HPLC測定阿司匹林中醋酸殘留量

白秀萍，董玉杰*

（1. 淄博市食品藥品檢驗研究院，山東 淄博 255086；2. 山東金城生物藥業有限公司，山東 淄博 255000）

阿司匹林（aspirin）作為一種解熱鎮痛藥，歷史悠久，應用廣泛。阿司匹林大多通過水楊酸酰化反應獲得，反應中使用原料醋酐[1-2]，醋酐與水反應可形成醋酸，可能作為副反應雜質存在于阿司匹林成品中。醋酸作為第三類溶劑限值為0.5%[3-4]，應對其進行定量分析。

1 儀器與試藥

LC-2010A 高效液相色譜儀（日本島津）；阿司匹林（山東新華制藥，批號：0702238，0702250，0702251，0702256，0702258）；甲醇（分析純，天津四友精細化學品公司）；乙醇（分析純，國藥集團）；磷酸（分析純，國藥集團）；冰醋酸（分析純，萊陽經濟技術開發區精細化工廠）。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取冰醋酸0.5 g（約0.5 ml）于100 ml量瓶中，用甲醇稀釋到刻度，再取以上溶液1.00 ml，用甲醇稀釋至50 ml，得100 μg/ml醋酸對照品溶液。

2.1.2 樣品溶液的制備 精密稱取阿司匹林樣品約0.2 g，用甲醇溶解并稀釋至10.0 ml。

2.2 色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；梯度洗脫（方案見表1），流動相A：pH 3.0磷酸鹽緩沖液:甲醇=950:50，流動相B：甲醇；檢測波長：210 nm；流速：1.2 ml/min；靈敏度：1.0吸收單位；進樣量：10 μl。

表1 梯度洗脫方案

2.3 計算方法

取5份對照品溶液，連續進樣，記錄色譜圖，主峰面積的相對標準偏差（RSD）應不大于2.0%。分別取空白溶劑（甲醇）和樣品溶液，各進樣10μl，記錄色譜圖。外標法計算醋酸的殘留量。計算公式如下。

式中At為樣品峰面積，Wt為樣品稱樣量，Ar為對照品峰面積，Wr為對照品稱樣量。

2.4 專屬性試驗

用甲醇為空白溶劑，進樣，沒有干擾峰出現，表明空白溶劑不干擾樣品測定；取對照品溶液，進樣，測得主峰保留時間為3.631 min；再取阿司匹林樣品溶液進樣，無干擾峰出現，證明阿司匹林樣品不影響醋酸含量的檢測。取0.2 g阿司匹林樣品，用醋酸對照品溶液稀釋至10 ml，進樣，醋酸與阿司匹林峰主峰分辨率為21.6，表明二者不存在相互干擾，專屬性測試圖譜見圖1。

圖1 專屬性測試圖譜

2.5 系統適用性試驗

取6份100 μg/ml醋酸對照品溶液，每份0.5 ml，連續進樣，記錄色譜圖，系統適用性試驗結果見表2。主峰面積的RSD小于2.0%，表明系統適用性試驗符合要求。

表2 系統適用性試驗結果

2.6 檢測限和定量限

取適量100 μg/ml醋酸對照品溶液，用甲醇稀釋成含醋酸5 μg/ml的測試液，取兩份，分別進樣，記錄色譜圖，主峰高是基線噪聲峰高的10倍，確定定量限為5 μg/ml（0.025%）。同法制備含醋酸2 μg/ml的測試液，取兩份進分別樣，得到的主峰高是基線噪聲峰高的3倍，確定檢測限為2 μg/ml（0.01%）。

2.7 線性范圍

精密稱定冰醋酸0.5 ml（0.5005 g），加入100 ml量瓶，用甲醇稀釋至刻度，再分別用甲醇稀得到含醋酸濃度分別為5，10，50，80，100，120 μg/ml的測試液。每個濃度各取兩份，分別進樣檢測。結果表明醋酸在5～120 μg/ml濃度范圍內線性關系良好。回歸方程為：Y=279X-108，r=0.999 99。

2.8 準確度

分別制備濃度為80，100，120 μg/ml的酸酸對照品溶液。取6份100 μg/ml醋酸對照品溶液，每份0.5 ml，連續進樣，進行系統適用性測試，符合規定后，再分別取80，100，120 μg/ml的酸酸對照品溶液各3份，分別進樣，計算醋酸含量和回收率，結果見表3。結果表明回收率符合要求。

表3 回收率結果

2.9 中間精密度

精密稱定冰醋酸約0.5 ml（0.5012 g），不同操作者（操作者A和操作者B）分別按2.1.1項方法制備對照品溶液、配制流動相，使用不同高效液相色譜儀（LC-2010A，LC-2010A HT）和不同色譜柱，在不同時間進樣。計算所得主峰峰面積的RSD值。測定結果見表4。結果顯示，中間精密度符合要求。

表4 中間精密度測試結果

2.10 樣品測定

用驗證的方法檢測5批阿司匹林品，結果見表5。

表5 樣品檢測結果

3 討論

原料藥中的殘留溶劑是雜質的主要來源之一，是影響藥品安全性的關鍵項目之一，必須確保溶劑殘留量在可接受標準范圍內。但中國藥典各品種項下均未作出具體要求，因產品中殘留溶劑需根據生產工藝中使用、產生或污染的溶劑類別進行評估，再確定是否列入產品質量標準，中國藥典在附錄中給出了常用溶劑的殘留限度要求，殘留溶劑的測定大多采用頂空氣相色譜分析[4]。本文探索使用HPLC檢測殘留溶劑，并通過方法學驗證，用該方法對5批阿司匹林樣品進行測定，結果表明該法靈敏度高、精密度好，可用于阿司匹林中醋酸殘留的測定。