，符合殘留檢測要求。

2.3.4 重復性和中間精密度試驗 由于樣品中部分元素的含量低于檢出限，故采用加入混合標準溶液的方式進行重復性和中間精密度試驗。稱取樣品（深圳海王藥業，批號：20151001）約0.5 g，精密稱定，精密加入0.5 mg/L多元素（Ni、As、Cd、Pb）混合標準溶液0.5 ml和0.05 mg/L Hg標準溶液0.5 ml，按2.2.3項方法進行消解，定容至25 ml，平行測定6份，得到重復性測定結果，各元素含量的RSD均小于5%；連續測定3 d，得到中間精密度測定結果，各元素含量的RSD均小于10%，表明該方法重復性和中間精密度良好，符合相關規定[2]。

表3 平均回收率/%

2.3.5 耐用性試驗 分別改變等離子體氣流量為15.0±0.2 L/min，蠕動泵轉速為0.10±0.02 r/s，霧化室溫度為2±0.2 ℃，輔助氣體流量為0.8±0.02 L/min，載氣流量為0.8±0.02 L/min，He氣流量為5±0.2 ml/min，射頻功率為1550±20 W，采樣深度為8±0.2 mm，測定同一樣品溶液，各元素含量的RSD均小于5%，表明該方法耐用性良好。

2.4 含量測定

取鹽酸黃酮哌酯片（6家公司107批），按2.2.3項方法制備供試品溶液，注入ICP-MS質譜儀，標準曲線法計算含量，每批樣品平行測定2次，結果見表4。

表4 含量測定結果/μg·g-1

3 討論

3.1 內標法的校正

本研究采用內標法[3]，采用質量濃度均為500μg/L的Ge、In、Bi混合溶液作為內標。由于采用ICP-MS進行金屬元素分析時，容易受到氧化物和多原子離子的干擾，樣品溶液中不同元素的質量濃度的差異也易引起誤差，而在線內標法可有效監控和校正信號漂移，有效校正誤差。

3.2 消解方法的優化

本研究前期采用的預消解方法為加入硝酸后，不加蓋，130 ℃預消解30 min。方法學驗證時，Hg的回收率＜20%，后分析發現Hg在不加蓋預消解時已揮發。因此，將預消解步驟去掉，加入硝酸后，旋緊消解罐蓋直接微波消解。方法學驗證時，Hg的回收率已符合要求，但在消解過程中偶爾會出現爆管，存在安全隱患。經進一步的優化，預消解方法為加入硝酸后，旋緊消解罐蓋，在室溫下放置2 h。這樣既避免預消解時Hg的損失，又避免由于直接微波消解導致爆管的情況。

3.3 試驗結果分析

國外，ICH Q3D元素雜質指南對單一重金屬元素按毒性大小進行分類，并按單一元素進行限度控制，歐洲藥典委員會和美國藥典委員會也計劃在即將實施的新版藥典中采用ICH Q3D元素指南，取代現行美國藥典（USP）、歐洲藥典中測定重金屬總量的檢查方法。該指南自2016年6月起在歐盟范圍內對新上市許可申報開始生效，自2017年12月起對已批準的藥品生效。覆蓋了24種金屬（分為1類、2A類、2B類和3類），并給出了其在藥品中的允許日暴露量（PDE）。該指南并不僅局限于原料藥和輔料中的試劑和催化劑，同時也考慮到了所有生產中可能引入的情況，包括生產設備、水和容器密閉系統。其中第1類As、Cd、Hg和Pb具有較高的毒性，無論是否被有意加入，都需要進行風險評估。國內，中國藥典2015年版一部（中藥）對部分中藥材中的單個重金屬進行控制，但中國藥典2015年版二部（西藥）未對西藥中的單個重金屬進行控制，中國藥典2015年版四部0821重金屬檢查法測定的是原料藥的重金屬總量，不涉及制劑，對單一重金屬缺乏有效控制。為逐步與國際先進理念接軌，揭示藥品重金屬殘留現狀和風險，有必要建立能同時準確測定西藥制劑中多種重金屬元素的方法，并對藥品進行有針對性考察，為企業工藝改進和行政監管提供數據支持。

本次抽驗的107批樣品測定值均低于中國藥典2015年版一部[4]、ICH Q3D元素雜質指導原則[5]和 USP 38[6]中的Ni、As、Cd、Hg、Pb限度值，表明目前市面上的該藥品生產質量穩定、可控。同時，該方法的建立也為其他上市西藥制劑的風險監控提供了參考方法。